分子生物学参考复习题

分子生物学

1染色体：是真核细胞在有丝分裂或减数分裂时遗传物质存在的特定形式；是间期细胞染色质结构紧密包装的结果；是染色质的高级结构，仅在细胞分裂时才出现。

2结构基因：基因组中，能转录出RNA的DNA区段。

3C值：基因组的大小常以其DNA含量表示。单倍体基因组中的全部DNA量称为C值。

4启动子：能够被RNA聚合酶识别并结合并起始转录的核苷酸序列。典型的启动子包括TATA盒，CAAT盒和GC盒。

5增强子：是一段短的DNA序列，其中含有多个作用元件，可以特异性与转录因子结合，增强基因的转录活性。增强子可以位于基因的任何位置，增强子的功能与其位置和方向无关。

6转录组学：指一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。转录组学是从RNA 水平研究基因表达的情况。

7操纵子：是指数个功能上相关联的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵序列）和下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反子。

8DNA损伤/突变：是指个别dNMP（脱氧单磷酸核苷）残基以至片段DNA在结构、复制或表型功能的异常变化。

9SNP：是指出现在基因组DNA分子的特定位置的单个核苷酸的置换。

10信号转导：是指细胞外的讯息，经过一系列的生化反应之后，活化了细胞内部的讯息，进而使细胞产生一些反应。

11RNA剪接：从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个连续的RNA分子的过程。

12DNA重组：不同来源的DNA分子可以通过末端共价连接（磷酸二酯键）而形成重新组合的DNA分子。这一过程称为基因重组。

13细菌转化：是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表现型发生相应变化的现象。

14染色质：染色质是指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA 组成的线性复合结构，是间期细胞遗传物质存在的形式。

15反式作用因子：真核细胞内有大量的序列特异的DNA结合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因开放或关闭，称为反式作用因子。

16可变剪接：有些基因的一个mRNA前体通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点）产生不同的mRNA 剪接异构体，这一过程称为可变剪接(或选择性剪接)。

17密码子：是指信使RNA分子中每相邻的三个核苷酸编成一组，在蛋白质合成时，代表某一种氨基酸的规律。

18顺式作用原件：指与结构基因串联的特定DNA序列，是转录因子的结合位点，它们通过与转录因子结合而调控基因转录的精确起始和转录效率。

19受体：是细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合的成分。它能把识别和接受的信号正确无误地放大并传递到细胞内部，进而引起生物学效应的特殊蛋白质，个别是糖脂。

20配体：能与受体呈特异性结合的生物活性分子则称配体(ligand)。如类固醇激素、甲状腺素等。

21DNA变性：是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，双链变成单链，使核酸的天然构象和性质发生改变，但不涉及其一级结构的改变。

22荧光实时定量PCR：是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

23cDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录的mRNA 全部经反转录形成的CDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。

24基因组：指细胞内所有遗传信息，这种遗传信息以核苷酸序列形式存储。细胞或生物体中，一套完整的单倍体的遗传物质的总和称为基因组。

25基因表达：基因表达是指基因指导下的蛋白质合成过程。

26原癌基因：指存在于生物正常细胞基因组中的癌基因。正常情况下，存在于基因组中的原癌基因处于低表达或不表达状态，并发挥重要的生理功能。但在某些条件下，如病毒感染、化学致癌物或辐射作用等，原癌基因可被异常激活，转变为癌基因，诱导细胞发生癌变。

1、DNA突变的类型有哪些？

基因突变指基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象。主要类型碱基置换突变、移码突变、缺失突变、插入突变。

①碱基置换突变：指DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变，也称为点突变。

②移码突变：指DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或3的倍数）碱基对时，造成插入或丢

失位点以后的一系列编码顺序发生错位的一种突变。

③缺失突变：基因也可以因为较长片段的DNA的缺失而发生突变。

④插入突变：一个基因的DNA中如果插入一段外来的DNA，那么它的结构便被破坏而导致突变。

2、简述2-DE的实验原理和基本实验步骤

原理：①向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小，在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处；

②向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。

操作步骤：样品制备，第一向分离，第二向分离，修饰和加工。

3、简述cDNA文库构建的基本过程

cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。

经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。

基本步骤包括：

RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定),要构建一个高质量的 cDNA 文库,获得高质量的 mRNA 是至关重要的,所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心。由于 RNA 酶存在所有的生物中,并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境,因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。

合成cDNA。在获得高质量的 mRNA 后,用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链, cDNA 第2链的合成。

合成接头的加入、将双链 DNA 克隆到载体中去、分析 cDNA 插入片断,扩增 cDNA 文库、对建立的 cDNA 文库进行鉴定。常规用的是λ噬菌体作为载体,这是因为λDNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端,可用来构建柯斯质粒,这种质粒能容纳大片段的外源 DNA。

4、简述PCR技术的基本原理。

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

5、简述大肠杆菌乳糖操纵子结构及阻遏蛋白的调控模式。

乳糖操控子是大肠杆菌中控制β半乳糖苷酶诱导合成的操纵子。包括调控元件P(启动子)和O(操纵基因)，以及结构基因lacZ(编码半乳糖苷酶)、lacY(编码通透酶)和lacA(编码硫代半乳糖苷转乙酰基酶)。

①无乳糖时，调节基因lacI 编码阻遏蛋白，与操纵基因O 结合后抑制结构基因转录,不产生代谢乳糖的

酶。

②只有乳糖存在时,乳糖可与lac阻遏蛋白结合，而使阻遏蛋白不与操纵基因结合，诱导结构基因转录，

代谢乳糖的酶产生以代谢乳糖。

③葡萄糖和乳糖同时存在时，葡萄糖的降解产物能降低cAMP含量，影响CAP与启动基因结合，抑制结构

基因转录，抑制代谢乳糖的酶产生。

6、简述蛋白质合成的遗传密码基本性质

①方向性：密码子的阅读方向是5到3端。

②简并性：除蛋氨酸和色氨酸只有一个密码子外，其它氨基酸都有好几组密码子。

③通用性：无论是病毒还是原核生物、真核生物，都共同使用一套密码字典，但有例外。

④连续性：在mRNA上，从起始密码子到终止密码子，密码子的排列是连续的，既没有重叠也没有间隔。

⑤有起始密码子和终止密码子。

⑥变偶性：密码的简并性只涉及第三位碱基，即同一个氨基酸的不同密码子中，前两个碱基均相同，第三

个不同。