血凝仪检测原理及应用

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凝子因子参与的凝血途径
内源性凝血途径：Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ 外源性凝血途径：Ⅲ，Ⅶ 共同凝血途径：Ⅰ，Ⅱ，Ⅴ，Ⅹ，ⅩⅢ

7
8
传统的凝血途径的修改
外源性的Ⅶ因子在组织因子的结合下既可激活Ⅹ因
子，又可激活内源性的第Ⅸ因子，从而打破了内源 与外源的界限。 Ⅻ因子缺乏时并不引起出血，这说明第Ⅺ因子并不 一定只被Ⅻ因子激活，现已证明Ⅺ本身具有自身激 活作用。 凝血酶（Ⅱ因子）也可激活Ⅺ因子，原来认为只有 Ⅻ因子才能激活Ⅺ因子。 TF被激活并与Ⅶ因子结合后会被一种组织因子途 径抑制物（TFPI）所抑制；后者已成为一种新型 抗凝剂。
in Blood血液中 XIII XII in Plasma血浆中 XIII XII
Blood Sampling Trisodium Citrate
PT Reagent Tissue Factor Phospholipid 2+ Calcium（Ca ）
Extrinsic System 外在系统
III
凝血仪的检测原理 及应用
1
（一） 凝血常规（常规凝血功能筛选组合）
1. 凝血常规1（6项）： PT、APTT、TT、Fib-C、D-二聚体、AT-Ⅲ 适合于：干部病房、ICU病房、呼吸内科、消化内科、 血液内科、产科、肿瘤科、心内科、肾内科和术后出血患 者等，以及其它科室60岁以上高危人群。 2. 凝血常规2（4项）： PT、APTT、TT、Fib-C 适合于：一般手术患者。
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Hct异常时抗凝剂和抽血量
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高Hct的影响
病例：真性红细胞增多症患者，Hct 0.562 （1）1：9比例抗凝结果（错误）： PT 19.2s，PT-INR 1.78，APTT 62.1s， Fib-C 1.67g/L，TT 22.9s，与临床不符。 （2） 0.2 0.00185×（100-56.2） 计算后应抽血2.5ml，结果（正确）为： PT 13.9s，PT-INR 1.30，APTT36.2s， Fib-C 1.70g/L，TT 19.7s，与临床相符。
2
（二） DIC筛选试验组合： PT、APTT、TT、Fib-C、D-二聚体、FDP、 AT-Ⅲ （三）血友病组合： PT、APTT、TT、Ⅷ:C、Ⅸ:C、Ⅷ抑制物检查 （四） 凝血因子全套检查： PT、APTT、TT、Fib-C、Ⅱ:C、Ⅶ:C、Ⅷ：C、 Ⅸ:C、Ⅹ:C、Ⅺ：C
3
（五）药物性出血的监测
2
1秒时的INR
(16.6/11)2 =2.28
INR误差范围
1.91 ~ 2.09
1.76 ~ 2.28
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MNPT的确定方法
标本：多份混合血浆（20份以上）
年龄：18-55岁 性别：男、女（非妊娠、非经期）各半 药物的影响：
激素、抗生素、口服避 孕药、降压药、维生素 采血前的要求：勿剧烈运动空腹或只服 少量无脂类食物
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2 .缩短
（1）血栓前状态和血栓性疾病； （2）见于先天性V因子增多； （3）长期口服避孕药； （4）使用重组的Ⅶ因子治疗时； （5）标本放置在2～8℃， Ⅶ因子冷激活发生，使PT缩短。 3.口服抗凝剂的检测 PT和PT-INR是监测口服抗凝剂的常用指标，中国人PT-
INR在1.5-2.5用药较为安全和有效。
Blood Sampling Trisodium Citrate
IIa
Thrombin
XI X
IX VIII
XI X
IX VIII I IIa
37℃
Fibrin
VII
V IV
without
VII
V
without
without
IV III II I
Measure Clotting Time Normal Range 200-400 mg/dL
PL
XI
X IX VIII
XI X IX VIII VII V
Ca , PL
2+ 2+
IV
VII
Ca , PL
III X V II
37℃
Measure Clotting Time
VII
V IV
without without without
IV III II I I
III II I
Fibrin
Normal Range 9-14 sec
(统称)FDP
FDP:Fibrinogen Degradation Products FSP:Fibrin Split Products
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六、纤维蛋白原测定（Fib-C）
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源自文库 检 测 原 理（Clauss法 ）
in Blood in Plasma
Fbg Reagent
XIII
XII
XIII
XII
APTT Reagent Intrinsic System
Activator
Ellagic acid Phospholipid
PL
CaCl2 XII XI IX
Ca , PL
2+
IV
Calcium（Ca2+） Measure Clotting Time
37℃
VIII X
Ca , PL
2+
V II Normal Range 20-40 sec Fibrin
（2）肝素用于治疗的安全有效范围是APTT 为同时检测的正常对照值的1.5-2.5倍。
31
APTT测定常见的问题
1. 分析前因素 2. APTT试剂（激活剂）
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五、凝血酶时间测定（TT）
33
34
35
临床应用
1 延长
（1）见于FIB水平或功能减低，如低FIB血 症或异常FIB血症； （2）应用肝素或肝素类物质存在（如SLE、 肝病和肾病等）； （3）见于FDP增多。
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1 .延长
临床应用
（1）见于内源性凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）缺乏， 如血友病 A、血友病B及Ⅺ 因子缺乏症； （2）严重的凝血酶原、Ⅴ、Ⅹ和FIB缺乏，如肝脏疾病、阻 塞性黄疸、新生儿出血症、肠道灭菌综合征、吸收不良综 合征、口服抗凝剂、应用肝素及FIB缺乏血症； （3）纤溶活性增强，如继发性、原发性纤溶亢进及循环血 液中有纤维蛋白（原）降解产物（FDP）； （4）血液中有抗凝物质，如抗因子Ⅷ或Ⅸ抗体，狼疮抗凝 物质等。
III II I
Calculated for Fibrinogen concentration
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检 测 原 理（PT演算法）
OD
250mg/dl
OD3
OD
FIB
OD3
125mg/dl
OD2
62mg/dl
FIB
OD1
FIB
时间
OD2 OD1
OD x [FIB]
0
62
125
250
Mg/dl[FIB]
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III II I
I
APTT检测的原理

