新型抗HER2嵌合性抗原受体的构建及其体外、体内功能的评价
抗体制备技术的发展和医学应用
抗体制备技术的发展及其医学应用抗体是在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一类糖蛋白。
它是能与相应抗原特异的结合、产生各种免疫效应（生理效应）的球蛋白。
国际卫生组织将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的一类蛋白统一命名为免疫球蛋白，它与抗体都是指同一类蛋白质。
抗体的2条重链和2条轻链根据氨基酸序列变化程度分为V区和C区，其抗原结合特异性主要由V区中高度变异的超变区决定，3 个超变区共同形成1个抗原决定簇互补的表面，故又称为互补决定区( comp lementarity determining region，CDR)。
常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。
一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。
即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。
因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb），简称多抗。
多克隆抗体是由多克隆B细胞群产生的、针对多种抗原决定簇的混合抗体。
因为天然抗原是由多种抗原分子组成的，每种抗原分子又含有许多抗原决定簇，每一种抗原决定簇可激活相应的B细胞克隆，进而分化、成熟并合成相应的抗体。
由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。
因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。
随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。
1 抗体的发展抗体的研究过程经历了免疫血清学研究、单克隆抗体研究和基因工程抗体研究3个不同阶段。
1.1 免疫血清学研究阶段免疫动物产生的抗体是多种抗体的混合物，所以早期制备的抗体是多克隆抗体. 多克隆抗体是人类有目的地利用抗体的第1步，其在生物医学等方面的应用已有上百年的发展历史. 但多克隆抗体具有不均一性，特异性差且动物抗体注入人体会产生严重的过敏反应等特性，限制了其在疾病诊断和治疗中的应用。
抗体Fc段的8个生物学功能
抗体Fc段的8个生物学功能抗体是人体适应性免疫的重要效应分子，在抗感染和抗肿瘤领域起重要作用。
截至目前，全球已经批准超过120种抗体类药物（文末附抗体药物列表），2021年前20大畅销抗体药物的合计销售额约1280亿美金。
抗体药物通过Fab段的CDR区结合抗原，从而发现作用目标，并可能产生激动或者抑制功能；抗体药物通过Fc段结合不同效应细胞上的FcR，介导不同的效应功能。
本文主要梳理抗体药物通过Fc段结合FcR发挥的主要生物学功能及常用的生物学活性表征方法。
01抗体Fc与FcR在健康人群中，大约70%循环免疫球蛋白(Ig)是IgG，20%是IgA，其余10%是IgM、IgD和IgE。
IgG和IgA分别被进一步划分为IgG1-4和IgA1-2亚型。
每一类Ig都对应结合不同的FcR，比如IgG 结合FcγRs，IgA结合FcαRI，IgM结合FcμR，Fcμ/αRI可结合IgA和IgM，IgE结合FcεRI。
除FcγRI外，大多数FcRs已经进化到与其配体低亲和力结合，只有在与多价免疫复合物(immune complexes，ICs)相互作用时才被激活，细胞对免疫复合物的反应在很大程度上取决于细胞类型及其所表达的FcRs（具体见下图）。
反过来，FcR的表达也会受到细胞因子环境和特定细胞的组织生态位的影响。
目前抗体药物选用的抗体亚型主要为IgG1和IgG4，因而FcR主要为FcγR。
Annu. Rev. Biomed. Eng. 2022. 24:249–7402Fc/FcR介导的8个生物学功能1.补体依赖的细胞毒性CDC（Complement-dependent cytotoxicity (CDC)抗体药物的Fc和补体C1q结合，会在靶细胞表面形成膜攻击复合体（membrane attack complex，MAC)，造成细胞外离子大量内流，引起靶细胞裂解（包括肿瘤细胞、被感染细胞等）。
常见的抗体药物，如CD20抗体、CD38抗体、CD52抗体等。
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国专家共识2023版解读PPT课件
指导靶向治疗
HER-2阳性胃癌患者可接受针对HER2的靶向治疗，如曲妥珠单抗等，以 改善生存预后。
阴性结果处理建议
01
排除HER-2过表达
阴性结果表示胃癌细胞中HER-2蛋白表达水平较低或无表 达，可排除HER-2过表达的可能性。
THANKS
感谢观看
01
加强标作流程和结果判读标准，提高 HER-2检测的准确性和可靠性。
02
提高活检标本质量和 数量
通过改进活检技术、优化标本处理流 程等措施，提高活检标本的质量和数 量，为HER-2检测提供更加可靠的依 据。
03
加强临床医生培训和 教育
通过加强临床医生的培训和教育，提 高其对HER-2检测的认知水平和应用 能力，推动HER-2检测在临床实践中 的广泛应用。
胃癌胃镜活检标本HER-2检测中国 专家共识2023版解读
汇报人：xxx 2024-02-21
目录
• 引言 • HER-2基因与蛋白结构功能 • 胃癌胃镜活检标本采集与处理 • HER-2检测方法与技术 • 结果判读与临床意义 • 专家共识内容解读 • 挑战与展望
01
引言
背景与目的
胃癌是全球范围内发病率和死亡率较 高的恶性肿瘤之一，严重影响人类健 康。
新型检测技术将不断涌现
随着生物技术的不断发展，未来将会出现更加灵敏、特异、便捷的新型HER-2检测技术 ，为胃癌的精准治疗提供更加有力的支持。
HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合
未来HER-2检测将与免疫治疗等新型治疗手段相结合，为胃癌患者提供更加个性化的治 疗方案。
提高HER-2检测水平策略
新型抗肿瘤药物的研发与应用评价
新型抗肿瘤药物的研发与应用评价第一章引言近年来，肿瘤成为全球范围内最具挑战的健康问题之一。
传统的治疗方法，如手术切除、放射疗法和化疗，存在一定局限性。
因此，研发新型抗肿瘤药物成为医学领域的重要研究方向。
本章将对新型抗肿瘤药物的研发与应用评价进行介绍。
第二章新型抗肿瘤药物的研发2.1 分子靶向治疗分子靶向治疗是一种基于肿瘤细胞分子特征的治疗策略。
通过研究癌症发生和发展的分子机制，针对特定的分子靶点，设计和合成药物，以达到抑制肿瘤细胞增殖和促进凋亡的目的。
阿尔兹海默症治疗药物“多奈哌齐”是一种典型的分子靶向药物。
2.2 免疫治疗免疫治疗是通过调节机体的免疫系统，增强机体抗肿瘤能力，达到治疗肿瘤的目的。
免疫检查点抑制剂是免疫治疗的主要手段之一，通过抑制肿瘤细胞对免疫系统的逃避机制，使机体的免疫细胞能够主动攻击肿瘤细胞。
免疫治疗在黑色素瘤等恶性肿瘤的治疗上取得了显著的成果。
第三章新型抗肿瘤药物的应用评价3.1 临床效果评价临床效果评价是评价新型抗肿瘤药物应用效果的重要指标。
通常采用化疗疗效评价标准、病理学指标、影像学检查等方法来评价患者的治疗效果。
同时，还需考虑药物的副作用和耐药性问题。
3.2 经济效益评价经济效益评价是评价新型抗肿瘤药物应用效果的重要方面之一。
药物研发和生产需要巨大的投入，因此，要综合考虑药物的疗效和费用，评估其在临床应用中的经济效益。
此外，还需考虑患者的支付能力，以及药物的可及性。
3.3 安全性评价安全性评价是评价新型抗肿瘤药物应用效果的重要内容。
药物的安全性直接关系到患者的生命安全和身体健康。
因此，在药物研发和临床应用中，要进行严格的安全性评估，确保药物的安全性。
第四章指标体系的建立为了更好地评价新型抗肿瘤药物的研发与应用效果，需要建立科学合理的评价指标体系。
指标体系应包括临床效果、经济效益、安全性等方面的指标，综合考虑多个因素，并根据不同的肿瘤类型和药物特点进行调整和改进。
第五章评价方法的选择选择合适的评价方法是评价新型抗肿瘤药物的研发与应用效果的关键。
HER2靶向放射性分子影像探针的研究进展
HER2靶向放射性分子影像探针的研究进展
陈楷文;许晓平;王潇;卢鑫;杨仕平
【期刊名称】《上海师范大学学报:自然科学版》
【年(卷),期】2023(52)1
【摘要】人表皮生长因子受体2(HER2)在大约20%的乳腺癌患者中过度表达,是乳腺癌治疗的一个重要分子靶点.HER2靶向治疗的重要前提是对肿瘤HER2表达的精确测定.利用HER2靶向放射性分子影像探针的核医学影像是检测HER2表达情况的重要手段.它能够在诊疗过程中对肿瘤HER2表达进行可重复的全面评估,同时它解决了乳腺癌的异质性以及取样困难等传统方法存在的问题.目前,多种HER2靶向的分子影像探针(单克隆抗体、抗体片段、纳米抗体、亲和体、多肽)正处于临床前和早期临床研究中.文章综述了靶向HER2的抗体和多肽类放射性分子探针在核医学分子影像中的研究进展,指出用其进行临床转化时所面临的挑战,为开发新的HER2靶向分子影像探针提供思路.
