庆大霉素鼓室给药进入内耳的途径及对内耳功能影响的研究

方法：回顾性分析我科2012年5月-2013年5月年行显微镜下鼓室 内注射庆大霉素(30mg/m 1)治疗的17例单侧难治性眩晕患者,于 术前及术后3周分别行纯音测听检查及cVEMP检查。比较术前术 后患者听力及cVEMP结果。
结果：17例难治性眩晕患者随访12个月-24个月,术后随访至今 未诉眩晕复发。2例迟发型膜迷路积水患者患侧耳全聋,15例梅 尼埃病患者中术前患耳平均气导听阈为63.8dB HL,术后患侧耳 平均气导为64.4dB HL,手术前后听力差异无统计学意义 (P>0.05)。
结论：1)庆大霉素圆窗给药对听力的影响较镫骨区给药显著,以 高频听力损失为主；2)药物进入内耳后对耳蜗毛细胞毒性作用 受药物浓度影响。第四部分小剂量庆大霉素鼓室内注射治疗难 治性眩晕对听力及球囊功能影响的临床研究目的：从动物实验 和临床研究两方面探究庆大霉素局部给药后对听力和前庭功能 的影响,指导临床用药。
对于GTTR圆窗进入占59.8%,镫骨区为40.2%。二甲基亚砜对圆窗 膜和镫骨区均有影响,对镫骨区的影响更大,而苯甲醇对圆窗膜 渗透性影响更大。
第二部分庆大霉素-德克萨斯红圆窗或卵圆窗给药后在内耳分布 的的研究目的：通过圆窗、卵圆窗分别给药,观察GTTR在内耳不 同器官的分布,探究药物进入内耳的途径。方法：成年豚鼠耳后 入路,分别在圆窗、镫骨区给予浸有4ul GTTR(0.4mg/ml)的胶原 海绵,给药后7天处死,多聚甲醛蜗尖灌注固定、取材,行免疫荧 光染色(Alexa Fluor(?) 488 Phalloidin标记毛细胞,DAPI标记 细胞核),了解GTTR的在内耳不同部位的分布情况；激光共聚焦 荧光显微镜观察并采集图像,Adobe photoshop CS5处理图 片,Image J软件对共聚焦显微镜图像进行荧光半定量分析,SPSS 19.0进行统计分析。
庆大霉素鼓室给药进入内耳的途径及 对内耳功能影响的研究
第一部分庆大霉素-德克萨斯红局部给药后内耳药代动力学的研 究目的：鼓室内局部给药(GTTR)后通过水平半规管外淋巴液采 样了解药物在外淋巴液中的药代动力学变化,探究GTTR进入内耳 的途径。方法：成年豚鼠中耳内给予50u1不同溶剂配制的 GTTRt(0.2mg/ml)溶液,一小时后外半规管造瘘,从瘘口连续采集 外淋巴液；检测不同样本光密度来计算药物浓度,观察药物代谢 情况,并通过模型模拟内耳淋巴液流动的生理过程比较药物进入 途径,并观察不同试剂对药物浓度的影响。
结果：1)中耳局部给药后药物可通过圆窗膜和卵圆窗即镫骨区 进入内耳,59.8%的GTTR通过圆窗膜渗透进入,而从镫骨区直接到 达内耳的占40.2%。2)二甲基亚砜(DMSO)和苯甲醇(Benzyl)均使 更多的药物进入内耳,提高了内耳药物浓度。
DMSO组圆窗进入占56.0%,镫骨区44.0%；Benzyl组89.4%药物通 过圆窗径路,镫骨区10.6%。结论：1)圆窗膜、镫骨区均为药物 进入内耳的途径,其中圆窗膜为主要途径；2)不同药物进入途径 有差别,具有药物选择性,且通透性受不同药物的影响很大。
可见术后阈值升高,潜伏期延长。术前术后患侧VEMP阈值及P1潜 伏期的结果差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论：临床应用小剂量庆大霉素鼓室内注射后,患者听力损失不 显著,cVEMP检查证明了其前庭毒性可以有效地抑制或破坏球囊 功能。
结果：圆窗组及卵圆窗组GTTR在球囊斑的聚集均最高。圆窗组 中基底膜底圈毛细胞中GTTR荧光强度高于椭圆囊斑和壶腹嵴； 而卵圆窗组中壶腹嵴GTTR的分布要多于基底膜和椭圆囊。
通过荧光半定量分析各器官整体铺片中GTTR荧光强度,圆窗组各 终末器官中的GTTR分布均高于卵圆窗组。结论：GTTR在圆窗或 卵圆窗局部给药后,在内耳终末器官的分布存在差异性。
cVEMP检查结果,2例术前VEMP未引出,15例术前VEMP患侧平均阈 值为(82.5±5.59) dBnHL, P1平均潜伏期为(16.64±2.38)ms。 术后7例(41.2%)VEMP未引出,其他10例VEMP患侧平均阈值为 (89±4.90)dBnHL, P1平均潜伏期为(18.52±1.62)ms。
结果：1庆大霉素圆窗、卵圆窗局部给药后7天,圆窗组8kHz32kHz阂值均不同程度地升高,以高频听力损失较为显著,与术前 相比差异有统计学意义。卵圆窗组听力在8kHz-32kHz基本无改 变,32kHz出现听力出现损失,与术前相比差异不显著。
圆窗组较卵圆窗组相比听力损失较为严重,8kHz两组无统计学差 异,16kHz,24kHz,32kHz两组有显著性差异(P<0.01)。2)GT局 部给药7天后圆窗组及卵圆窗组在耳蜗基底膜均有分布,主要分 布在外毛细胞,底圈分布多于中圈,且可见毛细胞的缺失。
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两种给药方式在内耳各终末器官均有分布,且圆窗组药物进入多 于卵圆窗组。GTTR在球囊斑的聚集最高。
第三部分庆大霉素圆窗或卵圆窗给药后在耳蜗的分布及对听力 影响的研究目的：探索庆大霉素鼓室给药后进入内耳的途径,比 较圆窗、卵圆窗(镫骨区)分别给药对听力的影响,指导临床用药。 方法：成年豚鼠术前行ABR测试后耳后入路暴露圆窗、镫骨区, 分别在圆窗、镫骨区给予浸有4u1庆大霉素((GT) (30mg/ml)的 胶原海绵,给药后1天、7天分别行ABR测试,并在7天后处死,多聚 甲醛蜗尖灌注固定、取材,行免疫荧光染色(anti-gentamicin标 记庆大霉素,Alexa Fluor(?) 488 Phalloidin标记毛细胞,DAPI 标记细胞核),了解庆大霉素的在耳蜗的分布情况；激光共聚焦 荧光显微镜观察并拍照,Adobe photoshop CS5处理图片,Image J软件测对共聚焦显微镜图像进行荧光半定量分析,SPSS 19.0进