信号肽在基因工程中的应用

专有名词
• RER：粗面内质网 • 信号识别颗粒signal recognition particle
（SRP） • ER；内质网 • ribosome receptor 核糖体受体 • SPR receptor 信号识别颗粒受体 signal
peptidase 信号肽酶 • Association of ribosomes with ER
信号肽在基因工程中的应用
什么是信号肽？
• 指新合成多肽链中用于指导蛋白质的跨膜 转移（定位）的N-末端的氨基酸序列
• 一般有16-26个氨基酸残基，其中包括疏水 核心区信号肽的 C 端和 N 端3部分
• 信号肽似乎没有严格的专一性。
信号肽的功能
•指导分泌型蛋白在糙面内质网上合成的决定 因素是蛋白质N端的信号肽。 信号识别颗粒和内质网膜上的信号识别颗粒 的受体等因子协助完成这一过程。
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பைடு நூலகம்
信号肽在基因工程技术与应用
融合gp67 信号肽的慈菇蛋白酶抑制 剂基因在蚕体内表达
1.重组转移载体 pBacPAK-gpAPI2 的构建
pBacPAK-gpAPI2 的 ph. p、gp67 信号肽序列和 A PI2 基因的连接处序列为:
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2. 重组病毒的筛选及表达产物分子量测定
3.血淋巴中表达产物含量的测定
信号肽假说
• 信号肽假说认为，编码分泌蛋白的mRNA在 翻译时首先合成的是N 末端带有疏水氨基酸 残基的信号肽，它被内质网膜上的受体识 别并与之相结合。信号肽经由膜中蛋白质 形成的孔道到达内质网内腔，随即被位于 腔表面的信号肽酶水解，由于它的引导， 新生的多肽就能够通过内质网膜进入腔内 ，最终被分泌到胞外。翻译结束后，核糖 体亚基解聚、孔道消失，内质网膜又恢复 原先的脂双层结构。
• 信号肽是作为一种附着到ER膜上的信号识 别，此可能通过开始合成出的N-端头几个 氨基酸的疏水功能。然后蛋白链插进膜中 ，信号肽埋在膜中的一种蛋白酶所剪切这 时核糖体已完成翻译，蛋白已延着导肽途 经穿过膜。盐冲洗过的膜不能启动核糖体 的结合，它的能力又可以恢复。
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信号肽序列
• 蛋白质跨膜运转信号也是由mRNA编码的。 在起始密码子后，有一段编码疏水性氨基 酸序列的RNA区域，这个氨基酸序列就被称 为信号序列。信号序列在结合核糖体上合 成后便与膜上特定受体相互作用，产生通 道，允许这段多肽在延长的同时穿过膜结 构，因此，这种方式是边翻译边跨膜运转 。
membrane 糙面内质网 • ribosome remain free in cylosol 胞浆中
谢谢观赏！
蛋白质的运转离不开信号肽
跨膜运输和镶入膜内的几种主要蛋白质
新生蛋白质通过同步转运途径进入内质网内腔的主要过程
• 信号肽可使正在翻译的核糖体附着到 RER膜上。在信号肽指引下蛋白质在 细胞内的输运
• 核糖体是通过信号肽的功能而附着并 合成分泌蛋白的。因此游离的核糖体 和膜结合核糖体之间本身并无差异。
4 . 表达的慈菇蛋白酶抑制剂的活性测定
参考文献
• 生物技术通讯 • 堵国成。陈坚，等．大肠杆菌高效表达重组蛋白策略．中
国生物工程杂志，2019，27(9)：103 龙建银，王会信．生物化学与生物物理进展，１９９７，２４（２） ：１２６￣１３２．１４ • 杨运桂，徐京宁，等．生物化学与生物物理学
表达产物经 SDS-PAGE电泳 ,脱色后用凝胶干燥 仪干燥 ,用Bio-Rad GS-670 图像分析仪进行扫描处 理。测得 CrBK-API4 感染的血淋巴上清液中表达的 API占可溶性蛋白含量的 9 %,CrBK-gpAPI2 感染的 血淋巴上清液中表达的 API占可溶性蛋白含量的 7 %。血淋巴中可溶性蛋白总量测定表明:CrBK-API4 感染的血淋巴上清液中为 40mg/ mL ,CrBKgpAPI2 感染的血淋巴上清液中为 55mg/ mL。从而 得到血淋巴中表达的慈菇蛋白酶抑制剂的绝对含量 :CrBK-API4 感染的血淋巴中为 3.6mg/ mL ,CrBKgpAPI2 感染的血淋巴中为3.8mg/ mL。两者的绝 对表达量差别不大。