PADRE-TGFβ1融合蛋白的原核表达及鉴定

转 化 生 长 因 子 １ （ ＧＦ Ｉ 是 由 两 个 结 构 相 同 、 ７ Ｔ １） １ ７
１ 材 料 与 方 法
１ 材 料 ．１
分 子质 量 为 １ ． ｕ的亚单 位 借助 分 子 间 的二 硫 键 ２ ５ｋ
连 接而 成 的二 聚体 。正 常 生 理 水 平 的 Ｔ Ｉ ＧＦ １在 调 ３
机体 免疫 耐受 等方 面 的作用 奠 定基 础 。
剂 盒 、 分 子 质 量 蛋 白质 标 准 为 天 根 生 化 科 技 （ 低 北 京 ）有 限公 司产 品 ； ＶＤＦ转 移 膜 为 鼎 国生 物 科 技 Ｐ
有 限 公 司 产 品 ； ＴＧＦ Ｉ 抗 体 及 Ｄ 抗 —１ ３ ＡＢ 显 色 试 剂 盒
１ １ １ 菌株 及 载体 Ｅ．ｏｉ Ｌ １ ＤＥ ）转 化感 受 ． ． ｃｌ Ｂ ２ （ ３
控 免疫 反应 强度 ， 止 免 疫 反应 过 强 而 造 成 自身 组 防
织 的免疫 损 伤方 面具 有重 要 作用 ［ 。但 是过Βιβλιοθήκη Baidu高 水 平 １ ］
的 Ｔ Ｉ ＧＦ３ 造 成 免 疫 系 统 处 于 抑 制 或 耐 受 状 态 ， １常 为
动 物 医 学 进 展 ，０ Ｉ３ （ ） ６ ５ ２ １ ， ２ ３ ： ｌ６
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｃ ｎｅ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄｉ ｉ
Ｐ ＡＤＲＥ ＴＧＦＩ — ３ １融 合 蛋 白 的 原 核 表 达 及 鉴 定
许道 军 ， 兴龙 ， 雪燕 ， 余 刘 薛立群
制 备 及 应 用 奠 定 了基 础 。
关键 词 ： 生长 因子 ｔ ； 用型 辅助 性 Ｔ淋 巴细胞 表位 ； 合蛋 白； 核表 达 转 ？ 通 ｌ 融 原
中 图 分 类 号 ： ８ Ｑ７ ６ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ７ ５ ３ （ ０ １ ０ — ０ １０ １ ０ —０ ８ ２ １ ） ３ ０ ６ — ５
ＴＧＦ］ 列 ， 成 产 物 克 隆 至 ｐ Ｔ ２ ａ 质 粒 。将 构 建 好 的 质 粒 转 化 至 Ｅ ｃｌ Ｂ ２ （ Ｅ ） 受 态 细 胞 ， ￣ Ｉ序 合 Ｅ 一８ ．ｏｉ Ｌ １ Ｄ ３ 感 经 ｌｍｍｏ／Ｌ Ｉ ＴＧ 诱 导 表 达 ， 达 产 物 经 Ｓ Ｓ Ｐ ｌ Ｐ 表 Ｄ — ＡＧＥ 分 析 ， 约 ｌ ． ７ｋ 在 ９ ８ ｕ处 出现 与 预 期 目的 蛋 白 一 致 的 新 蛋 白 条 带 ， ｅ ｔｒ ｌｔ 定 结 果 显 示 ， 蛋 白 能 够 与 Ｔ Ｉ Ｗ ｓｅｎ ｂｏ 鉴 该 ＧＦ３ １抗 体 发 生 特 异 性 结 合 。 表 明 成 功 构 建 了 ｐ Ｔ２ 一 ＡＤＲ ～ Ｅ ８Ｐ Ｅ ＴＧＦ Ｉ 核 表 达 质 粒 ， 达 的 融 合 蛋 白 质 具 有 Ｔ １ ￣ 原 表 ＧＦ Ｉ的反 应 原 性 ， ＴＧ ￣ 自体 疫 苗 的 ７ 为 ＦＩ
