抗生素筛选浓度
抗生素筛选浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22卩山滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB 培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度20卩g/ml （严紧型质粒）60卩g/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度25
卩g/ml （严紧型质粒）170卩g/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml溶于水-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度5 mg/ml溶于乙醇-20 C保存工作浓度10
卩g/ml （严紧型质粒）50卩g/ml （松弛型质粒）质粒类型：。
抗生素生产菌株的筛选和鉴定方法介绍
抗生素生产菌株的筛选和鉴定方法介绍随着人口的增加和人类寿命的延长，抗生素的需求也不断地增加。
然而，由于人类过度使用和滥用抗生素，导致一些细菌在漫长的进化过程中逐渐变得对抗生素无效。
因此，开发和生产更多有效的抗生素已成为当今最迫切的医学需求之一。
在抗生素的开发和生产过程中，首先需要筛选和鉴定一些具有良好生产潜力的微生物菌株。
本文将简要介绍一些现代的筛选和鉴定方法。
一、筛选方法1、基于部位和病原性筛选在开发新型抗生素之前，需要先确定需要研究的微生物的种类和类型。
一些微生物部位和病原性较高的物种通常都具有良好的抗生素产生能力。
因此，在一些野外调查和实验室研究中，选择一些来源于人体、土壤或其他具有较高病原性的微生物菌株进行分类和筛选，可以提高竞争和筛选的成功率。
2、基于代谢能力筛选抗生素是由微生物在代谢过程中产生的一种物质。
因此，一些具有较高代谢能力的微生物也往往具有良好的抗生素生产能力。
通过对微生物进行代谢分析，筛选代谢物质含量较高的微生物，可以提高抗生素生产菌株的筛选效率。
3、基于遗传分类筛选通过比较不同微生物菌株的遗传差异，可以快速确定抗生素生产潜能较高的菌株。
实践中，通过基因组测序和系统进化分析，可以较准确地鉴定不同微生物的生物制剂学特点和属性。
二、鉴定方法筛选出抗生素生产菌株之后，需要对其进行鉴定。
鉴定微生物菌株的主要目的是为了确定其物种分类、生理特性和抗生素产量等信息。
以下是一些现代的鉴定方法。
1、基于生理和生化特性鉴定通过观察微生物生长特性和代谢能力，进行生理和生化鉴定，可以粗略地确定微生物的物种分类和菌株特性。
这些鉴定方法包括培养、染色、酸碱度测定和菌落形态分析等。
2、基于分子生物学特性鉴定分子生物学技术，如DNA测序和PCR分析等，可以准确地鉴定微生物的种类和组成，并确定其基因型和生物制剂学特性。
这些技术可以准确定位和分析微生物社群中的有益菌株，并提供基于遗传变异和合成生物学的抗生素遗传创新。
常见抗生素配方
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）缩写：Amp溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）缩写：Cab溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）缩写：Kan溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）缩写：Cm溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）缩写：Sm溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）缩写：Tet溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
G418详细信息
保存于运输说明：2-8℃详细信息：G418 sulfate (Geneticin) 现货供应说明：真核表达筛选用抗生素，可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。
筛选哺乳动物细胞，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升；筛选植物细胞，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升；筛选酵母，推荐起始浓度为500微克/毫升。
根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。
分子式：C20H 40N4O10·2H2SO4分子量：692.71CAS＃：108321-42-2外观：白色粉末特性：溶解性：可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。
溶解后，0.22μm过滤除菌，分成小包装，4℃可保存12个月，-20℃保存时间更长。
最常用的储存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制，浓度为50mg/ml。
使用HEPES配制的好处是：加入储存液不会改变培养体系的pH值。