【总页数】8页(P68-75)
【作者】陈楷文;许晓平;王潇;卢鑫;杨仕平
【作者单位】上海师范大学化学与材料科学学院;复旦大学附属肿瘤医院核医学科【正文语种】中文
【中图分类】R979.1
【相关文献】
1.靶向整合素αvβ3放射性核素标记分子探针在肿瘤诊治中的研究进展
2.放射性核素标记HER2抗体和纳米抗体的分子影像研究进展
3.HER2分子影像探针99mTc-HP7的放射性标记与肿瘤SPECT/CT显像
4.HER2分子影像探针99mTc-HP7的放射性标记与肿瘤SPECT/CT显像
5.放射性核素标记HER2抗体和纳米抗体的分子影像研究进展
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肿瘤免疫治疗临床应用及进展ppt课件
复肿瘤特异性免疫反应，也可增强IL2的抗瘤活性。一些肿瘤相关抗原 （ 19TAA）基因的转导研究，显示也可以
3)、基因产物直接杀伤瘤细胞
如TNF基因导入肿瘤细胞可使局部持 续分泌TNF、从而直接杀伤肿瘤细胞。
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6、集落刺激 因子 是一种低分子 量糖蛋白， 能够在体内 外选择性刺 激造血干细 胞增生、分 化成某一谱 12 系的细胞
7、胸腺素
分为αβ两族 作用：1）具有免疫增强作用，可促 进T细 胞、NK、LAK等细胞的增殖及 杀伤 活性 2）参与细胞骨架的形成，通过 对 13
（二）肿瘤的主动免疫治疗
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1、干扰素
（一）细胞因子治疗
1）I型干扰素：由单核巨噬细胞、病毒诱导的成纤维细胞、转化的B细胞产生 种类：IFN-α 、IFN-β 、IFN-δ 、IFN-ε 等 作用：抑制肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡 调节免疫反应 感染肿瘤血管生成 其它作用：抗病毒 2）II型干扰素：由活化的T细胞、原始的Th0细胞和NK细胞产生 种类：IFN-γ 作用: 激活巨噬细胞、NK细胞等直接杀伤癌细胞
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3、肽疫苗
8-10个氨基酸的多肽是T细胞识别的基 础 肽疫苗主要包括以下二种： 1）、癌基因、抑癌基因突变肽疫苗 目 前已合成的p21-K-Ras-125突变肽、 EGFRvIII突变肽和Her2/neu肽 等。
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Oncophage® (Vitespen)
通过加工、纯化自体肿瘤细胞的gp96等热休克蛋白HSP，获得大量肿瘤抗原。
作用：①诱导Th0分化为Th1，增强细 胞免疫应答 ②促进NK、T细胞增殖，诱导LAK、 TIL产生， 并增强上述细胞的杀伤功能 8 ③诱导Th1、NK分泌IFN-γ
基因工程纳米颗粒在EB病毒疫苗研发中的应用概述
基因工程纳米颗粒在EB病毒疫苗研发中的应用概述1 引言EB 病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)是人类至今未攻克的一大科学难题。
该病毒在人群中感染非常广泛，流行病学研究表明全球约有90% 的成年人存在EB 病毒感染。
大多数初次感染发生在幼儿时期且无临床症状，而青少年时期的感染往往会引发传染性单核细胞增多症。
此外，成年人感染EB 病毒可诱发多种疾病甚至癌症，全球每年新增癌症病例中就有约20 万病例与EB 病毒感染直接相关，因此EB 病毒被世界卫生组织归为第一类致癌病毒。
与EB 病毒感染高度相关的癌症包括鼻咽癌、胃癌、霍奇金(Hodgkin’s)淋巴瘤、伯基特(Burkitt’s)淋巴瘤等。
其中，鼻咽癌与EB 病毒相关性最高，并且高发于我国广东、香港等南方地区，被列为我国重点防治的十大恶性肿瘤之一。
目前，全球还没有可接种的EB 病毒防治疫苗。
而在我国，针对高发的EB 病毒阳性鼻咽癌，主要手段为放射性疗法同多种化疗药联合治疗，而针对晚期鼻咽癌患者的治疗手段则更为有限。
因此，开发防治EB 病毒感染所诱发相关疾病的变革性疫苗刻不容缓。
随着合成生物学、基因工程技术的进步，各种工程化合成疫苗载体得以迅速发展，并在EB 病毒预防及相关肿瘤综合治疗中发挥着越来越重要的作用。
2 EB 病毒EB 病毒主要通过唾液在鼻咽部及扁桃体传播感染，在鼻咽上皮细胞以及随上皮组织中的血管到达B 淋巴细胞中增殖复制或进入潜伏期。
EB 病毒基因组主要以附加体形式(Episomes)游离于宿主细胞的细胞核并编码约100 个基因[3]。
EB 病毒存在多种变异株，因此引发的相关疾病具有非常明显的地域差异。
例如，伯基特淋巴瘤高发于中非地区，霍奇金淋巴瘤高发于欧美国家，鼻咽癌高发于我国南方地区。
通过大量比对华南高发区与欧美地区及其他低发区鼻咽癌样本中EB 病毒的全基因组捕获测序，分析鼻咽癌发生与相应EB 病毒基因组的关系，证实广东地区约83% 的鼻咽癌患者感染的EB 病毒高危亚型为BALF2基因非同义变异位点BALF2_CCT，而并非普遍感染中国人群的LMP1-China1 亚株[4]，该亚型在欧洲和非洲等地则极为罕见。
基于免疫信息学的SARS-CoV-2表位筛选及疫苗分子设计分析
基于免疫信息学的SARS-CoV-2表位筛选及疫苗分子设计分析①邓辉雄王革非李雁嫘宋鑫利谷李铭李蕊（汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室，病原与免疫学研究中心，汕头515041）中图分类号R392.1文献标志码A文章编号1000-484X（2022）07-0838-10［摘要］目的：基于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）全病毒或Spike蛋白作为免疫原可能存在的无关抗原表位干扰，筛选鉴定优势保护性抗原表位，构建候选多价表位疫苗。
方法：以免疫信息学确定诱导主要中和抗体、激活细胞免疫应答的细胞保护性抗原表位，以Raptor X、trRosetta预测蛋白疫苗的二级、三级结构，并对候选蛋白疫苗进行二硫键的设计及对接分析，以C-ImmSim服务器模拟预测分析多表位疫苗的免疫原性和免疫应答。
结果：实验筛选了Spike蛋白免疫原性强的B细胞表位，具有高保守性和人群覆盖度广的IFN-γ、IL-4阳性的Th表位及CTL表位，计算模拟验证了疫苗的免疫应答特性。
结论：信息学分析结果初步显示候选表位疫苗具有良好的平衡体液免疫和细胞免疫应答能力。
［关键词］新冠病毒；Spike蛋白；抗原表位；平衡免疫；免疫信息学Epitopes screening and vaccine molecular design of SARS-COV-2based on immunoinformaticsDENG Huixiong，WANG Gefei，LI Yanlei，SONG Xinli，GU Liming，LI Rui.Department of Microbiology and Immu⁃nology，Pathogen and Immunology Research Center，Shantou University Medical College，Shantou515041，China ［Abstract］Objective：Based on SARS-CoV-2whole virus or Spike protein as an immunogen may be interference with the epitopes of unrelated antigens.Constructed of candidate vaccine by screening and identifying the dominant protective epitopes.Methods：Immunoinformatics was used to identify the protective epitopes that induce the main neutralizing antibodies and activate the cellular immune response，Raptor X and trRosetta were used to predict the secondary and tertiary structures of the vaccine，and disulfide bond design and docking analysis were carried out for candidate protein vaccine，immunogenicity and immune response of multi-epitopes vaccine were analyzed using C-ImmSim server.Results：B cell epitopes on strong immunogenicity of Spike protein，highly conservative and wide coverage of population and positive IFN-γ，IL-4of Th epitopes and CTL epitopes were selected，and the vaccine immune response characteristics were verified in silico.Conclusion：Results of immuneinformatics analysis preliminarily show that the candi‐date vaccine had a well-balanced on humoral and cellular immune response.［Key words］SARS-CoV-2；Spike protein；Epitopes；Immunebalance；Immunoinformatics新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的新冠肺炎（Corona Virus Disease2019，COVID-19）疫情在全球200多个国家和地区流行，对全球公共卫生安全造成巨大威胁，给社会生活及经济发展造成巨大损失。
