105例无精子_少精子症患者Y染色体AZF区微缺失检测的研究(1)

105例无精子、少精子症患者Y染色体AZF区

微缺失检测的研究

王文博,江　雨,葛运生,周裕林　(福建省厦门市妇幼保健院产前诊断中心,361003)

摘　要:目的　探讨中国人群无精子、少精子症患者常规6个STS位点检测Y染色体AZF基因微缺失的情况。方法　选取E AA和E MQN推荐的常规6个Y染色体特异性序列标签位点,经2组多重PCR对76例无精子症和29例少精子症男性患者进行Y染色体AZFa、AZFb和AZFc区微缺失检测。其中,8例无精子症患者还同时进行了G带染色体核型分析、荧光Q-显带等细胞遗传学检测。结果　105例患者经6个STS位点检测发现AZF区微缺失9例。其中AZFc(SY254,SY255)缺失7例,AZFb(SY127,SY134)+AZFc(SY254,SY255)缺失2例,未发现AZFa缺失。复合微缺失及其它6例未检出微缺失的患者同时经细胞遗传学分析,发现4例染色体结构异常,2例复合微缺失患者分别为Y等臂染色体:46,X, idic(Y)(q1112)、X和Y等臂染色体的嵌合体:45,X[19]/46,X,idic(Y)(q1112);1例为Y染色体长臂部分失: 46,X.del(Y)(q1112);另1例为Y染色体部分片段复制至15号染色体:46,XY,der(15)t(Y;15)(q1112; p1111)。根据细胞遗传学结果,重新设计STS检测位点,发现Y染色体长臂部分缺失患者存在AZFc(SY243,SY158)的缺失。结论　Y染色体AZF微缺失的检测是临床判断无精子、少精子症患者是否遗传因素的重要手段,但传统的6个STS 位点检测在中国人群中应用尚需进一步验证。同时做细胞遗传学分析对疾病的准确诊断会有很大帮助。

关键词:Y染色体微缺失;多重PCR;序列标签位点(STS);无精子子因子;

中图分类号:Q343 文献标识码:A 文章编号:1006-9534(2008)08-0040-04

R ea sea rch o f m i c r o de l e ti o n de tec ti o n o f AZF reg i o n o n Y ch r om o som e i n105ca se s o f C h i ne se p a ti en ts w ith sp e r m a t o2 gene ti c m a l func ti o n.WAN G W eng-bo,J I AN G Yu,GE Yun-shen,ZHOU Yu-ling.(Central of P renatal D iagnosis,X iam en W o m en&Child Health Care,X iam en,Fujian361003)

Ab s trac t:Objective:To investigate the detecti on of m icr odeleti ons in the Y chr omos ome AZF regi on by six Y chr omos ome STS in 105Chinese patients with s per mat ogenetic malfuncti on.M ethods:Six Y chr omos ome s pecific sequence tagged sites(STS)in AZF re2 gi on recommended by E AA and E MQN were screened t o deter m in m icr odeleti ons by multi p lex PCR in76casese of azoos per m ia and29 cases of oligoasthenoterat ozoos per m ia.M ean while,8cases of oligoasthenoterat ozoos per m ia were analysised by using chr omos ome GTG -banding,Q-banding.Results:AZF m icr odeleti on in the genom ic DNA were observed in9of105cases by6recommened STS sites.7of AZFc(SY254,SY255)m icr odeleti ons and2case of comp lex m icr odeleti on of AZFb+AZFc,none of AZFa.The case with comp lex m icr odeleti on and6other cases with no m icr odeleti on were further analysised by chr omos ome GTG-banding,Q-ban2 ding and F I S H.4cases showed t o have an abnor mal chr omos ome karyotype.One with46,X,idic(Y)(q1112)and45,X [19]/46,X,idic(Y)(q1112)which with comp lex m icr odeleti on of AZFb(SY127,SY134)+AZFc(SY254,SY255); The other abnor mal chr omos ome karyotype were46,X.del(Y)(q1112)which were f ound with a m icr odeleti on of AZFc(SY243, SY158)detected by other STS sites and46,XY,der(15)t(Y;15)(q1112;p1111),separately.Conclusi ons:The detecti on of m icr odeleti ons of the Y chr omos ome is an i m portant method t o hel p the genetics diagnosis of azoos per m ia and oligozoos per m ia.But the selecti on of STS sites needed t o be more investiged.The cyt ogenetics analysis may be very hel pful in diagnosis.

Ke y wo rd s:Y chr omos ome m icr odeleti ons;Multi p lex PCR;Sequence tagged sites(STS)azoos per m ia fact or(AZF)

目前,世界范围内约有15%育龄夫妇患有不孕不育症,其中由于男方原因引起的不育约占50%[1,2]。影响男性不育的因素有很多,其中30%以上的患者是由于基因突变和染色体异常等遗传缺陷引起的。研究证明,Y染色体长臂(Yqll)的无精子子因子(az oos per mia fact or,AZF)是完成生精过程和维持生精功能必不可少的因子,这些区域的缺失可导致男性不育。本研究按照E AA和E MQN推荐的Y染色体序列标签点(STS)设计引物序列进行多重PCR,对105例无精子症及少精子症患者进行了Y染色体微缺失的检测和染色体核型分析。

基金项目:福建省卫生厅青年科研课题(编号:2007-2-40)和福建省厦门市卫生科研课题(编号:W SK0634)

通讯作者:周裕林

对象与方法

1.检测对象　收集2005年9月至2007年9月在本院男性不育和优生优育门诊就诊的男性不育患者105例,年龄在25～33岁之间。按照WHO的诊断标准,对每例男性患者统一标准进行连续3次的精液常规分析,精液离心后沉淀涂片镜检未见有精子者为无精子症,精子密度少于20×106/ m l者为少精症,所检测的105名患者中,无精症患者76例,少精子症患者29例,排除存在染色体数目与结构异常、泌尿生殖道感染及激素水平异常等现象的患者,并尽可能排除输精管阻塞的患者。同时,选择精子数正常有生育能力的男性作阳性对照,正常女性作阴性对照。

2.细胞遗传学染色体分析　取肝素抗凝的患者外周血淋巴细胞按常规的染色体培养、收获、G显带和C显带,必要