关于梅毒的实验室检测
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关于梅毒的实验室检测
成都商报在2007年5月9日第5版中有这样一篇文章—“是梅毒,是没‘毒’女大学生考警蹊跷被刷”。讲的是小梅在淮南市第一人民医院进行考警体检中被误诊(或是错诊)为梅毒的事。其报道中对梅毒的实验室检查部份的叙述存在一定程度的误导,因此我们针对梅毒的病原体、实验室检查及检验方法等相关内容进行了组稿。来进一步加深对梅毒实验室诊断的认识。
一、螺旋体的分类、寄生部位
螺旋体的分类及传播方式
二、生物学特性
梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种,人是其唯一宿主。直径0.1—0.15μm,全长7--8μm。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。
梅毒螺旋体主要有两种抗原:1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原,与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原,可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原,可刺激机体产生反应素,其与牛心肌的心脂质抗原发生反应,此法敏感性高,但有假阳性。
梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱,离体后1—2小时即死亡,对热和干燥特别敏感,在体外干燥环境下1—2小时或加1.5℃经1小即死亡。血液中4℃放置3天可死亡,因此4℃血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感,1%--2%石炭酸内数分钟就死亡。
梅毒的免疫属感染性免疫,有梅毒螺旋体感染时才有免疫力,一旦螺旋体被杀灭,其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应,体液免疫中有两种抗体:一种是梅毒特异性抗体,主要是IgG、IgM,对螺旋体有制动作用,当有补体存在时,可将其杀死和溶解,对机体的再感染有保护作用。另
一种是抗脂质抗体的反应素,为IgG和IgM的混合物,对机体无保护作用。
三、送检标本和检验方法
Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液,Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对Ⅰ期梅毒末期以后(大约感染3—4周以后)的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。
检验方法:
1、显微镜镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合Ⅰ
Ⅱ期梅毒的检查。(现已经不常用)
2、血清学试验包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类
1)非螺旋体抗体试验(NtrAT)用正常牛心肌脂质作为抗原,测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。
2)密螺旋体抗体试验(TrAT)采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原,测定血清中梅毒螺旋体特异抗体,特异性强,可用作梅毒证实试验。
试验方法分类
四、方法学比较
1.非螺旋体抗体试验(NtrAT)这类方法敏感性高,其抗体滴度与病变活动性有关,病灶出现后1-2周就可测出反应素,Ⅰ期梅毒阳性率约为70%,Ⅱ期梅毒阳性率可达100%,Ⅲ期梅毒阳性率较低,先天性梅毒阳性率可达
80%-100%,但此类试验特异性不高,常有假阳性反应。因此,在分析结果时应结合病史和临床症状,并做密螺旋体抗原试验加以确诊。
2.密螺旋体抗体试验(TrAT)
1)TPHA(梅毒螺旋体血凝试验)是一种间接血凝试验,以SRBC为载体,将梅毒螺旋体Nichols株,经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原,致敏SRBC,加入待检病人血清作间接血凝试验,具有敏感性高,快速,简便,易于观察等特点。
2)TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)与TPHA基本相同。
3)WB(免疫印迹试验)是分子水平的试验,本法综合了SDS-PAGE的高分辩力和ELISA的高特异性和敏感性,对梅毒的确诊,尤其对早期梅毒的确诊具有特殊的价值,对二期,三期梅毒的诊断率很高。
4)FTA-ABS(荧光密螺旋体抗体吸收试验)为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高,是Ⅰ期,Ⅱ期梅毒首先出现阳性反应的血清学试验,且病人经药物治疗后,反应仍不转阴,可用于确诊但不能用作疗效评价。
密螺旋体抗原试验的特异性虽强,但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病,也可有1%生物学假阳性存在。因此,这些试验的结果的判定,仍需结合临床资料来分析。
梅毒血清学试验假阳性的原因
原因非密螺旋体密螺旋体
抗体试验(NTrAT)抗体试验(TrAT)
自身免疫病疟疾
新近免疫接种皮肤病
心血管病
结核
麻风
静脉注射毒品病毒感染
热性病
妊娠
HIV感染
其他性传播病老年人+
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多次输血
莱娒病
地方性密螺旋体病原因不明
技术误差+
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根据后附论文“梅毒实验室诊断及评价”的资料显示RPR阳性率为94.2%,TRUST阳性率为93.0%, 4种非特异性检测方法敏感性均在95%左右。虽然从数据中看到用进口RPR试剂在对照血清组有10例的假阳性(占8.7%),看似较高。但其准确性也有91.22%,也是令人较满意的试剂。国产的RPR和TRUST在各项指标上的差异无统计学意义。因TRUST有操作简单,用时短,结果容易观察等特点被临床实验室广范的接受(卫生部门推存用RPR或VDRL)。
RPR、TRUST试剂对不同血清标本的检测结果
组别
例
数RPR(进口)
RPR(国
产)
TRUST 1TRUST2+-+-+-+-
对照血清11410104211221122112Ⅰ期梅毒血清26224224224224Ⅱ期梅毒血清32320320320320