抗体药物教材讲解
抗体药物山东大学药学院韩秋菊张建第一部分概述随着免疫学和基因工程技术的发展，抗体药物经历了鼠源单抗、嵌合单抗、人源化抗体到全人源化抗体的发展阶段，成为生物技术医药发展的重要领域。
目前，抗体药物以其高特异性、有效性和安全性成为全球药品市场上炙手可热的药品。
据报道，目前全球销售额居前10位的药品中，抗体药物占6种，其在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应、感染性疾病以及心血管疾病的预防、诊断和治疗中显示出巨大的潜力和应用前景。
第二部分基本概念、基本知识一、抗体的基本概念（一）抗体（Antibody, Ab）在人和动物体内，由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在B细胞中产生的免疫球蛋白，能可逆的、以非共价特异性地与相应抗原结合，形成抗原-抗体复合体，具有免疫功能。
抗体主要存在于血清中，也存在于呼吸道粘膜液、肠粘膜液、唾液以及乳汁等体液中。
抗体与不同的抗原结合往往出现不同的反应，因而常给抗体以不同的名称，如凝集素、沉淀素、抗毒素、溶血素、溶菌素等。
（二）抗原（antigen，Ag）指能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，引起抗体生成，并能与抗体在体内外特异性结合的物质。
（三）免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig）指具有抗体（Ab）活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白。
抗体与免疫球蛋白既有区别，又有联系。
免疫球蛋白是结构与化学的概念，包括的内容更广泛，而抗体是生物学功能的概念，与抗原是相对的。
图1 免疫球蛋白与抗体的关系二、抗体的组成和结构（一）抗体的组成抗体组成较为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）组成，这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸组成和排列上，既相似又有差别，具有与抗原决定簇相对应的结合部位。
抗体的本质是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。
抗体由四条多肽链组成，包括两条相同的长链叫重链（H），两条相同的短链叫轻链(L)，其形状似“Y”，链间由二硫键和非共价键链接，每条重链和轻链分为氨基端（N）和羧基端（C）。
T细胞免疫学功能研究进展
T细胞免疫学功能研究进展摘要过继性细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy, ACI)是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方法之一。
随着技术的日趋成熟, 已在多种实体瘤和血液肿瘤的临床治疗中取得较好疗效。
其中, 嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)T细胞技术是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。
通过基因改造技术, 效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的免疫细胞高, 并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态。
目前, CAR的信号域已从第一代的单一信号分子发展为包含CD28、4-1BB等共刺激分子的多信号结构域(第二、三代), 临床应用广泛。
但是, 该技术也存在脱靶效应、插入突变等临床应用风险。
该文将就CAR-T细胞技术在恶性肿瘤免疫治疗中的应用及可能存在的问题作一综述。
关键词嵌合抗原受体；基因改造；过继性免疫细胞治疗；CD4+T 细胞；TH17 细胞；分化；调控机制；微RNA；T细胞；抗感染免疫；抗肿瘤免疫早在1989年, Eshhar研究小组[3-4]就将免疫球蛋白样scFv和FcεRI 受体(γ链)或CD3复合物(δ链)胞内结构域融合形成嵌合受体, 即第一代CARs。
表达CAR的T细胞以抗原依赖、非MHC限制的方式结合肿瘤抗原, 启动并活化特异性杀伤肿瘤反应。
CARs表达的稳定性依赖于所用的胞内信号域。
尽管最近研究报告显示, 去除CD3δ链的两个ITAMs磷酸化作用, 能减少T细胞转导后的凋亡, 有利于转基因的长期表达[5-6]。
但是, 目前含CD3δ链的CAR-T细胞相对于含FcεRIγ链的CAR-T细胞临床研究更多。
原因可能是因为CD3δ含有三个ITAMs, 而FcεRI γ链只有一个ITAM, 虽然体内表达率较低, 但是能更有效激活T细胞, 对肿瘤根除能力更强。
此外, CAR-T细胞的跨膜区一般由同源或异源的CD3、CD8或CD28等二聚体膜蛋白组成, 通过CAR 二聚化以及与内源性TCR的相互作用产生的信号有助于T细胞的激活。
乳腺癌组织中STING_和CD68_的表达及其临床意义
[收稿日期]2023-03-20 [修回日期]2023-09-04[基金项目]安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2019A1095)[作者简介]刘弘飞(1999-),男,硕士研究生.[通信作者]胡知齐,硕士,主任医师.E⁃mail:ahyxhzq@[文章编号]1000⁃2200(2024)03⁃0307⁃06㊃临床医学㊃乳腺癌组织中STING 和CD68的表达及其临床意义刘弘飞1,2,胡金龙2,彭俊斌2,胡知齐1,2(1.蚌埠医科大学研究生院,安徽蚌埠233030;2.安徽省第二人民医院普外科,安徽合肥230041)[摘要]目的:探讨干扰素基因刺激因子(STING)和CD68在乳腺癌组织中的表达及其临床意义㊂方法:采用免疫组织化学SP 法检测83例乳腺癌病人癌组织及其癌旁组织中STING 和CD68的表达情况,分析上述两种蛋白的表达与乳腺癌病人临床病理参数㊁临床预后之间的关系,并结合TGCA 数据库进行生物信息分析两种蛋白表达情况的相关性及其代表的cGAS⁃STING 信号通路于肿瘤相关巨噬细胞的相关性㊂结果:STING 蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为24.1%(20/83),低于癌旁组织中的39.7%(33/83)(P <0.05),其表达情况与病人的HER⁃2阳性率㊁分子分型相关(P <0.05)㊂CD68蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为69.8%(58/83),高于癌旁组织中的39.7%(33/83)(P <0.01),其表达情况与病人的分子分型㊁TNM 分期㊁淋巴结转移相关(P <0.05)㊂STING 蛋白表达水平与病人中位生存期相关,高表达组中位OS 为42个月(95%CI :34.263~49.458),STING 低表达组中位OS 为19个月(95%CI :17.614~24.683),差异有统计学意义(χ2=6.25,P <0.05)㊂结合生物信息分析,STING 蛋白表达水平与CD68表达水平呈正相关关系(Kappa =0.241,r =0.636,P <0.01)㊂乳腺癌中STING 表达水平与包括巨噬细胞在内的各种免疫细胞浸润密切相关,并且与巨噬细胞M1/M2极化标志物表达水平呈正相关关系㊂结论:乳腺癌病人癌组织中STING 蛋白表达降低,CD68蛋白表达升高,两者可能共同参与乳腺癌的进展,从cGAS⁃STING 信号通路活化可能有助于TAMs 浸润及极化,STING 激动剂有望成为TAMs 调控和增强免疫治疗响应性的有效手段㊂[关键词]乳腺肿瘤;肿瘤微环境;干扰素基因刺激因子;CD68[中图法分类号]R 392.31 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2024.03.006Expression and clinical significance of STING and CD68in breast cancer tissuesLIU Hongfei 1,2,HU Jinlong 2,PENG Junbin 2,HU Zhiqi 1,2(1.School of Graduate ,Bengbu Medical University ,Bengbu Anhui 233030;2.Department of General Surgery ,The Second People′s Hospital of Anhui ,Hefei Anhui 230041,China )[Abstract ]Objective :To investigate the expression and clinical significance of stimulator of interferon gene(STING)and CD68in breast cancer tissues.Methods :Immunohistochemical SP method was used to detect the expression levels of STING and CD68in cancer tissues and adjacent tissues of 83breast cancer patients.The