磁珠法拭子基因DNA提取试剂盒

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磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒

MagBeads Swab DNA Extraction Kit

【目录号】SDE-5010、SDE-5030、SDE-5100

【运输条件】2~25℃；

【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃；蛋白酶K -20℃；其它组分室温；

【试剂盒组成】

【注意事项】

1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害。使用前务必充分混匀；

2. 首次使用试剂盒，请按清洗液2标签提示加入无水乙醇，稀释备用；

3. 蛋白酶K请于-20℃长期保存，避免反复冻融；融化后4℃保存，并尽快使用；

4. 为了达到最佳效果，建议使用新鲜拭子样本，或者4℃存放少于3天的样本，样本反

复冻融将导致核酸得量严重降低；

5. 如需去除RNA请自备RNase A溶液（100mg/mL，分散液：10mM Tris-HCl、1mM

EDTA、pH值8.0）；

6. 请务必仔细阅读本试剂盒操作说明书，并严格按照操作步骤完成操作。

【产品简介】

本试剂盒适用于从口腔拭子、宫颈拭子等样本中提取基因组DNA或病毒DNA。试剂盒采用独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对DNA具有极强的特异性亲和力，而当条件改变时，磁珠可逆的释放DNA，从而达到快速分离纯化DNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取DNA 的纯度。所得基因组DNA产物OD260/280比值在1.7~1.9之间，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、测序、文库构建等下游实验。本试剂盒可在EP管中进行手动操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现高通量操作。

【试剂盒说明】

【自备仪器、耗材和试剂】

仪器自动版

英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇。

手动版

水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、无水乙醇、异丙醇、2.0mL EP管、EP管配套用磁力架。

【仪器自动版操作步骤】

本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。

1． 96孔板上样准备

参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：

2．拭子样本裂解

1）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mL EP管中，加入400μL拭子保存液、20μL蛋白酶K和200μL拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。

注：1）若拭子样本中已经含有保存液，只需补加拭子保存液至400μL即可；2）若需去除RNA，请在上述混合液中加入4μL RNase A溶液。

2）将EP管于58℃温浴15min，期间每隔5min摇晃混匀一次；

3）12000 rpm离心30s，将EP管内所有液体收集到底部，待用。

3．上机提取

将全部裂解上清液转入96孔板第2/8列对应孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，调用“拭子DNA提取实验方法”程序，单击“运行”执行程序。

“拭子DNA提取实验方法”程序各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定：

4．核酸转移

程序运行完毕后，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。

【手动版操作步骤】

1．拭子样本的消化以及裂解

1）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mL EP管中，加入400μL拭子保存液、20μL蛋白酶K和200μL拭子缓冲液，使溶液完全浸润拭子，涡旋震荡。

注：1）若拭子样本中已经含有保存液，只需补加拭子保存液至400μL即可；2）若需去除RNA，请在上述混合液中加入4μL RNase A溶液。

2）将EP管于58℃温浴15min，期间每隔5min摇晃混匀一次，完毕后12000rpm离心30s，将EP管内所有液体收集到底部，待用。。

3）取全部上清液转移至新的2.0mL EP管中。

2．核酸结合

向EP管中加入300μL异丙醇和75μL磁珠悬浮液（磁珠悬浮液提前摇晃均匀），盖好EP管盖，高速涡旋振荡5min。

3．磁性分离

将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如果EP管内盖有磁珠，可保持EP 管在磁力架上，整体上下颠倒2~3次至磁珠被完全吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液枪吸弃上清液，期间避免接触磁珠。

4．清洗1

向EP管中加入600μL清洗液1，将EP管从磁力架上取下，用移液枪吹散磁珠，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤3操作）。

5．清洗2

使用600μL清洗液2（已加入无水乙醇），参照步骤4操作2次。

6．除醇（如下方法任选其一）

方法1：将除尽上清液后的EP管置于磁力架上，一同放入45℃真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。

注：亦可置于通风橱通风或电风扇直吹约10min，具体时间以磁珠干透无乙醇味为准。

方法2：将除尽上清后的EP管保持在磁力架上，加入400μL除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠表面，之后快速弃去除醇液。

注：该步骤操作时间不宜过长，且不可吹散磁珠，否则影响核酸得量。

7．洗脱

取出EP管，加入50~100μL洗脱液，用移液枪吹散磁珠，58℃温浴10min，每隔3min 涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。

8．核酸转移

洗脱完毕后，将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去磁珠。

（1703修订版）

* 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。