杜平华讲义2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容
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杜平华2010年版药典 附录无菌检查和微生 物限度检查方法增修 定内容
眼镜小生制作
起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、 环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着 力解决发展中的问题。
二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自 主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国 药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国 际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进 医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会 作出贡献。
⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经 验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。
⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活 性剂除证明其有效性外还应证明对污染的 微生物无影响修改为无毒性。
五、方法验证试验增修订内容
⒈试验菌株 删除铜绿假单胞菌增加大肠 埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄 色葡萄球菌)。
⒉薄膜过滤法 供试品用量 将规定量供 试品 按薄膜过滤法过滤 修改为取每种培
⑶新增贴剂供试液制备
供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷 脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。
⑷具抑菌活性的供试品增修订内容
删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品 具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的 方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供 试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过 滤法。
表1 、表2 、表3增修订
表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量
修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每 支供试品接入每管培养基的最少样品量
第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改 为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个 容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检
①离心沉淀集菌法
两次离心修改为一次离心； 500转/分离心，不 超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。
细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容
⒈新增 计数培养基的适用性检查 ⑴菌种
大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（
⑵装有药物的注射器供试品
取规定量，删去装上无菌针头….修改为排出 注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可 吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水 溶性制剂供试品项下方法操作。
⑶无菌气雾剂供试品
供试液的制备将供试品置冰室修改为置至少 -Leabharlann Baidu0℃的冷冻室约1小时。
⒋ 直接接种法删除β－内酰胺类或磺 氨类供试品。
3、检验量增修订内容
⑴中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 ⑵沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并 注明（其中10 g用于阳性对照）。
4、供试液的制备增修订内容
⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 ⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。
培养基适用性检查增修订内容
3、培养基灵敏度试验 ⑴删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制
备 “（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能 过滤菌丝的无菌毛细吸管）” 修改为“用
适宜的方法吸出孢子悬液”。 ⑵增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加 入0.05％v/v）聚山梨酯80。
四、试验稀释液、冲洗液增修订为
验数量加倍。
表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验 量
修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ①
注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每 个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最 少检验数量加倍。
养基规定接种的供试品总量。
六、供试品的无菌检查增修订内容
⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种 的供试品量按表2、表3规定删除采用直接接 种法时的规定。
⒉阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有 效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。
⒊薄膜过滤法 ①增加了抗生素供试品滤膜选择的指导 应选 择低吸附的滤器及滤膜。 ②若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为 100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不 得超过1000ml 。 ⑴水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用 的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.
2010年版无菌检查法增修订内容
一、进一步确定了无菌检查法的定义：
无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具 、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
二、进一步明确了无菌检查保障
1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。
2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进 行环境检测。
2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过 无菌技术的培训。
三、培养基增修订内容
⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基 的使用范围(用于培养好氧菌、厌氧菌及用于 培养真菌)
⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨 基苯甲酸、聚山梨酯-80等。 理由 经验证试验选择适宜的中和剂、灭活剂 和表面活性剂
微生物限度检查增修定内容
修改内容
1、培养条件 控制菌培养温度35℃～37℃修 改为30℃～35℃(细菌、控制菌培养温度相 同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高
温菌在该温度下也可以生长。
增修订内容
2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。
杜平华2010年版药典 附录无菌检查和微生 物限度检查方法增修 定内容
眼镜小生制作
起草的指导思想
一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、 环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着 力解决发展中的问题。
二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自 主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国 药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国 际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进 医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会 作出贡献。
⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经 验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。
⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活 性剂除证明其有效性外还应证明对污染的 微生物无影响修改为无毒性。
五、方法验证试验增修订内容
⒈试验菌株 删除铜绿假单胞菌增加大肠 埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄 色葡萄球菌)。
⒉薄膜过滤法 供试品用量 将规定量供 试品 按薄膜过滤法过滤 修改为取每种培
⑶新增贴剂供试液制备
供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷 脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。
⑷具抑菌活性的供试品增修订内容
删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品 具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的 方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供 试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过 滤法。
表1 、表2 、表3增修订
表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量
修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每 支供试品接入每管培养基的最少样品量
第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改 为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个 容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检
①离心沉淀集菌法
两次离心修改为一次离心； 500转/分离心，不 超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。
细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容
⒈新增 计数培养基的适用性检查 ⑴菌种
大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（
⑵装有药物的注射器供试品
取规定量，删去装上无菌针头….修改为排出 注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可 吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水 溶性制剂供试品项下方法操作。
⑶无菌气雾剂供试品
供试液的制备将供试品置冰室修改为置至少 -Leabharlann Baidu0℃的冷冻室约1小时。
⒋ 直接接种法删除β－内酰胺类或磺 氨类供试品。
3、检验量增修订内容
⑴中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 ⑵沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并 注明（其中10 g用于阳性对照）。
4、供试液的制备增修订内容
⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 ⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。
培养基适用性检查增修订内容
3、培养基灵敏度试验 ⑴删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制
备 “（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能 过滤菌丝的无菌毛细吸管）” 修改为“用
适宜的方法吸出孢子悬液”。 ⑵增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加 入0.05％v/v）聚山梨酯80。
四、试验稀释液、冲洗液增修订为
验数量加倍。
表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验 量
修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验 数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为 供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ①
注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每 个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最 少检验数量加倍。
养基规定接种的供试品总量。
六、供试品的无菌检查增修订内容
⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种 的供试品量按表2、表3规定删除采用直接接 种法时的规定。
⒉阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有 效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。
⒊薄膜过滤法 ①增加了抗生素供试品滤膜选择的指导 应选 择低吸附的滤器及滤膜。 ②若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为 100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不 得超过1000ml 。 ⑴水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用 的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.
2010年版无菌检查法增修订内容
一、进一步确定了无菌检查法的定义：
无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具 、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
二、进一步明确了无菌检查保障
1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。
2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进 行环境检测。
2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过 无菌技术的培训。
三、培养基增修订内容
⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基 的使用范围(用于培养好氧菌、厌氧菌及用于 培养真菌)
⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨 基苯甲酸、聚山梨酯-80等。 理由 经验证试验选择适宜的中和剂、灭活剂 和表面活性剂
微生物限度检查增修定内容
修改内容
1、培养条件 控制菌培养温度35℃～37℃修 改为30℃～35℃(细菌、控制菌培养温度相 同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高
温菌在该温度下也可以生长。
增修订内容
2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。