37℃条件下，以白陶土（激活剂）激活因子Ⅺ和 Ⅻ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供 凝血的催化表面，在Ca2+的参与下，观察贫血小 板血浆凝固所需的时间即为活化部分凝血活酶时 间。CA1500仪器法判断重点采用光学法，即当纤 维蛋白原转变为纤维蛋白时，经光照后产生的散 射光发生变化，仪器判读终点。
③TT试剂保存时间较短，不宜重复使用。
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PT、APTT、TT 联合分析一
39
PT、APTT、TT 联合分析二
OAT
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PT、APTT、TT 联合分析三
凝血因子FVIII或IX或XI或XII缺陷
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纤溶过程（纤溶系统）
FIB （纤维蛋白原）
纤维蛋白 (血栓）
激活剂 抑制物
纤溶酶
纤溶酶原
抑制物 (抗纤溶酶) FDPs FSPs (包括D-D)
PT测定完后纤蛋白原会转变成纤维蛋白，其形成的浊度与纤维 蛋白质的含量成正比，因此不需要任何试剂，即可由产生的浊度 直接推算出纤维蛋白原的含量。 PT演算法的原理
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（二） 离心问题
1. 血栓试验使用的血浆为PPP； 2. 一般要求2000～2500g/min（3000r/min ），离 心时间为10min左右，转速N（转/分）与“g”的 转换关系：g=11.18×10-7×半径（mm）×N（转/ 分）；
3. 离心温度室温即可，但不可超过25℃，4℃离心 条件应该提倡。
1. 口服华法林治疗监测组合：PT 2. 普通肝素治疗监测组合： TT、APTT、AT-Ⅲ 3. 溶栓药物治疗（SK、UK、t-PA）监测组合： PT、APTT、D-二聚体、TT、Fib-C、FDP
4
止血血栓
正常 出血 血栓形成
5
三个阶段，两个途径
（内源性、外源性）