病原 体 的持续性 感 染或 肿瘤 细胞 的免 疫 逃逸 提供 了 条件 Ｌ 。降低 ＴＧ １ ２ ］ Ｆ Ｉ的 含 量将 有 助 于 增 强 机 体 免 ７
疫 系统对 感染病 原 体或 肿瘤 的 免疫 反应 水平 。
本研究中， 应用 基 因工 程技 术来 制 备 ＴＧＦ Ｉ自 ７ １ 体疫 苗 ， 过 诱 导 机 体 产 生 抗 Ｔ １ 通 ＧＦ Ｉ抗 体 来 颉 颃 ￣ Ｔ １ ＧＦ Ｉ的生 理 功 能 ， 低 其 对 免 疫 系 统 的 抑 制 作 ７ 降 用 。考 虑 到 Ｔ １ ＧＦ Ｉ为 一 自身 蛋 白 ， 纯 的 Ｔ １ ７ 单 ＧＦ Ｉ ７ 不能有 效地 刺激 机 体 产 生 抗体 ， 因此 必 须 将 Ｔ １ ＧＦ Ｉ ７ 或其 片段 连接 到具 有 Ｔｈ细胞 表 位 的载 体 分 子 上 ， 才 能刺 激 机 体 有 效 的 免 疫 反 应 。本 研 究 选 择 Ｐ Ａ— Ｄ Ｅ（ 基 酸 序 列 为 ＡＫＦ Ｒ 氨 ＶＡＡＷＴＬ ＫＡＡＡ） 为 作 Ｔｈ细胞 表位 载体 分 子 ， Ｔ —１基 因通 过 联 接 序 与 ＧＦ ｔ ７ 列 连接后 构建 原 核 表 达 载 体 ， 在 大肠 埃 希 菌 中 进 并 行 融合蛋 白 的 原 核 表 达 ， 旨在 利 用 其 制 备 Ｔ — １ ＧＦ Ｊ ３ 自体 疫苗 ， 进一 步研 究 其 在 提 高 免 疫 水 平 及 打 破 为
态 细胞 为湖南 农 业 大 学 动 物 医 学 院 实 验 室制 备 ； 宿 主菌 ＤＨ５ ａ为 湖 南 农 业 大 学 动 物 医 学 院 实 验 室 保 存 ， Ｅ ２ ａ 载体 为 Ｎｏ ａ ｅ 公 司产 品。 ｐ Ｔ ８ ’ ｖｇ ｎ
１ ． 酶 和 试 剂 限 制 性 内 切 酶 Ｅ ｏ ．１ ２ ｃ Ｒ Ｉ和 Ｈｉ ｄ ｎ Ⅲ为 Ｆ ｒ ｎａ 公 司 产 品 ； ４ＤＮＡ 连 接 酶 为 Ｐ ｏ ｅｍｅ ｔｓ Ｔ ｒ— ｍｅ ａ公 司 产 品 ； 粒 提 取 试 剂 盒 、 ＮＡ 凝 胶 纯 化 试 ｇ 质 Ｄ
为 武汉博 士 德生物 科技 有 限公 司产 品 。
１２ 方 法 ．
１ ２ １ Ｐ ＲＥ ＴＧ １ ． ． ＡＤ — Ｆ Ｉ全 基 因 的 合 成 为 了 使 ７
Ｔ １ ＧＦ Ｉ的 Ｂ细胞 表位 不 受 通 用 型辅 助 性 Ｔ 淋 巴细 ７
（ 南农 业 大 学 动 物 医 学 院 ， 南 长 沙 ４ ０ ２ ） 湖 湖 １ １ ８
摘
要： 建 Ｐ 构 ＡＤＲ — Ｅ ＴＧＦ １ 核 表 达 质 粒 ， 对 其 进 行 诱 导 表 达 和 反 应 原 性 分 析 。 对 Ｐ ＲＥ、 接 Ｉ 原 ３ 并 ＡＤ 联
序 列 （ ｉ ｋ ｒ 及 ＴＧＦ Ｉ的基 因 序 列 进 行 密码 子 优 化 ， 用 全 基 因合 成 的 方 法 人 工 合 成 全 长 Ｐ Ｌｎ ｅ） ￣ 采 ＡＤＲＥ Ｌｉｋ ｒ — ｎ ｅ－