浅谈基质效应终版.ppt

来，基质效应也应包括已知的干扰物（如红霉素测定中磷 脂、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基 质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘 度、pH等）的影响。
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基质效应的产生原因
主要针对使用液相色谱-质谱联用技术分析生物样品中的化 合物所产生的基质效应进行讨论。
而在生物样品（以血浆为例）中，引起基质效应的主要是 磷脂、胆固醇等内源性物质。他们随同待测物从色谱柱上 一起被洗脱出来，经离子源气化，进入质谱进行检测分析。 而就在液滴气化、发生库伦爆炸变成小液滴直至产生气体 离子的过程中，这些内源性的物质由于极性较大，会同待 测物离子竞相竞争液滴表面，从而导致待测物的离子化效 率降低或增强，引起响应降低或增高，这就产生所谓的基 质抑制或基质增强效应。
监控法
由于基质效应是无法监测的，所以消除困难。如果能够用 一种物质代表基质效应，那么我们就能够直观的看到基质 的具体保留行为，从而分离基质与待测物，消除基质效应。
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监控法
Systematic and comprehensive strategy for reducing matrix effects in LC/MS/MS analyses
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标准曲线法
待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率
Standard line slopes as a measure of a relative matrix effecting quantitative HPLC–MS bioanalysis
The results of these studies indicated that the variability of standard line slopes in different lots of a bio fluid [precision of standard line slopes expressed as coefficient of variation, CV (%)] may serve as a good indicator of a relative matrix effect and, it is suggested, this precision value should not exceed 3– 4% for the method to be considered reliable and free from the relative matrix effect liability.
相 稀释 3、正常配制的生物样品
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标准曲线法
评价方法：
通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组 分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质 效应对定量的影响。
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标准曲线法
绝对响应值比较 第1组测定结果可评价色谱系统和检测器的性能以及整个系
统的重现性。 第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值
的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。 第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增
加，表明存在基质效应和提取回收率因血浆来源不同而不 同的共同影响。
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标准曲线法
绝对响应值比较 如果将第1组、第2组和第3组测得的相应的响应值分别用A、
B、C表示，可按下列公式分别计算基质效应(ME)，提取回 收率(RE)和方法效率(PE)： ME(％ )=B／A×100………… (1) RE(％)=C／B×100 …………(2) PE(％)=C／A×100=(ME×RE)／100………… (3) 公式(1)计算得到的ME为绝对基质效应。相对基质效应通过 对不同来源样品间的B值进行比较获得。当ME值等于或接近 100时，表明不存在基质效应的影响；当ME值大于100时， 表明存在离子增强作用；当ME值小于100时，表明存在离子 抑制作用。
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柱后灌注法
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柱后灌注法
样品配制：分别用液液萃取（正己烷-异丙醇）、固相萃取、 沉淀蛋白（乙腈沉淀和高氯酸沉淀）
1、正常配制空白样品 2、用水代替血浆配制样品 3、流动相
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液液萃取
固相萃取 ESI
乙腈沉淀
高氯酸沉淀
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液液萃取
固相萃取 APCI
乙腈沉淀
高氯酸沉淀
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浅谈基质效应
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浅谈基质效应
基质效应产生的原因和影响 基质效应的确认方法 基质效应的消除
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基质效应的产生原因
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基质效应的产生原因
所谓基质，指标本中除分析物以外的一切组成。以测定血 中红霉素的浓度为例，除了红霉素之外的蛋白、磷脂及其 他内源性物质皆为基质。 基质效应，按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）文 件的定义为 ① 标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响； ② 基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。广义说
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基质效应的产生原因
根本原因是什么？ 基质效应会产生哪些不好的影响
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基质效应的确认方法
标准曲线法 柱后灌注法 监控法
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标准曲线法
样品配制方法：配制三种不同的标准曲线（每条标准曲线7 个点，每一种配制方法五样本）
1、药物+内标：用流动相稀释到一定浓度 2、药物+内标：用含有5种不同来源的空白生物样品的流动
Erin Chambers ∗, Diane M. Wagrowski-Diehl, Ziling Lu, Jeffrey R. Mazzeo
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监控法
In our studies, we evaluate several sample preparation methods, including protein precipitation (PPT), liquid–liquid extraction (LLE), silica-based solid-phase extraction (SPE) and polymeric SPE. Because endogenou phospholipids have been identified as a major source of matrix effects by multiple researchers, we monitor the levels of the various phospholipids in the samples to compare relative cleanliness of final plasma extracts.
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标准曲线法
另外，有学者建议使用低、中、高三浓度的质量控制样品 （QC）来评价基质效应的大小；有人建议使用定量下限 （LLOQ）水平的6个个体的基质来评价。
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柱后灌注法 (Post-column infusion method)
将空白生物样品的提取液和空白溶剂分别进样进行液质分 析，同时利用注射泵将含相同浓度待测物的标准溶液通过 色谱柱与质谱接口之间的三通注入到色谱柱流出液中。如 果同空白溶剂的萃取离子图谱相比，空白提取液的萃取离 子图谱的响应信号明显减弱或增强，则表明存在基质效应 的影响。