relationship between the expression of two proteins and clinicopathological parameters,clinical prognosis of breast cancer patients were analyzed.The correlations of the expression between the two proteins,and between cGAS⁃STING signaling pathway and tumor⁃associated macrophages were analyzed using the biological information analysis ofTGCA database.Results :The positive expression rate of STING protein in breast cancer tissues was 24.1%(20/83),which was lower than that in adjacent tissue[39.7%(33/83),P <0.05],and correlated with the HER⁃2positive rate and molecular typing of patients(P <0.05).The positive expression rate of CD68in breast cancer tissues was 69.8%(58/83),which was higher than that in adjacent tissue [39.7%(33/83),P <0.05],and correlated with the TNM stage,lymph node metastasis and molecular typing of patients (P <0.05).The expression level of STING protein was correlated with the median survival of patients.The median OS in the high⁃expression group was 42months (95%CI :34.263-49.458),the median OS in the low⁃expression group was 19months (95%CI :17.614-24.683),and the difference of which was statistically significant (χ2=6.25,P <0.05).The results of biological information analysisshowed that the expression level of STING protein was positively correlated with the CD68expression level (Kappa =0.241,r =0.636,P <0.01).The expression level of STING in breast cancer was closely related to the infiltration of various immune cells,including macrophages,and positively correlated with the expression level of M1/M2polarization markers in macrophages.Conclusions :The expression of STING protein decreases,and the CD68protein increases in the cancer tissues of breast cancer patients,both of which maybe involved in the progression of breast cancer.Activation of the cGAS⁃STING signaling pathway may contribute to the infiltration andpolarization of TAMs,and STING agonists are expected to become an effective means to regulate TAMs and enhance the response to immunotherapy.[Key words]breast neoplasms;tumor microenvironment;stimulator of interferon gene;CD68 最新WHO全球癌症流行病学调查研究显示[1],乳腺癌已取代肺癌成为全球最高发的癌症,并且是导致女性病人癌症因素死亡人数最多的恶性肿瘤,需引起临床医生的高度重视㊂肿瘤微环境(TME)与乳腺癌发生㊁发展密切相关,其中,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润是乳腺癌免疫微环境改变的重要组成部分,白细胞分化抗原分子68(CD68)被认为是TAMs活化㊁浸润的主要标志物之一,研究乳腺癌TAMs浸润情况及可能的调控手段,对于乳腺癌诊断和治疗具有积极意义[2]㊂干扰素基因刺激因子(STING)是cGAS⁃STING信号通路的核心调节分子,近年来,关于其在恶性肿瘤免疫微环境中发挥调节作用的相关研究报道越来越多,其表达与泛肿瘤预后及免疫治疗响应性密切相关[3]㊂因此, STING信号通路能够逐渐成为研发TME免疫调节剂的热门靶点[4]㊂目前,关于cGAS⁃STING信号通路是否参与调控乳腺癌TAMs浸润鲜有文献报道㊂因此,我们通过免疫组织化学(IHC)检测乳腺癌及其癌旁组织中cGAS⁃STING信号通路关键蛋白STING和TAMs主要标志物CD68的表达,分析这两种蛋白的表达与病人临床病理参数之间的关系,结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行分析,探讨STING与CD68表达㊁巨噬细胞浸润相关性,为临床诊疗提供参考㊂现作报道㊂1 材料与方法1.1 材料 本研究用于IHC实验的主要试剂包括:无水乙醇㊁二甲苯㊁包埋石蜡㊁中性树脂,均购自中国国药集团;苏木素购自美国Sigma公司;anti⁃STING抗体㊁山羊抗兔二抗均购自美国CST公司;重组anti⁃CD68抗体购自英国Abcam公司㊂DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒购自中国碧云天公司㊂1.2 方法 1.2.1 临床资料 收集2014年7月至2018年10月在安徽省第二人民医院普通外科住院接受乳腺癌改良根治术的乳腺癌病人的临床资料㊂纳入标准:经病理检查证实为乳腺癌者;能够获取完整的临床㊁病理㊁组织样本资料者㊂排除标准:资料不全者;合并其他恶性肿瘤者;术前行新辅助治疗者㊂经筛选,共入组83例,均为女性,年龄25~79岁,其中,参考NCCN乳腺癌指南[5],肿瘤TNM分期:Ⅰ期5例,Ⅱ期64例,Ⅲ期14例;分子分型:LuminaA型26例, LuminaB型34例,人表皮生长因子受体⁃2(HER⁃2)阳性8例,三阴性乳腺癌(TNBC)15例㊂所有入组病人均签署知情同意书,本研究经医院伦理委员会批准㊂1.2.2 IHC 采用SP法㊂常规进行包埋㊁脱蜡等工作并阻断过氧化物酶进行封闭;滴加经稀释的一抗(STING与CD68,稀释比例均为1∶1000),后于4℃湿性环境中孵育过夜㊂PBS冲洗㊁吸干后滴加HRP标记的山羊抗兔二抗,37℃孵育20min㊂再次PBS冲洗㊁吸干后滴加新鲜配制的DAB显色液㊂再进行复染㊁脱水㊁封片及拍照镜检㊂镜下见STING 蛋白和CD68蛋白在乳腺癌组织中主要定位于细胞质,呈棕黄色颗粒㊂1.2.3 IHC结果判定 IHC结果需综合着色深度和阳性细胞数比率来评价㊂着色深度评价标准如下:基本不着色,0分;黄色,1分;棕黄色,2分;棕褐色,3分㊂阳性细胞数比率评价标准如下:随机选取5个视野观察并记录阳性细胞数占总细胞数的比率,取其平均值,≤5%,0分;>5%~25%,1分;> 25%~50%,2分;>50%~75%,3分;>75%,4分;着色深度分数×阳性细胞数比率为最终得分,≥1为阳性,<1为阴性㊂1.2.4 随访资料 所有本组病人术后常规进行门诊随访,以病人术后出院日期为随访起始时间,截至本文投稿时间,随访2~5年不等㊂按STING表达水平进行分组,比较各组内生存指标差异㊂所关注生存指标为总生存期(OS),指从术后随访开始至因任何原因引起死亡的时间,对于失访者将最后一次随访时间计为死亡时间,按月计㊂1.2.5 生物信息学分析 为进一步研究cGAS⁃STING信号通路与TAMs浸润的关系,进行生物信息学分析㊂首先,通过TCGA数据库(https:// /)下载BRCA临床数据和相应的基因组mRNA芯片表达谱数据㊂然后,采用LI 等[6]在线数据处理系统(https://cistrome. shinyapps.io/timer/)进行STING表达与巨噬细胞浸润相关性等数据分析㊂1.3 统计学方法 采用χ2检验㊁t 检验和相关分析㊂2 结果2.1 乳腺癌组织及癌旁组织中STING 蛋白和CD68蛋白的表达情况 纳入本组研究的83例乳腺癌病人,其癌组织中STING 蛋白阳性表达为20例(20/83,24.1%),癌旁组织中为33例(33/83,39.7%),2组间阳性表达率差异有统计学意义(χ2=4.68,P <0.05),癌组织低于癌旁组织㊂癌组织中CD68阳性表达为58例(58/83,69.8%),癌旁组织中为32例(32/83,38.5%),2组间阳性表达率差异有统计学意义(χ2=16.41,P <0.01),癌组织高于癌旁组织(见图1)㊂2.2 乳腺癌组织中STING 