第一阶段：凝血酶原激活物形成 第二阶段：凝血酶形成 第三阶段：纤维蛋白形成
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2 缩短
见于高凝状态 3 作为溶栓药物，如链激酶（SK），尿激酶 （UK）和组织性纤溶酶原激活剂（t-PA） 等溶栓治疗的监测指标。 TT在正常对照值 的1.5—2.5倍 ，治疗安全有效。
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TT测定常见的问题
1.分析前因素 2.TT试剂 ①凝血酶试剂 :来源于牛；
②对肝素和FDP高度敏感；
1. 延长 （1）见于先天性外源凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、 Ⅹ）缺乏症和低/无FIB血症，凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、 Ⅹ轻微减少，PT的延长幅度也不大，Ⅱ因子减少病人，其 PT经常在正常范围； （2）口服抗凝药，如华法令等； （3）维生素K缺乏症； （4）DIC及原发性纤溶症； （5）肝脏疾病； （6）血中有抗凝物质（狼疮抗凝物、抗磷脂抗体、肝素、 FDP以及抗Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、 Ⅹ 的抗体）。
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四、 活化部分凝血活酶時間 （APTT）
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APTT检 测 原 理
in Blood XIII XII XI X IX VIII VII V IV
without without without Trisodium Citrate Blood Sampling
in Plasma XIII XII XI X IX VIII VII V IV III II I
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（三） 即时试验标本的要求
1. 标本尽可能在4小时内完成；
2. 筛查试验和一些因子测定时，应避免将标本长时 间室温放置； 3. Ⅶ因子测定时，标本要避免冷藏。
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（四）分离后血浆标本的处理
1. 建议将标本保存在-70℃以下条件，凝血因子至 少可稳定6个月； 2. 短期保存可在-35℃条件，-20℃条件通常是不理 想的； 3. 冷冻血浆解冻应放置37℃水浴条件，并轻轻摇动 4～5分钟，分析前轻柔地颠倒混匀。室温放置自 然解冻是不可取的，因室温放置会有冷沉淀形成， Ⅷ:C和vWF会减少，并有纤维蛋白原析出。冷冻过 的血浆不能再次冷冻。
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PT检测的原理

在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和 钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使 纤维蛋白原与转变为纤维蛋白。观察血浆 凝固所需的时间即为凝血酶原时间。 CA1500仪器法判断终点采用光学法，即当 纤维蛋白原转变为纤维蛋白时，经光照后 产生的散射光发生变化，仪器判读终点。
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（二）临 床 应 用
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2.缩短
（1）高凝状态，如DIC的高凝期、促凝物质 进入血液以及凝血因子的活性增高等； （2）血栓性疾病，如心肌梗死、不稳定性心 绞痛、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、 肺梗死、深静脉血栓形成妊以及高症、肾 病综合征和严重的灼伤等。
30
3.肝素治疗的监测
（1）肝素用于预防血栓形成时，APTT为同 时检测的正常对照值的1.5倍；
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低ISI试剂的优势
ISI=1.0试剂 ISI=2.0试剂
MNPT PT PT-INR
当系统误差是
11 sec 22 sec
(22/11) =2.0
1 (21/11) = 1.91 1 (23/11) = 2.09 1
11 sec 15.6 sec
(15.6/11) =2.0 (14.6/11)2 =1.76
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凝血途径示意图
内源凝血途径 XII 检查 APTT XI IX
组织因子途径
VII + TF 组织因子
TFPI 外源凝血途径 检查 PT
VIII
X V II 凝血酶原
Xa
IIa（凝血酶） 共同途径途径 检查 TT I (FIB)
Ia (凝块)
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三、凝血酶原时间测定（PT）
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（一）检 测 原 理
9
二、凝血检验标本收集和预处理
10
（一）标 本 采 集
1. 抽血注意事项
（1）抽血管首选优质塑料管； （2）定量抽血完毕，立即将标本轻柔颠倒混匀5次， 避免剧烈摇动； （3）许多专家建议抽血的第一管血不用作血栓试验， 尽量选第二管。
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2. 抗凝剂问题
（1）世界卫生组织/美国临床和实验室标准协会 （WHO/CLSI）都推荐使用0.109mol/L枸橼酸钠（3.2% Na3C6H5O7﹒2H2O）作为凝血检验的抗凝剂； （2）一般选用1份抗凝剂+9份静脉血—当Hct 25%～55%时； （3）若Hct ＜25%或＞55%时，抗凝剂的用量=0.00185× 全血量×[1- Hct] ×100；