储存条件：2-8℃Ordering InformationDescription Quantity Price(RMB)Cat. no.产地G418 sulfate 1g45011811-023 Invitrogen 5g200011811-023 Invitrogen其他公司产品：产地货号规格促销价赠送Gibco11811-0231G450(元)单道计时器一个Gibco11811-0235G2000元送4G优盘一个Amresco E5891G380元单道计时器一个Amresco E5895G1250元送4G优盘一个Merck3458101G400元单道计时器一个Merck3458105G1610元送4G优盘一个Promega V79831G420元单道计时器一个Promega V79835G1700元送4G优盘一个G418溶液的配制配的时候就是用配好的HEPES溶G418，然后过滤，不用高压灭菌了，配好后分装，-20度保存，用的时候取一管放4度。
潮霉素B溶液(Hygromycin B)
leagene 。
com 北京雷根生物技术有限公司
潮霉素B 溶液
产品简介：
潮霉素B(Hygromycin B) 是一种由吸水链霉菌产生的抗生素，能够抑制细菌、真菌和一些高等真核生物细胞内的蛋白质生物合成来。
潮霉素B 属于是氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质的合成来阻止微生物生长，对原核细胞与真核细胞都是抑制作用。
Leagene Hygromycin B solution 常用于转基因实验的抗性筛选，筛选具有潮霉素B 的抗性基因。
产品组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般植物细胞筛选浓度在20～200μg/ml ，动物细胞筛选浓度50～1000μg/ml ，应根据具体实验选择最佳筛选浓度。
编号 名称 CA0012 CA0012 Storage Hygromycin B solution (50mg/ml) 10ml 20ml 4℃ 避光
使用说明书 1份。
抗生素筛选流程及步骤
抗生素筛选流程及步骤下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!抗生素筛选流程。
1. 收集样品。
从土壤、水、沉积物或其他环境中收集样品。
慢病毒介导SiRNA沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳MOI值及筛选抗生素浓度
慢病毒介导SiRNA沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳MOI值及筛选抗生素浓度金小花;秦高【摘要】目的：探究慢病毒介导RNAi沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳感染复数（ multiplicity of infection，MOI）及BSD基因筛选抗生素（ blasticidin）浓度。
方法荧光标记小鼠SGMS2干扰阴性对照慢病毒并按照MOI值0、10、30、60、120（ TU number／cell）分别侵染INS-1空白细胞，培养72 h后使用荧光显微镜拍照并计算细胞的荧光比率（％）及死亡率（％），以确定最佳MOI值。
小鼠胰岛素瘤INS-1空白细胞中加入0、1、2、3μg／mL blasticidin，第7天时采用MTT法检测细胞的死亡率，以确定细胞抗生素敏感浓度。
使用SGMS2干扰阴性对照慢病毒及SGMS2干扰慢病毒（病毒滴度：1×108 TU／mL）按照最佳MOI值侵染细胞，并用blasticidin敏感浓度进行阳性细胞筛选，获得混合系细胞。
当细胞的荧光率达90％时，进行单克隆稳转细胞系的构建。
结果最佳MOI值为60，此时细胞的荧光率达100％，但细胞的死亡率＜0.5％，细胞保持原有的形态。
当blasticidin敏感浓度为2μg／mL，此时空白细胞失去原有的贴壁性，全部死亡。
INS-1-SEMS2细胞第2次检测的Ct值28.21大于第1次检测的Ct值27.58，且siRNA的干扰效率为77.78％，siRNA 成功表达，混合稳转细胞系构建成功。
成功构建小鼠胰岛素瘤INS-1-SEMS2单克隆细胞系。
结论慢病毒介导RNAi沉默基因SGMS2的单克隆细胞系构建成功。
%Objective To optimize multiplicity of infection ( MOI) and antibiotics ( blasticidin) concentration selecting BSD gene in construction of monoclonal stable cell line by lentivirus vector-mediated RNA interence silenced gene SGMS2.Methods The INS-1 cells were transfected byfluorescence labeled negative control SGMS2-siRNA lentivirus at MOI of 0, 10, 30, 60 and 120 TU number/cell.The cells were photographed under fluorescent microscopy after 72 h cultivation, then fluorescence ratio and apoptosis rate were calculated to determine optimal MOI.The INS-1 cells were treated by blasticidin with different