蛋白和CD68蛋白表达与病人临床病理参数的关系 纳入本组研究的83例乳腺癌病人,其STING 蛋白阳性表达与其HER⁃2阳性率㊁Lumina 分型之间有相关性(P <0.05);与雌激素受体(ER)阳性率㊁孕激素受体(PR)阳性率㊁TNM 分期㊁淋巴结转移之间无相关性(P >0.05)㊂CD68蛋白阳性表达情况与其Lumina 分型㊁TNM 分期㊁淋巴结转移呈现显著相关关系(P <0.05);与ER 阳性率㊁PR 阳性率㊁HER⁃2阳性率之间无相关性(P >0.05)(见表1)㊂2.3 乳腺癌组织中STING 蛋白和CD68蛋白表达情况的相关性分析 应用Kappa 一致性检验对本组数据进行分析,其结果显示,本组研究资料中,STING 蛋白与CD68蛋白的表达呈正相关关系(Kappa =0.241,P <0.01)㊂应用TIMER 在线数据库针对TGCA 数据库进行分析,STING 蛋白与CD68蛋白的表达呈明显正相关关系(r =0.636,P <0.01)㊂2.4 STING 蛋白表达与乳腺癌TME 免疫细胞浸润及巨噬细胞标志物的关系 应用TIMER 在线数据库针对TGCA 数据库进行分析㊂STING 表达与乳腺癌及其各亚型的免疫微环境中巨噬细胞㊁B 细胞㊁CD4+T 淋巴细胞㊁CD8+T 淋巴细胞㊁树突状细胞浸润情况普遍具有正相关性,说明cGAS 信号通路深度参与乳腺癌免疫微环境调控㊂其中,TGCA 乳腺癌整体队列(1095例)STING 表达水平与巨噬细胞浸润呈正相关关系(P <0.01);各分子亚型中,LuminaA +B 型乳腺癌病人,STING 表达水平与巨噬细胞浸润呈正相关关系(P <0.05),TNBC 病人STING 表达水平与巨噬细胞浸润呈正相关关系(P <0.01),HER⁃2阳性病人STING 表达水平与巨噬细胞浸润呈无明显相关性(P >0.05)(见表2)㊂表1 乳腺癌病人临床病理参数与STING ㊁CD68蛋白阳性表达之间的关系(n ) 临床病理参数STING 阳性 阴性 χ2PCD68 阳性 阴性 χ2P年龄/岁 M (P 25,P 75)47(34,60)48(38,58)0.47△>0.0546(37,56)48(36,60)0.57△>0.05ER 阳性 阴性9113726 1.16>0.0523351312 1.08>0.05PR 阳性 阴性101033300.03>0.0533251015 1.99>0.05HER⁃2 阳性 阴性41638259.87<0.01273115101.25>0.05续表1临床病理参数STING 阳性 阴性 χ2PCD68 阳性 阴性 χ2PLumina 分型 LuminaA 型1251214 LuminaB 型 HER⁃2阳性型13121712.83<0.012856311.63<0.01TNBC 型510132TNM 分期 Ⅰ期2314 Ⅱ期14500.94>0.0547177.93<0.05 Ⅲ期410122淋巴结转移 有 无13732250.48>0.0536229164.78<0.05 △示u c 值 表2 STING 蛋白表达与乳腺癌TME 免疫细胞浸润间的相关系数(TIMER 分析)免疫细胞BRCA CorBRCA⁃Basal CorBRCA⁃Her2CorBRCA⁃Luminal Cor肿瘤纯度0.398**-0.500**-0.395**0.385**巨噬细胞0.306**0.308**0.0760.342**B 细胞0.160**0.359**0.288*0.201**CD8+T 细胞0.325**0.435**0.2440.340**CD4+T 细胞0.419**0.506**0.2090.389**中性粒细胞0.414**0.499**0.1600.488**树突状细胞0.405**0.582**0.2630.435**样本量(n )109519182787 *P <0.05,**P <0.01㊂STING 蛋白的Gene Symbol 为TMEM173 再进一步分析STING 表达与乳腺癌中巨噬细胞亚型浸润的相关性,采用巨噬细胞标志物进行分类,TAMs 以CD68㊁CCL2㊁IL10标识,M1型巨噬细胞以NOS2㊁IRF5㊁PTGS2标识㊁M2型巨噬细胞以CD163㊁VSIG4㊁MS4A4A 标识,分别比较STING 表达与各标志物的相关性㊂TGCA 数据库整体乳腺癌队列,STING 表达与各标志物呈正相关关系(P <0.05),LuminaA +B 型乳腺癌病人,STING 表达与各标志物呈正相关关系(P <0.05),TNBC 病人㊁HER⁃2阳性病人,STING 表达与各标志物无明显相关性(见表3)㊂2.5 病人随访情况 对83例乳腺癌病人术后进行密切随访,所有病人失访2例,存活53例,死亡28例,其中因乳腺癌死亡25例;复发46,未复发37例㊂全组病人中位OS 为25.5个月,其中,STING 高表达组中位OS 为42个月(95%CI :34.263~49.458),STING 低表达组中位OS 为19个月(95%CI :17.614~23.683)㊂2组间差异有统计学意义(χ2=6.25,P <0.05)㊂ 表3 STING 蛋白表达与乳腺癌TME 中各类巨噬细胞标志物的相关系数(r )巨噬细胞亚型分子标志物整体队列CorLumina 队列CorHER⁃2队列CorTNBC 队列CorTAMsCCL20.336**0.381**0.2120.573**CD680.438**0.408**0.352**0.691**IL100.406**0.365**0.329**0.604**M1NOS20.185**0.221**0.237**0.089IRF50.391**0.324**0.476**0.580**PTGS20.291**0.368**0.1670.108M2CD1630.382**0.357**0.325**0.638**VSIG40.382**0.359**0.2310.567**MS4A4A 0.401**0.331**0.306*0.617** *P <0.05,**P <0.013 讨论 乳腺癌是女性最常见和最容易导致癌症相关死亡的恶性肿瘤之一[1],国内外临床诊疗指南对于乳腺癌病人进行TNM 分期和分子分型有助于其整体治疗方案的选择和预后的判断[5,7]㊂但是在实际临床工作过程中却存在一定的局限性,特别是随着以免疫检查点抑制剂(ICIs)为代表的肿瘤免疫治疗的发现和兴起,为调节机体免疫功能正常化,能够更加准确地进行免疫微环境分类以及如何研发新的治疗方法提高免疫治疗效果将会是新的难题[8]㊂TME 与恶性肿瘤免疫分型及ICIs 响应性密切相关,检测及评估TME 有助于指导病人进行恶性肿瘤的精准治疗[9]㊂TAMs 是TME 重要的组成部分,一般以CD68为重要的标志物,其表达与乳腺癌等恶性肿瘤的进展及不良预后密切相关[10]㊂本研究中,乳腺癌病人癌组织中CD68阳性表达率高于癌旁组织,且其表达情况与病人的TNM分期㊁分子分型㊁淋巴结转移等临床指标相关,这与国内外相关研究结果基本一致,反映出TAMs作为乳腺癌病人预后评估指标及提高免疫治疗效果的干预指标的可行性㊂TAMs在肿瘤组织内充当着 多面手”的角色,根据功能表型的不同,TAMs在肿瘤早期可分化为M1型发挥吞噬㊁识别肿瘤细胞的作用,肿瘤进展期也可分化为M2型分泌大量细胞因子,促进乳腺癌进展,帮助肿瘤细胞获得耐药性[11]㊂也有观点认为先天性免疫系统功能缺失,在肿瘤早期形成阶段,导致癌细胞基因突变累积及DNA受损修复机制的缺失,可能与TAMs早期浸润㊁识别相关[12]㊂而cGAS⁃STING作为经典的先天性免疫应答信号通路,被证实与肿瘤发生㊁发展有着密切的联系㊂其核心调节分子是存在于细胞质内的STING,在肿瘤细胞发生的早期,自身DNA损伤出现核泄漏时,发挥类似于 哨兵”的识别作用,并激活下游通路,产生Ⅰ型干扰素(INF⁃β),达到募集并激活免疫细胞㊁驱化多种催化因子表达的作用,进行免疫调节㊂多种肿瘤组织内STING蛋白处于低表达状态,可能与其参与免疫抑制及免疫逃逸相关[13]㊂本研究中,乳腺癌组织中的STING蛋白阳性表达低于癌旁组织,其表达水平与病人整体预后密切相关,高表达STING的病人整体生存率显著高于低表达组,可能与STING发挥免疫识别作用有关㊂为了进一步分析STING信号通路对于免疫微环境的影响,课题组结合TGCA数据库进行生物信息分析,发现在乳腺癌中,STING表达水平与几乎各类免疫细胞浸润都有关系,是进行免疫微环境调控的理想靶点㊂并且,其表达水平与巨噬细胞浸润密切尤为相关,在不同分子表型的乳腺癌中STING的表达与巨噬细胞的浸润及分化呈现出明显的差异,在特定类型的乳腺癌,如TNBC㊁HER⁃2阳性乳腺癌组织中,STING蛋白水平表达甚至能够与TAMs是否发生M1/M2型极化密切相关㊂这些研究结果均反映出STING信号通路的活化可能深度参与肿瘤微环境中TAMs的浸润及极化㊂STING激动剂的研发是免疫治疗领域研究的热点,多种核苷酸类药物和非核苷酸类药物被开发作为免疫治疗㊁增敏药物或免疫佐剂,能够发挥很好的抗肿瘤和协同抗肿瘤效果[4]㊂但是,目前关于STING激动剂是否能够通过调控TAMs浸润及M1/ M2型巨噬细胞极化而发挥免疫调节作用鲜有报道㊂TAMs已经被证实与癌症进展,特别是早期TME改变密切相关[14],但其功能调控极其复杂,难以为免疫调节提供理想的靶点[15]㊂虽然cGAS⁃STING信号通路不是TAMs的专属调控通路,但本研究通过生物信息分析㊁IHC及临床病理分析,充分验证了STING信号通路参与TAMs调控的可能性,以期为后续STING激动剂应用于乳腺癌,特别是以TAMs 为目标的,免疫微环境调控提供一定的理论和实践支持,相关干预试验工作有尝试研究的价值㊂综上所述,本研究通过生物信息分析㊁IHC㊁临床病理分析等多种方法,研究了cGAS⁃STING信号通路可能参与肿瘤相关局势细胞的浸润及极化, STING蛋白及CD68蛋白的表达对于评价肿瘤免疫学分型及指导乳腺癌治疗和预后判断均具有一定的参考价值㊂但本研究样本量较小,为回顾性分析,证据等级较低,需要进行后续随机对照研究或大样本调查获得更高的临床证据支持㊂[参考文献][1] SUNG H,FERLAY J,SIEGEL RL,et al.Global Cancer Statistics2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and MortalityWorldwide for36Cancers in185Countries[J].CA Cancer JClin,2021,71(3):209.