酶免疫试验专题知识讲座培训课件

酶免疫试验专题知识讲座
6
2/5/2021
原理及特点
特点： 灵敏度高、特异性强、准确性好 酶标记试剂能够较长时间保持稳定 操作简便、对环境没有污染。 易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的新方法。
酶免疫试验专题知识讲座
7
2/5/2021
第一节 酶免疫试验的组成要素
酶免疫试验专题知识讲座
8
2/5/2021
酶免疫试验专题知识讲座
26
2/5/2021
2 酶免疫技术是根据何种特性分为均相和异相的（ ） A 抗原特性 B 抗体特性 C 抗原抗体反应后是否需要分离结合和游离酶标记物 D 酶的稳定性 E 载体特性
17
第二节 酶免疫试验的分类
酶免疫试验专题知识讲座
18
2/5/2021
酶
酶免疫组化 组织切片或其它标 本中抗原的定位
免
疫
均相：不需要分离
试
验 酶免疫测定技术
液体标本中抗原或
固相酶免疫试验 异相
抗体的定性和定量
液相酶免疫试验
酶免疫试验专题知识讲座
19
2/5/2021
Βιβλιοθήκη Baidu
一、均相酶免疫试验
用于小分子激素和半抗原（如药
2,2′-氨基-二(3-乙基-
苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐
酶免疫试验专题知识讲座
15
2/5/2021
(ABTS)
酶和酶作用底物
HRP的常见底物
OPD反应后显橙黄 TMB反应后显蓝色 ，
色，加酸终止反 加酸终止反应后变
应后呈棕黄色， 为黄色,测定波长
测定波长492nm。 450nm ，稳定，无
不稳定，致癌性。 致癌性，ELISA中应
25
2/5/2021
第二节 习 题
1 关于均相酶免疫测定，下列哪项正确（ ）
A 多用于大分子物质的测定
B 酶标抗原和抗体在固相载体表面形成复合物，作用 于底物显色
C 需要分离结合和游离酶标记物
D 常利用酶标记抗原与抗体结合后的空间位阻降低酶 活性
E 酶标抗原与待测抗原竞争结合抗体，故最终酶活力
的大小与标本中抗原量负相关
23
2/5/2021
克隆酶供体免疫分析 （CEDIA）示意图
酶免疫试验专题知识讲座
24
2/5/2021
与均相 二、异相酶免疫试验
不同之处
需分离游离与结合的酶标记物
分类：液相酶免疫测定
固相酶免疫测定
以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联
免疫吸附试验（ELISA） 是目前最为常用
的固相酶免疫测定
酶免疫试验专题知识讲座
•利于反应充分进行
•固相方法简便易行，快速经济
•微孔板
•磁微粒
•膜载体 酶免疫试验专题知识讲座
10
二、包被抗原或抗体
包被
coating 将抗原或抗体结合于固相载体
（直接包被、间接包被）
封闭
block ing
2/5/2021
用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～
20%小牛血清消除固相载体表面未
结合的位点，消除非特异性吸附
三大经典标记技术
放 荧酶 射 光免 免 免疫 疫 疫技 技 技术 术术
酶免疫试验专题知识讲座
1
2/5/2021
掌握：酶联免疫吸附试验； 熟悉：酶和酶作用底物、固相载体、酶
免疫测定的应用； 了解：酶标记抗体或抗原、酶免疫技术
的分类；
酶免疫试验专题知识讲座
2
2/5/2021
第一节 酶免疫试验的组成要素
酶免疫试验专题知识讲座
13
2/5/2021
三、酶结合物
1.辣根过氧化物酶（HRP） 2.碱性磷酸酶 （ALP) 3.β-半乳糖苷酶 (β-Gal)
酶免疫试验专题知识讲座
14
2/5/2021
四、酶的显色底物与酶促发光底物
常用底物 四甲基联苯胺 TMB
HRP的常见底物
邻苯二胺 (OPD)
5-氨基水杨酸 (5-ASA )
克隆酶供体免疫分析 CEDIA
cloned enzyme donor
2/5/2021
immunoassay 酶免疫试验专题知识讲座
21
酶放大免疫分析技术EMIT示意图
常用酶：葡萄糖-酶免6疫试-验磷专题知酸识讲座脱氢酶和溶菌酶
22
2/5/2021
酶放大免疫分析技术EMIT示意图
酶免疫试验专题知识讲座
酶免疫试验专题知识讲座
11
直接包被
稀释抗原或抗体（用0.05mol/LPH9.6的碳酸
盐缓冲液稀释抗原或抗体到3-10µg/mL）
4°c过夜 封闭（牛血清白蛋白或小牛血清）
酶免疫试验专题知识讲座
12
2/5/2021
间接包被
亲和素-生物素化抗体（抗原） SPA-抗体（抗原）
间接吸附于固相载体上
一、固 相 载 体
➢固相抗体或抗原就是把抗体或抗原 结合到固相载体的表面
➢固相抗体或抗原是2/5/非2021 均相酶免疫 技术中将游离和结合的酶标记物 迅速分离的最常用方法
酶免疫试验专题知识讲座
9
要求
种类
2/5/2021
固相载体
•结合抗体或抗原的容量大
•抗体或抗原牢固地固定在其表面
•不影响免疫反应性
酶免疫测定技术 酶免疫组织化学技术
酶免疫试验专题知识讲座
4
2/5/2021
原理及特点 抗原抗体反应的特异性
+ 酶高效催化反应的专一性
酶免疫试验专题知识讲座
5
2/5/2021
原理及特点
原理： ➢酶标抗体（抗原）与抗原（抗体） 的特异性反应 ➢酶对底物的显色反应 ➢对抗原或抗体进行定位、定性或 定量的测定分析
原
物）的测定
理 酶标记物与相应的抗原或抗体结
合后，标记酶的活性会发生改变，
不用分离结合和游离酶标记物，通
过测定标记酶的活性的改变，而确
定抗原或抗体的含量。 酶免疫试验专题知识讲座
20
2/5/2021
均相酶免疫测定 最具代表性的两种技术：
酶放大免疫分析技术EMIT
enzyme-mutiplied immunoassay technique
2/5/2021
用最广泛的底物。
酶免疫试验专题知识讲座
16
酶和酶作用底物
常用底物
ALP 底物
对-硝基苯 磷酸酯 （ pNPP ）
经AP作用后的产物 为黄色对硝基酚， 最大吸收峰波长为 405 nm。
β-Gal 的底物
2/5/2021
4-甲基伞酮基 酶作用后，生成
β-D半-乳糖 高强度荧光物 ，
苷（ 4MUG ） 用荧光计 测量。 酶免疫试验专题知识讲座
第二节 酶免疫试验的分类
第三节 酶联免疫吸附试验
第四节 酶联免疫斑点试验
第五节 发光酶免疫试验
第六节 酶免疫试验的临床应用及常用商品试剂的方法 特点
第七节 影响酶免疫试验的主要因素
酶免疫试验专题知识讲座
3
2/5/2021
酶免疫试验(enzyme immunoassay,EIA)
以酶标记抗体（抗原）作为主要试 剂，将酶高效催化反应的专一性和抗 原抗体反应的特异性相结合的免疫检 测技术。