concentrations of 0, 1, 2, and 3 μg/mL, and the apoptosis rate was observed to acquire optimal concentration of antibiotics.The INS-1 cells were transfected by negative control SGMS2-siRNA lentivirus and SGMS2-siRNA lentivirus (virus titer:1 ×108TU/mL) at optimal MOI and positive-transfected cells were selected by blasticidin at optimal concentration, then mixed cell lines were acquired.The monoclonal cell line was constructed at fluorescence ratio of 90%.Results The optimal MOI was 60 with 100% fluorescence ratio, less than 0.5% apoptosis rate and keep original cellular morphology.The optimal concentration of blasticidin was 2 μg/mL with cell adherence disappear and all cells apoptosis.The Ct value of INS-1-SEMS2 cells detected at the second time was 28.21, which was greater than 27.58 at the first time.The interfering efficiency of siRNA was 77.78% which indicated a successful expression of siRNA and construction of monoclonal stable cell line ( INS-1-SEMS2 ).Conclusion The monoclonal stable cell line was successfully constructed by lentivirus vector-mediated RNA interence silenced gene SGMS2.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P51-53,56)【关键词】小鼠胰岛素瘤INS-1细胞;感染复数;BSD基因筛选抗生素;细胞稳转株【作者】金小花;秦高【作者单位】苏州农业职业技术学院食品科学系化学与生物技术教研室，苏州215008;上海诺百生物科技有限公司，上海 200233【正文语种】中文【中图分类】Q78在动物细胞学和分子学试验中，将外源目的基因通过病毒介质转入动物细胞中，是一个非常重要的试验步骤[1]。
geneticin(遗传霉素-新霉素)使用说明书-20210121zjr1
遗传霉素（Geneticin）使用说明书◼产品包装和保存条件注：a. 建议分装保存，避免反复冻融，否则活性受到影响。
b. 遗传霉素为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为1年。
◼产品简介遗传霉素（Geneticin，G418）是一种氨基糖苷类抗生素，在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂之一。
它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞产生毒素，包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞，也包括原生动物和蠕虫。
当neo基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。
G418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
不同细胞对G418的敏感度不同，在筛选之前，要通过预实验确定G418的最佳筛选浓度，G418推荐用100~1000 μg/mL的范围筛选合适的浓度，G418最常用的工作浓度为100~700 μg/mL，G418的作用时间是10-14天，可参考文献并进行预实验摸索。
◼产品使用使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）►遗传霉素杀灭曲线的确定（目的稳定转染细胞株，仅作参考）为了筛选得到稳定表达目的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线来实现，至少选择6个浓度。
处理分裂期的细胞时G418的活性最强，因此在添加G418之前需要让细胞培养一段时间。
（1）Day0：未转化细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜。
（2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。
以哺乳动物细胞为例，可设定0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。