[2] PAN Y,YU Y,WANG X,et al.Tumor⁃associated macrophages intumor immunity[J].Front Immunol,2020,11:583084. 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[6] LI T,FAN J,WANG B,et al.TIMER:a web server forcomprehensive analysis of tumor⁃infiltrating immune cells[J].Cancer Res,2017,77(21):e108.[7] 中国抗癌协会乳腺癌专业委员会.中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2021年版)[J].中国癌症杂志,2021,31(10):954.[8] PETITPREZ F,MEYLAN M,DE REYNIÈS A,et al.The tumormicroenvironment in the response to immune checkpoint blockadetherapies[J].Front Immunol,2020,11:784.[9] ZHANG Y,CHEN H,MO H,et al.Single⁃cell analyses reveal keyimmune cell subsets associated with response to PD⁃L1blockadein triple⁃negative breast cancer[J].Cancer Cell,2021,39(12):1578.[收稿日期]2022-06-30 [修回日期]2022-11-30[基金项目]安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2019A0385);安徽省医学会急诊临床研究项目(Ky2021020);蚌埠医学院自然科学研究重点项目(2021byzd175)[作者简介]杜召辉(1987-),男,主治医师.[通信作者]王振杰,博士/硕士研究生导师,教授,主任医师.E⁃mail:ahbyfywzj@ [文章编号]1000⁃2200(2024)03⁃0312⁃04㊃临床医学㊃超声监测膈肌功能对急性胰腺炎病人早期病情评估的作用杜召辉,徐志鹏,郑传明,宋 琦,邵志林,邱兆磊,王振杰(蚌埠医科大学第一附属医院急诊外科,安徽蚌埠233004)[摘要]目的:探讨超声监测膈肌功能(膈肌增厚分数及膈肌移动度)对急性胰腺炎(AP)病人早期病情评估的作用㊂方法:选取急诊外科收治的AP 病人作为研究对象,根据病情轻重分为重症急性胰腺炎(SAP)组(40例)和非重症急性胰腺炎(N⁃SAP)组(55例)㊂比较入院时2组病人一般资料㊁吸气末膈肌厚度(DTei)㊁呼气末膈肌厚度(DTee)㊁膈肌增厚分数(DTF)㊁平静呼吸移动度及深呼吸移动度,采用Pearson 相关分析DTF 与APACHE Ⅱ评分㊁Ranson 评分㊁改良CT 严重指数(MCTSI)的相关性;ROC 曲线分析DTF 对AP 病情的评估价值㊂结果:入院后,2组年龄㊁性别㊁DTei 及DTee 比较差异均无统计学意义(P >0.05);SAP 组病人的APACHE Ⅱ评分㊁Ranson 评分及MCTSI 较N⁃SAP 组明显增加(P <0.01);SAP 组DTF㊁平静呼吸移动度及深呼吸移动度小于N⁃SAP 组(P <0.05);DTF 与APACHE Ⅱ评分㊁Ranson 评分及MCTSI 均呈负相关关系(r =-0.503㊁-0.557㊁r =-0.557,P <0.01);DTF 的ROC 曲线下面积为0.799㊂结论:超声监测膈肌功能(DTF 及膈肌移动度)对AP 病人早期病情评估具有指导价值㊂[关键词]急性胰腺炎;膈肌功能;膈肌增厚分数;超声[中图法分类号]R 576 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2024.03.007Role of ultrasonographic monitoring of diaphragmatic functionin early assessment of patients with acute pancreatitisDU Zhaohui,XU Zhipeng,ZHENG Chuanming,SONG Qi,SHAO Zhilin,QIU Zhaolei,WANG Zhenjie(Department of Emergency Surgery ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical University ,Bengbu Anhui 233004,China )[Abstract ]Objective :To explore the role of ultrasound monitoring of diaphragmatic function(fraction of diaphragmatic thickening and diaphragmatic mobility)in early assessment of patients with acute pancreatitis(AP).Methods :The AP patients from the emergency were divided into the severe AP(SAP)group(40cases)and N⁃SAP group(55cases)according to the severity of illness.The general data,DTei,DTee,DTF,calm breathing mobility and deep breathing mobility were compared between two groups at admission.The Pearson correlation analysis was used to analyze the correlations between DTF and APACHE Ⅱscore,Ranson score,MCTSI,and the receiver operating characteristic (ROC)curve was used to was used to evaluate the value of DTF in AP disease.Results :After admission,there was no statistical significance in the age,gender,DTei and DTee between two groups(P >0.05).The APACHE Ⅱscore,Ranson score and MCTSI in the SAP group were significantly higher than those in the N⁃SAP group(P <0.01).The DTF,calm breathing mobility and deep breathing mobility in the SAP group were lower than those in the N⁃SAP group(P <0.05).The DTF was[10] CHOI J,GYAMFI J,JANG H,et al .The role of tumor⁃associatedmacrophage in breast cancer biology [J ].Histol Histopathol,2018,33(2):133.[11] MUNIR MT,KAY MK,KANG MH,et al .Tumor⁃associatedmacrophages as multifaceted regulators of breast tumor growth [J].Int J Mol Sci,2021,22(12):6526.[12] KUNG WH,YU CF,LEE AC,et al .Gene expression profiling oftumor⁃associated macrophages after exposure to single⁃doseirradiation [J].Comput Biol Chem,2017,69:138.[13] BOSE D.cGAS⁃STING pathway in cancer:jekyll and hyde storyof cancer immune response [J].Int J Mol Sci,2017,18(11):2456.[14] SINGHAL S,STADANLICK J,ANNUNZIATA MJ,et al .Humantumor⁃associated monocytes /macrophages and their regulation ofT cell responses in early⁃stage lung cancer[J].Sci Transl Med,2019,11(479):1500.[15] PATHRIA P,LOUIS TL,VARNER JA.Targeting tumor⁃associatedmacrophages in cancer[J].Trends Immunol,2019,40(4):310.(本文编辑 刘畅)。