（3）Day1：去除旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。
稳定细胞株筛选药物浓度确定方法
稳定细胞株筛选药物浓度确定方法
在使用G418、潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前，需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度。
对于一些常见的细胞系，通常可以在资料中找到推荐的药物浓度。
例如Hela细胞用400 μg/ml的G41或1 μg/ml的嘌呤霉素进行稳定细胞株筛选。
用G418或潮霉素B，选用在5天左右出现细胞大批死亡，2周全部死亡的浓度作为筛选浓度。
对于嘌呤霉素,通常采用在3-4天杀死全部细胞的浓度。
不同批次的药物活性有一定差异。
因此在使用新批次药物时，需要重新测定最佳浓度。
筛选抗生素的推荐使用浓度（μg/ml）
抗生素工作范围筛选浓度维持用量
G418 50-800 400-500 100
Hygromycin 50-800 200 100
Puromycin 0.25-2 0.5-10 0.25
1、在加入筛选药物前一天将细胞以50%密度接种到6孔板。
第二天在培养基中按G418(0,50,1000,200,400,800μg/ml)或者嘌呤霉素（0,1,2.5,5,7.5,10μg/ml）加入。
2、用G418筛选处理5-10天。
每2天观察细胞一次。
每4天跟换新的有抗生素的培养基（如果有必要可以更换得更勤）。
直到得到最佳浓度。
3、用嘌呤霉素处理4-7天。
每2天跟换新的有抗生素的培养基。
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度
普通使用的抗生素的贮液和工作液浓度下面的内容摘自《分子克隆》第三版附录2①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度氨苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）羧苄青霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 20 μg/ml （严紧型质粒） 60 μg/ml （松弛型质粒）氯霉素贮液浓度 34 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 25 μg/ml （严紧型质粒） 170 μg/ml （松弛型质粒）卡那霉素贮液浓度 10 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）链霉素贮液浓度 50 mg/ml 溶于水 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）四环素贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇 -20℃保存工作浓度 10 μg/ml （严紧型质粒） 50 μg/ml （松弛型质粒）利福平，Rifampicin (INN) 简写为Rif。
分子式：C43H58N4O12，相对分子质量为822.94022 [g/mol]。
化学名 3-[[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基]-利福霉素利福平是一种半人工合成的抗生素，最初从地中海氏拟无枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）中获得。
利福平为利福霉素类半合成广谱抗菌药，对多种病原微生物均有抗菌活性。
该药对结核分枝杆菌和部分非结核分枝杆菌（包括麻风分枝杆菌等）在宿主细胞内外均有明显的杀菌作用。
嘌呤霉素筛选浓度 (2)
未知驱动探索，专注成就专业
嘌呤霉素筛选浓度
嘌呤霉素（Puromycin）是一种常用的抗生素，可用于筛选经过质粒转染的细胞中是否有成功表达了融合蛋白或其他感兴趣的基因。
嘌呤霉素的浓度应根据具体实验的需求和细胞的特性来进行确定。
一般来说，嘌呤霉素的浓度可以在0.5-10 μg/ml范围内进行筛选。
初始筛选通常使用较高浓度（如2-10 μg/ml），以确保只有成功表达了目标基因的细胞能够存活下来。
随后，可以逐渐降低嘌呤霉素的浓度，以获得高达100%的筛选效率。
在实验过程中，可以通过处理并荧光显微镜观察细胞的存活情况，或者进行细胞增殖和生存率的测定，从而确定最佳的嘌呤霉素筛选浓度。
实验者也可以参考文献或嘌呤霉素的使用说明来选择适当的浓度。
1。
转染、G418筛选、单克隆化的总结
转染、G418筛选、单克隆化的总结筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。
2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。
但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。
neo就是编码3‘磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素和G418。
在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转转染时不加其它抗生素。
3，汇合度对G418筛选结果的影响很大，一般筛选时汇合度不宜超过50%4，G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。
具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/ml，在100ug/ml~1mg/ml的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。
一个具体试验：3*106个细胞电转后，分别接种1/4000，1/1000，1/300细胞到24孔板中，48h后加药筛选，此时1/300细胞孔内大约50%汇合度。
理论上1/4000孔内应有4%的汇合度。
筛选9天后，观察1/4000孔内有两三个克隆，按比例1/300孔内应该有几十个克隆，事实上，它们几乎全死光了，只有几个克隆。
加药时间和维持浓度1，由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。
所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。
随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。
这时药物浓度可以降至200ug/ml。
2，加抗生素的时机，主要是考虑插入到细胞基因组的抗性基因是否已经得到表达。
转基因棉花筛选中抗生素浓度的选择研究
ｍｇ・ ６个浓 度梯 度 ， 复 ３ 。 Ｌ 重 次 １ ２田问筛 选 验 。 供试 材 料 ： 那霉 素 （ ． 卡 Ｋｍ） 每 ，
支 ５ｇ 。彩色 棉供试 品 系为绿 色 棉 ＧＣ ０ １１２ １ １ －－ 、棕 色棉 Ｂ １ １８６ 白色棉 为 ９ ０ Ｃ ０ —～ ， ５ ５和 ９ ０ 。上述 ４个 ７４ 品系 均 由甘 肃省农 科 院育成 。 试 验设计 ： Ｋｍ 用 纯净 水 配 制成 ２ ０ 将 ０ ０ ｍｇ・
Ｌ一 ３ ０ ｍ ｇ ・ Ｌ一 ４ ０ 、 ０ ０ 、 ００ ｍ ｇ ・ Ｌ一 、５ ０ ｍ ｇ ・ ０ ０
花 叶片进 行卡那霉 素抗 性筛 选 ， 取 得 了较 为 肯定 都
的效果 。胡丽 华 等人 报 道 大 田筛 选 所 使 用 的卡 那 霉 素的适 宜浓度 为 ４ ０ ０ ０ｍｇ・ ｆ 。但 是 研 究地 域 Ｌ 。 不同， 结果 也不尽 一致 。为 探 索甘 肃河 西 地 区 田问
１ ２×１ Ｏ
８７ ． １ ４ Ｏ．
３１ ６ ．
２ ．７ ８
陆早 １ ７号
】 一 ３３ 】
０（ ＣＫ）
９５ ．
９． ７
３１ ５ ．
２９ ．８
３小 结 与讨论
３ １通 过 低 能 量 Ｎ 离 子 束 注 入 ， 以 明 显 改 变 棉 ． 可
低 能量 Ｎ 离 子 束 注 入 ， 生 的 变 异 较 明 显 ， 于 控 产 易
维普资讯
游基 画掷 筛邈 蠡案 浓度 询邈洚瓣
： Ｉ 祥 ， 宏 宇 。 秉 贤 。 克 云 Ｆ３ １ 南 张 冯
（ 肃省 农科 院作物研 究所 ， 州 ７０ ７） 甘 兰 ３ ０ ０
再生 苗及 田问筛选 试 验 。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法近年来，随着抗生素的广泛使用以及细菌耐药性的增加，抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）的测定变得日益重要。
MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度，是评估抗菌药物对细菌耐药性的一种重要方法。
下面介绍几种测定抗菌药物MIC的方法。
1. 琼脂扩散法琼脂扩散法是一种经典的MIC测定方法。
该方法基于抗生素与菌株相互作用抑制菌株生长的原理。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入琼脂平板中，并在琼脂表面均匀涂布细菌悬液。
待菌株在琼脂表面生长形成克隆后，观察克隆周围清晰的无菌区域大小，根据无菌区域所对应的抗生素浓度计算MIC值。
该方法简单易行，但由于该方法目测判断，因此存在主观性差异和读片误差的问题。
2. 荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）（Alamar blue）法荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）法是一种高通量及准确性较高的MIC测定方法。
该方法基于菌株呼吸代谢消耗的荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）的发光信号变化来评估抗生素的MIC值。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入微孔板中，并添加细菌悬液及荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑），经过一定时间后读取板上的荧光信号，测算MIC 值。
该方法准确性高，可用于筛选大量样本的抗菌药物敏感性，但需要特殊设备和耗费较多经费。
3. 壳聚糖纳米粒子微滴法壳聚糖纳米粒子微滴法是一种新兴的MIC测定方法。
该方法基于壳聚糖纳米粒子本身具有抑菌作用及微滴原理，实验中将不同浓度的抗生素与含菌液的溶液制成微滴，并添加壳聚糖纳米粒子，待微滴凝胶后进行观察，根据微滴内的细菌生长情况评估折射率值，进而计算MIC值。
这种方法具有较高的准确性和可靠性，但需要特殊仪器和技术支持。
4. 测序MIC法随着测序技术的发展，现已出现测序MIC法。
该方法基于高通量测序技术，对菌株进行全基因组测序，确定细菌株中抗生素耐药基因的编码序列，并进行序列比对和分析，确定抗生素的MIC值。