2023-2024学年北京市丰台区高三1月期末练习生物试题
2023-2024学年北京市丰台区高三1月期末练习生物试题1.下列有关豌豆叶肉细胞的说法错误．．的是（）A．叶肉细胞中的核酸有DNA和RNA两种B．叶肉细胞中的多糖有淀粉和纤维素C．叶肉细胞中光反应吸收的光能全部储存在ATP中D．叶肉细胞中有参与有氧呼吸和无氧呼吸酶的基因2. A基因位于人类第21号染色体上，该基因共有A1、A2、A3和A4四种等位基因。
有一名唐氏综合征患者的基因型为A1A2A3，其母亲的基因型是A1A3，父亲的基因型是A2A4，则造成该患者异常的原因可能是（）A．受精卵发育过程中有丝分裂异常B．A 1与A 3基因的遗传遵循自由组合定律C．受精卵发生染色体结构上的倒位D．卵细胞形成过程中减数分裂I异常3.肾上腺素是肾上腺分泌的一种激素，交感神经末梢也能释放肾上腺素，有关肾上腺素的说法错误．．的是（）A．肾上腺素由肾上腺分泌后直接进入内环境B．交感神经末梢释放的肾上腺素进入突触间隙中C．肾上腺素可放大交感神经的收缩支气管的作用D．寒冷环境下肾上腺素分泌增加，细胞代谢增强4.血小板是哺乳动物特有的血细胞，它有大量额外的细胞膜可使它迅速改变形状，伸出“手臂”附着在血管破裂处止血。
同时，其还可以区分人体细胞和微生物细胞，通过囊泡分泌攻击性分子对抗各种入侵的微生物以及传递信息给其他免疫细胞，以下说法正确的是（）A．血小板存在于血液中，所以血小板抵抗外来微生物属于体液免疫B．血小板的“手臂”和囊泡的形成是由于细胞膜具有选择透过性C．血小板可以特异性识别微生物细胞，因此属于特异性免疫D．血小板除了具有凝血作用以外，还具有辅助免疫的功能5.有关动物激素和植物激素的异同，错误．．的是（）A．植物激素和动物激素都是信号分子，都能调节生命活动B．植物激素和动物激素都可以在细胞和器官水平发挥作用C．植物激素和动物激素都是有机物，都有微量高效的特点D．植物激素没有特定的分泌器官，动物激素都有特定的分泌腺6.光敏色素有两种形式：红光吸收型（Pr）和远红光吸收型（Pfr），其转化形式为Pr→红光→远红光→Pfr，下图是阳生植物和阴生植物在不同遮阴程度下的茎伸长生长速率，相关叙述正确的是（）注：Pfr/总光敏色素表示遮阴程度，该比值越大，表示遮阴程度越小A．阳生植物随着遮阴程度的增加，光合作用减弱，茎的伸长生长速率减小B．植物体内有较高的Pr时，阳生植物茎的伸长生长更快C．遮阴条件下有更多的远红光，使得Pfr在总光敏色素中比值增加D．阴生植物茎的伸长生长与遮阴程度没有相关性，光敏色素不起作用7.科研人员对内蒙古干旱区天然杜松林的种群结构及动态特征进行研究，结果如下图。
乳腺癌知识试题及答案
乳腺癌知识试题及答案1. 根据GLOBOCAN 2018流调数据显示，全世界范围内女性乳腺癌新发和死亡例数分别为_____万例和_____万例。
[单选题] *155.12和43190.12和53208.12和63(正确答案)250.12和732. 根据GLOBOCAN 2018流调数据显示，中国女性乳腺癌新发和死亡例数分别为_____万例和_____万例。
[单选题] *20.12和1.2136.79和9.79(正确答案)42.22和3.5652.32和5.523. 以下哪些激素与乳腺癌的发病直接相关? *雌酮(正确答案)雌二醇(正确答案)孕激素泌乳素4. 以下哪些因素与乳腺癌的发病直接相关？ *月经初龄年纪早(正确答案)绝经年龄晚(正确答案)不孕(正确答案)初次足月产的年龄大(正确答案)5. 以下哪些因素可加强或延长雌激素对乳腺上皮细胞的刺激，从而增加乳腺癌的发病机会？ *营养过剩(正确答案)营养不良肥胖(正确答案)脂肪饮食(正确答案)6. 乳腺癌患者可出现以下哪些临床表现？ *肿块质硬、表面不光滑，与周围组织边界不清，不易被推动(正确答案)乳头内陷(正确答案)"酒窝征"(正确答案)“橘皮样外观”(正确答案)7. 根据 DNA 微阵列分析的基因表达谱, 乳腺癌可出现以下哪些分子分型？ * Luminal A型(正确答案)Luminal B型（HER2阴性）(正确答案)HER2阳性（HR阴性）(正确答案)HER2阳性（HR阳性）(正确答案)三阴性(正确答案)8. 三阴性乳腺癌是指？ *HER-2阴性(正确答案)ER阴性(正确答案)PR阴性(正确答案)Ki-67任何(正确答案)9. 关于Luminal A型乳腺癌，应满足下面哪些指标？ *HER-2阴性(正确答案)ER阳性(正确答案)PR阳性且高表达(正确答案)Ki-67低表达(正确答案)10. 关于Luminal B（HER2阴性）型乳腺癌，应满足下面哪些指标？ * HER-2阴性(正确答案)ER阳性(正确答案)PR低表达或阴性(正确答案)Ki-67高表达(正确答案)11. 乳腺癌的常见转移部位有：_____ *脑(正确答案)骨(正确答案)肺(正确答案)肝(正确答案)12. 乳腺癌的常见辅助检查手段有哪些？ *乳腺钼靶X线摄片(正确答案)乳腺超声(正确答案)核磁共振成像(正确答案)PET-CT13. 乳腺癌的TNM分期系统由哪三个要素组成：____________。
Her-2资料
1.Her-2结构：Her2位于染色体17q21，编码分子量为185KD的跨膜糖蛋白，由胞内酪氨酸激酶结构域、跨膜区和胞外结构域(extraeellular domain，ECD)三部分组成，是具有蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinace，PTK)活性的跨膜蛋白，属于表皮生长因子受体家族的成员。
2.Her-2功能：目前还没有发现能与Her2直接结合的配体，但HER-2与其他受体结合成异二聚体后能发挥信号转导功能，与不含Her2的二聚体相比其信号更强；另一方面，Her2的异二聚体使EGFR(表皮生长因子受体)在细胞膜过表达，加速了细胞的增殖，导致肿瘤形成和生长加快。
HER-2 + 其他受体→异二聚体→发挥信号转导功能HER2的异二聚体使EGFR(表皮生长因子受体)在细胞膜过表达→细胞的增殖↑→肿瘤形成和生长↑3.Her2分子的检测目前一般采用免疫组织化学(IHC)检测Her2受体蛋白过表达，应用荧光原位杂交(FISH)和显色原位杂交(CISH)法检测Her2基因扩增的水平。
4.Her2与肿瘤发生及发展（1）文献一：Her2受体胞内区有PTK活性，自身也具有若干酪氨酸残基磷酸化位点。
当生长因子与Herl、Her3或Her4结合后，诱导蛋白膜外区构象改变，与Her2受体分子形成异二聚体，使细胞膜内侧的活性显著增加，导致受体分子Tyr互相催化发生自身磷酸化。
进而引发瀑布式的连锁反应，信号转导经细胞膜和细胞间质至细胞核，激活基因，促进有丝分裂等，从而诱发肿瘤。
较多的研究发现Her2原癌基因通过其介导的主要信号通路如Ras—Raf—Mek—MAPK(丝裂原活化蛋白激酶通路、P13K—Akt(磷脂酰肌醇一3一激酶)通路等使细胞增殖周期缩短，恶性表现增强以及抗凋亡。
（2）文献二：HER2与肿瘤的发生及发展HER2基因扩增与增加细胞分化、迁移、肿瘤侵袭、局部及远处转移、加快血管发生和减少细胞凋亡密切相关。
23第二十三章 免疫治疗
Alemtuzumab CD52 人源化IgG1
Ibritumomab
CD20
90Y标记鼠 IgG1
Adalimumab TNF- 全人源IgG1
Omalizumab
IgE 人源化IgG1
TositumomabI-131
CD20
131I标记鼠 IgG2a
批准时间 1998 乳腺癌 2000 肿瘤
适应证
第四节 细胞因子及其拮抗剂
为基础的免疫治疗
• 定义：应用重组细胞因子作为药物用于疾病的治疗统称 为细胞因子疗法。
• 分类：细胞因子疗法是通过人为的输入外源性细胞因子 或阻断内源性细胞因子，纠正体内细胞因子网络的平衡， 以达到治疗疾病的目的，分为细胞因子补充疗法，细胞 因子阻断疗法和细胞因子基因疗法。
重组细胞因子或受体相关药物及适应证
名称
适应证
EPO
慢性肾功能衰竭所致贫血、肿瘤或化疗所致贫 血、失血后贫血
IL-2
恶性肿瘤、艾滋病、免疫缺陷病
IL-11
肿瘤或化疗所致血小板减少
sTNF RII-Fc 类风湿性关节炎
PDGF
糖尿病所致腿、足溃疡
生产，纯度高，具有广阔的应用前景。
3. 核酸疫苗 • 利用DNA重组技术，将编码特异性抗原的基因插入到
质粒载体中，构建重组载体，注射体内后可表达相应的 抗原，此为核酸疫苗。 • 核酸疫苗在体内可持续表达，免疫效果好，维持时间长， 但其安全性仍有待进一步研究。
4. 其他疫苗 • 针对自身免疫性疾病、过敏等，口服疫苗诱导免疫耐受。 • 细胞成分及完整细胞也可作为免疫原进行主动免疫治疗。
血管退化，视网膜 血管闭塞
2007 血液病
（续上表）
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新型抗HER2嵌合性抗原受体的构建及其体外、体内功能的评价研究背景基因工程化T细胞过继性免疫治疗肿瘤是目前免疫系统抗肿瘤研究中的热点,主要包括基因工程化T细胞受体(T cell receptor, TCR)和基因工程化嵌合性抗原受体(chimeric angtigen receptor, CAR)两种方法。
T细胞识别肿瘤细胞发生免疫反应的过程,是由T细胞表面表达的TCR与肿瘤细胞表面表达的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)提呈的肿瘤相关抗原相(Tumor associated antigen, TAA)结合引发的。
TCR基因是由α-和β链组成的,这两条链可以来源于肿瘤特异性的T细胞。
比如,将病人的肿瘤细胞与T细胞共培养,从与肿瘤细胞发生反应的T细胞中克隆出TCR基因。
α和β链与CD3复合体中的Y-、6-、ε-、<-链相关。
当TCR与肿瘤细胞表面MHC复合体提呈的肿瘤相关抗原片段结合后,免疫受体酪氨酸基活化基序发生磷酸化,引起胞内信号传导,导致T细胞释放细胞因子和毒性复合体。
TCR基因的优点在于TAA可以从肿瘤细胞中整个蛋白克隆出来,包括胞内部分。