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法简介Zeocin博来霉素，又称博莱霉素，是一种广泛用于生物学实验中的抗生素。
它可以作为筛选标记在细菌、动物细胞和植物细胞中稳定表达外源基因的重要工具。
使用方法1. 配制浓度Zeocin博来霉素的最佳浓度会因不同细胞类型和实验条件而有所不同，一般建议浓度在50~500 μg/ml之间。
在使用前，需要根据实验需要确定合适的浓度。
2. 稀释制备在实验中，Zeocin博来霉素需要稀释到所需浓度才能使用。
可以将Zeocin博来霉素粉末溶解于适当的溶剂（如蒸馏水或缓冲液）中，制备成所需浓度的工作液。
注意避免使用含有磷酸盐的缓冲液，因为磷酸盐会与Zeocin博来霉素发生反应降低其活性。
3. 添加到培养基中在细胞培养过程中，可以向培养基中添加适量的Zeocin博来霉素。
添加Zeocin博来霉素后，需要进行培养基的混合均匀，以确保Zeocin博来霉素均匀分布在培养基中。
4. 培养细胞将含有Zeocin博来霉素的培养基加入到已经种植有目标细胞的培养皿中，然后进行常规的细胞培养。
培养时间和条件可根据实验需要进行调整。
5. 检测细胞的存活情况在培养一段时间后，可以通过观察细胞的形态和生长情况来评估细胞对Zeocin博来霉素的敏感性。
存活的细胞将继续生长和分裂，而对Zeocin博来霉素敏感的细胞则会受到抑制而停止生长。
6. 筛选稳定转染的细胞在进行外源基因转染实验时，Zeocin博来霉素可以用于筛选稳定转染的细胞。
在转染后的适当时间内添加Zeocin博来霉素，可以选择出真正稳定表达外源基因的细胞。
注意事项Zeocin博来霉素对于不同细胞类型和实验条件的敏感性存在差异，建议根据实际情况进行优化浓度和培养时间的选择。
Zeocin博来霉素具有一定的毒性，需小心使用，避免接触皮肤和吸入气体。
在不同细胞类型中，Zeocin博来霉素的敏感性可能会有所不同，可进行适当的前期实验确定最佳浓度。
Zeocin博来霉素的作用机制是通过抑制细胞内蛋白质合成而导致细胞死亡，使用时应控制浓度，以避免对细胞的过度杀伤。
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法Zeocin（博来霉素）和Blasticidin S（博莱霉素）使用方法一、概述Zeocin和Blasticidin S是常用的抗生素，用于细胞培养和基因转染实验中的选择标记和筛选。
二、Zeocin（博来霉素）使用方法⒈简介Zeocin是一种独特的抗生素，主要通过选择性杀死或抑制非转染的细胞株来筛选基因转染细胞株。
⒉配制按照瓶子上的指示，将Zeocin药物与适当的培养基一起配制。
⒊浓度选择在进行筛选之前，先进行一系列的药物浓度实验，以确定对特定细胞株的最佳浓度。
一般建议从20 μg/ml开始一步步减量，最终确定最佳浓度。
⒋感受性试验在进行筛选之前，可通过感受性试验来确定细胞株对Zeocin的敏感性。
在细胞培养皿上种植一系列浓度的细胞，观察细胞的生长情况并确定最佳浓度。
⒌筛选将转染细胞株接种在含有Zeocin的培养基中，培养一段时间。
观察细胞的生长情况，转染成功的细胞株将能够在Zeocin存在下正常生长，而未转染的细胞则无法生存。
⒍维持选择压为了保持转染细胞株的稳定性，需继续在培养基中添加适量的Zeocin。
三、Blasticidin S（博莱霉素）使用方法⒈简介Blasticidin S是一种抗生素，可抑制蛋白质合成过程。
在基因转染实验中常用于选择标记和筛选。
⒉配制按照瓶子上的指示，将Blasticidin S药物与适当的培养基一起配制。
⒊浓度选择在进行筛选之前，先进行一系列的药物浓度实验，以确定对特定细胞株的最佳浓度。
一般建议从5 μg/ml开始一步步增加，最终确定最佳浓度。
⒋感受性试验在进行筛选之前，可通过感受性试验来确定细胞株对Blasticidin S的敏感性。
在细胞培养皿上种植一系列浓度的细胞，观察细胞的生长情况并确定最佳浓度。
⒌筛选将转染细胞株接种在含有Blasticidin S的培养基中，培养一段时间。
观察细胞的生长情况，转染成功的细胞株将能够在Blasticidin S存在下正常生长，而未转染的细胞则无法生存。
检验科抗生素敏感性常见检测与分析方法
检验科抗生素敏感性常见检测与分析方法抗生素是一类被广泛应用于医疗和兽医领域的药物，用于治疗或预防细菌感染。
然而，随着时间的推移，细菌对抗生素的耐药性也在不断增加，这对于医疗领域而言是一个严重的挑战。
为了合理地选择和使用抗生素药物，检验科发展了一系列常见的抗生素敏感性检测与分析方法。
在本文中，我们将介绍一些常见的方法及其原理。
一、药物敏感性试验（Disk-diffusion test）药物敏感性试验是一种常见的快速筛选方法，用于确定细菌对特定抗生素的敏感性。
试验过程中，细菌培养物被均匀涂布在固体培养基上，并在其表面放置含有抗生素的纸片（或药物片剂）。
若细菌对抗生素不敏感，则在其周围形成抑制圈，通过测量抑制圈的直径大小来评估细菌对抗生素的敏感性水平。
二、最小抑菌浓度试验（Minimum inhibitory concentration test）最小抑菌浓度试验进一步确定了细菌对抗生素的敏感性。
在这种试验中，通过在液体培养基中加入逐渐增加浓度的抗生素，观察细菌的生长情况。
最小抑菌浓度被定义为能够完全抑制细菌生长的最低抗生素浓度。
这个浓度反映了细菌对抗生素的敏感性程度。
三、基因检测（Genetic testing）基因检测是一种高效的方法，通过检测细菌基因组中与抗生素耐药性相关的基因来评估细菌对抗生素的敏感性。
这种方法可以通过PCR技术或基因芯片分析细菌的DNA，快速鉴定特定的抗生素耐药性基因。
基因检测不仅可以确定细菌对抗生素的敏感性，还可以帮助科学家了解抗生素耐药性的发展机制。
四、液相扩散法（Broth dilution method）液相扩散法是一种精确测定最小抑菌浓度的方法。
通过在液体培养基中加入逐渐增加浓度的抗生素，并观察细菌生长情况的变化。
最小抑菌浓度被定义为能够完全抑制细菌生长的最低抗生素浓度。
相对于固体培养基上的抗生素扩散试验，液相扩散法更为准确和方便，也更适合大规模的抗生素敏感性检测。
G418筛选抗生素的使用方法
G418，是一种与庆大霉素相关的氨基糖苷类抗生素，常用作真核细胞的筛选。
作为硫酸新霉素的类似物，G418在真核细胞中干扰80S核糖体的功能以及蛋白质的合成。
显性作用的抗性基因(neor)的表达可筛选包含转座子Tn601(903)或Tn5的哺乳动物表达载体。
当表达抗性的哺乳动物细胞在含有G418的培养基中生长时，约10-14天内产生稳定的菌落。
G418筛选抗生素结构式性质形态：白色粉末融点：138～144℃溶解性：溶于水、甲醇CAS：108321-42-2分子式：C20H40N4O10·2H2SO4分子量：692.71比旋：104-121℃水分：≤10%吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)储运：室温下运输, 干粉在室温下储存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃储存。
优势1、提供纯度＞90%（HPLC）的产品，与其他低浓度G418产品相比，使用量更低，更有利于细胞生长2、效价＞700ug/mg3、严格控制ED50值，保证各批次的一致性使用方法由于各真核细胞系对G418敏感度不同,需通过实验确认各新细胞系或细胞株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量。
最适用量通过建立细胞死亡曲线获得。
将细胞稀释至1000cell/ml，每孔100ul加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天，以最低细胞全部死亡浓度为基准，一般400-800ug/ml左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持时使用筛选浓度的一半即可。
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法
Zeocin博来霉素,博莱霉素使用方法
博来霉素（Zeocin）和博莱霉素（Blasticidin）是两种抗生素，常被用作选择性筛选的工具，特别是在基因编辑或基因表达研究中。
使用方法如下：
1. 浓度确定：，根据研究的需要确定适当的药物浓度，一般可以通过进行预实验来确定。
2. 细胞培养：在含有相应培养基的培养皿中培养您的细胞株。
3. 药物添加：在培养基中加入适当浓度的博来霉素或博莱霉素。
通常，最初的药物浓度为较高浓度，以便快速杀死未受到选择压力
的细胞。
此后，可以逐渐减少药物浓度以筛选出稳定转染或表达目
的基因的细胞。
4. 培养细胞：继续在含有药物的培养基中培养细胞。
注意监测细胞生长情况，确保细胞可以适应药物选择压力，最大限度地保持
细胞生长。
5. 细胞筛选：经过一段时间的培养，选择压力敏感的细胞将会死亡，而药物耐受的细胞将生存下来。
这些生存下来的细胞可以被视为已经成功转染或表达目的基因的细胞。
6. 验证：经过筛选的细胞需要进行进一步的验证，以确保转染或表达成功。
验证的方法可以根据具体实验目的和所关注的基因或蛋白而定。
需要注意的是，具体的使用方法可能因研究目的、细胞类型等因素而有所不同，建议参考所使用的具体实验方案和厂家提供的使用说明。
使用抗生素应遵守相关实验室规范和操作规程。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
LB培养基中抗生素的贮液配置和工作液浓度
①以水为溶剂的抗生素贮存液应用0.22 μm滤器过滤除菌；
②用乙醇溶解的抗生素溶液无须过滤除菌；
③所有抗生素贮液都应放于不透光的容器中保存。
注意：镁离子是四环素的拮抗剂。
对于以四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁离子的培养基，如LB培养基。
下面是常用抗生素的贮液浓度及工作浓度
氨苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
羧苄青霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度20 μg/ml （严紧型质粒）60 μg/ml （松弛型质粒）
氯霉素：贮液浓度34 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度25 μg/ml （严紧型质粒）170 μg/ml （松弛型质粒）
卡那霉素：贮液浓度10 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
链霉素：贮液浓度50 mg/ml 溶于水-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
四环素：贮液浓度 5 mg/ml 溶于乙醇-20℃保存工作浓度10 μg/ml （严紧型质粒）50 μg/ml （松弛型质粒）
质粒类型：。