所以,无论肿瘤相关抗原发生变异与否,TCR基因工程化T细胞抗肿瘤细胞的反应接近于体内真实的免疫反应反应过程。
但是,应用TCR的局限性在于,因为MHC限制的存在,每个TCR基因只能用于一部分病人。
因此,为了扩大基因工程化T细胞的适应症,非MHC限制性的基因重组CAR的方法就诞生了。
CAR主要由胞膜外抗原结合区、铰链区和胞内信号传导区三部分构成。
膜外区是一段单链可变区结构域(single chain Fv domain,scFv),具有特异性识别并结合TAA的功能。
其构成是将单克隆抗体的重链可变区(the variable region of heavy chain, VH)和轻链可变区(the variable region of light chain, VL)用一可弯曲的多肽接头(Linker)将VH和VL连接起来,构成VH-Linker-VL或VL-Linker-VH。
铰链区通常是由免疫球蛋白超家族组成,比如CD8, CD28和IgG。
胞内信号传导区主要是由CD3复合体中的ζ-链组成。
近年来,随着研究的深入,人们发现,在胞内区的信号传导区加入共刺激分子如CD28或／和CD137,可以加强T细胞的抗肿瘤免疫反应活性,因此,出现了二代及三代的CAR。
表达CAR的T细胞可以直接识别并结合肿瘤细胞表面的TAA, CAR将信号传入T细胞内,激活T细胞分泌细胞因子包括穿孔素、颗粒酶、INF-γ、TNF-α等,从而发挥杀伤肿瘤细胞作用。
因此,CAR T细胞是MHC非限制性的。
CAR T细胞将抗体-抗原特异性结合能力以及T细胞介导的杀伤功能结合于一体,制作简单,应用广泛,是免疫抗肿瘤治疗的重要方法。
嵌合性抗原受体方法应用的关键是确定一种肿瘤相关性抗原,在肿瘤细胞表面高表达,而在正常组织中无表达或者低表达。
原癌基因人上皮生长因子受体2(human epidermal growth factorreceptor2, Her-2/neu)又称HER2或C-erbB2基因,在多种肿瘤的发病及临床进程中发挥重要作用,体外与动物实验已明确显示HER2/neu基因扩增、蛋白过度表达在致瘤转化和肿瘤发展中起着关键作用。
研究证实：30%以上的人类肿瘤组织中,如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、宫颈癌、前列腺癌、胃癌、唾液腺癌、舌癌、头颈部鳞癌、非小细胞性肺癌等,均伴有Her2/neu基因的扩增及p185蛋白的过度表达,而正常组织中p185蛋白为阴性或微量表达。
而在乳腺癌中,大约有1/3的病人过表达HER2蛋白。
过表达HER2蛋白使肿瘤的侵袭性更强,是乳腺癌病人预后不良的独立的危险因素。
尽管抗HER2单克隆抗体如曲妥株单抗在临床的应用使部分病人获益,但是其价格昂贵,很大程度上限制了其大规模临床应用。
HER2蛋白位于细胞表面,容易被抗体识别,因此,HER2蛋白可作为表达嵌合性抗原受体T细胞抗肿瘤治疗的一个理想靶点。
中国科学技术大学免疫学研究所刘兢教授课题组采用表面表位包埋法(surfaceepitope masking method, SEM)生产的人源化单克隆抗体A21是一种新型的抗ErbB2抗体,它具有很强的结合特异性和抑瘤活性；可特异性识别HER2胞外区C-端的第Ⅰ结构域,远离HER2受体二聚化功能位；而帕妥珠单抗及曲妥珠单抗分别识别第Ⅱ及第Ⅳ子域。
因此,chA21是不同于曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的新型的抗HER2的单克隆抗体,可以无空间限制性的识别p185蛋白的同源二聚体。
以这种新型的抗HER2的抗体为基础的CAR T细胞过继性免疫治疗肿瘤目前尚无人研究。
本研究中的人源化的抗HER2的ch A21scFv由中国科技大学刘兢教授惠赠。
目的本研究旨在以ch A21scFv为基础构建靶向HER2的第二代(chA21scFv-28ζ)嵌合性抗原受体,利用慢病毒载体将嵌合性抗原受体基因转染至T淋巴细胞；观察表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞的生物学特点；评价表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞体外的抗肿瘤的作用。
方法1.重叠PCR法构建靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ,并制备成慢病毒颗粒。
2.利用流式细胞仪技术检测肿瘤细胞表面HER2抗原的表达。
3.利用慢病毒载体将嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ基因转导至T淋巴细胞,利用流式细胞仪技术检测T淋巴细胞表面嵌合性抗原受体的表达效率以及生物学特点。
4.检测表达嵌合性抗原受体的T淋巴细胞在体外抗HER2+肿瘤功能：ELISA 法检测细胞因子释放,51Cr释放实验检测CART细胞杀伤肿瘤细胞的能力。
结果1.成功构建了靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ并进行测序。
2.流式细胞仪分析表明人乳腺癌细胞SKBR3、T47D、MCF-7、MDA-MB-231和卵巢癌细胞株SKOV3, OVCAR3, A2780和A1847都不同程度的表达HER2,其中SKBR3、SKOV3为高表达,其他细胞株为中表达或者低表达。
人乳腺癌细胞株MDA-MB-468为HER2阴性的肿瘤细胞株,小鼠肺癌细胞株TC-1也不表达人HER2抗原。
3.靶向HER2的嵌合性抗原受体chA21scFv-28ζ基因通过慢病毒载体成功转入T淋巴细胞并高表达,培养扩增后约75%的淋巴细胞为CD8+T淋巴细胞,并大部分(约80%)呈中央记忆型(CD45RO+CD62L+)。
4.表达靶向HER2的chA21scFv-28ζ嵌合性抗原受体的T细胞在体外能够特异性识别HER2(+)的肿瘤细胞,并大量释放细胞因子IFN-γ和IL-2。
表达靶向HER2的chA21scFv-28ζ嵌合性抗原受体的T细胞能够杀伤并裂解HER2(+)的乳腺癌及卵巢癌细胞系,但不能裂解HER2(-)的肿瘤细胞系。
结论1.chA21scFv-28ζ CAR设计成功,并能制备成慢病毒颗粒；2. chA21scFv-28ζCAR可以成功转染T细胞并在T细胞内稳定的表达；3. chA21scFv-28ζ CAR转染T细胞分化为中央记忆型,并能大量增殖,其中绝大多数为CD8+T细胞；4.chA21scFv-28ζ CAR T细胞可以高效裂解HER2阳性的肿瘤细胞并分泌大量的细胞因子INF-γ和IL-2。
研究背景尽管一代的CAR T细胞在实体瘤中基本上没有取得明显的临床效果,但是以二代及三代CAR为基础的T细胞过继免疫抗肿瘤治疗已在多种肿瘤的临床实验中显示成效,在血液系统肿瘤中有更明显的优势。
Pule等对8例晚期神经母细胞瘤患者中应用CAR T细胞治疗,4例病人的肿瘤出现了坏死,其中1例病人获得完全缓解。
Kochenderfer等对4例晚期淋巴瘤患者进行CART细胞治疗,3例病人获得部分缓解。
美国宾夕法尼亚大学的Carl June教授研究组利用CAR T细胞治疗3例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者,发现CAR T细胞可以在体内扩增1000倍以上,维持有效抗肿瘤活性、清除CLL细胞达6个月以上。
部分CAR T细胞甚至可以以记忆细胞形式存在,在病人体内再次接触CLL细胞时产生快速反应。
其中,2例患者治疗后病情达到完全缓解。
该研究结果刊登于《Sci Transl Med))和《N Engl JMed》上。
因此,CAR T 细胞过继免疫抗肿瘤治疗具有十分广阔的临床应用前景,而Maus在等更是把CART细胞形容成血液系统肿瘤中的“第一把交椅”。
CART细胞在实体肿瘤中的重要性也被大家所认识,针对多种肿瘤相关抗原的临床实验也在进行当中。
前期HER2特异性的CART细胞主要是是曲妥珠单抗为基础,并已经在许多的肿瘤模型中取得成功,包括乳腺癌,卵巢癌,髓母细胞瘤,胶质母细胞瘤和骨肉瘤。
本研究中所采用的chA21为新的抗HER2的单克隆抗体,它与HER2蛋白的结合位点不同于曲妥珠单抗及帕妥珠单抗。
我们已经从体外实验发现,chA21scFv-28ζCAR可以成功转染T细胞并在体外高效裂解HER2阳性的肿瘤细胞,所以,以chA21为基础的HER2特异性的chA21scFv-28ζ CAR T细胞的抗肿瘤效果值得进一步研究。
目的本研究旨在观察表达chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞在HER2+R乳腺癌小鼠肿瘤模型中的作用特点,评价chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞对HER2+乳腺癌肿瘤生长的影响。
方法1.利用NOD-SCID小鼠和HER2+乳腺癌细胞株SKBR3来构建小鼠乳腺癌肿瘤模型。
2.小鼠成瘤后,利用尾静脉注射的方法向小鼠体内注射2x107chA21scFv-28ζ CART淋巴细胞,每周一次,共2周。
以未转染的激活T细胞作为对照。
3.游标卡尺记录小鼠肿瘤体积的变化。
4.小鼠肿瘤体积达到2mm3时,处死小鼠,获取小鼠肿瘤组织,称重,并免疫组化法检测肿瘤组织内人CD3+T淋巴细胞。
结果1.成功构建HER2+小鼠乳腺癌SKBR3肿瘤模型。
2.小鼠体内注射未转染T细胞及chA21scFv-28ζ CAR T淋巴细胞后小鼠位出现腹泻、体重下降、皮疹等不良反应。
治疗组小鼠肿瘤体积逐渐缩小,对照组小鼠肿瘤组织生长迅速。
3.免疫组化结果显示,治疗组小鼠肿瘤组织内可以检测到大量CD3+的人T淋巴细胞,对照组只检测到少许CD3+的人T淋巴细胞。
结论1. chA21scFv-28ζCART细胞可以有效抑制HER2阳性乳腺癌肿瘤在NOD-SCID小鼠体内的生长。
2. chA21scFv-28ζ CAR T细胞通过定位于HER2阳性的肿瘤组织内发挥抗肿瘤作用。