hiv抗体检测技术 ppt课件
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2 免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线 状 固定在膜上，加待检样品后，阳性结果在膜上抗 原部位显示出 有色条带。有效试验的质控带必须显 色。
3 明胶颗粒凝集试验（PA）：将HIV抗原致敏明胶 颗粒 作为载体，加待检样品后。当待检样品含有 HIV抗体时，明胶颗 粒与抗体发生凝集反应，根据 凝集情况判读结果。
(1)酶联免疫吸附试验（ELISA）
可使用血液、唾液、尿液样品
单纯HIV抗体检测试剂
HIV抗原抗体联合检测试剂：同时检测血液中
HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品
和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪
测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。
HIV抗体检测目的
– 诊断：确定个体HIV感染状况而进行的检测， – 包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、
根据特殊需要进行的体检等。 – 监测：了解不同人群HIV感染率及其变化趋势 – 而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群 – 和一般人群。 – 血液筛查：防止输血传播HIV而进行的检测， – 包括献血员筛查和原料血浆筛查。
快速诊断试剂
（1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样
品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待 检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗 粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒 在孔中的凝集情况判读结果。
PA法原理
PA法操作步骤
PA法
快速诊断试剂
（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）
须包括一种抗原抗体联合试剂。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样 品，确证实验室可以直接进行确证试验。
HIV抗体筛查试验
筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CLIA）： 采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪 测定结果。 快速检测（RT）及其它检测试验
(1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 (3)免疫层析试验
间接法检测抗体
酶标二抗
E
E
标本（含抗体）
固相抗原
E
Βιβλιοθήκη Baidu
底物
双抗原夹心法检测抗体
固相抗原
标本（含抗体）
E
底物
E
酶标抗原
E
ELISA法结果判断
临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的OD值 代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值
判断标准:标本OD值与临界值的比值大于等于 1(S/CO≥1)为阳性（对间接法及双抗原夹心法）
HIV抗体检测技术
HIV生活周期
吸附－穿入－脱壳－生物合成－组装成熟和释放
HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合
HIV感染后的血清学改变
艾滋病诊断的特殊性
高度依赖实验室诊断 HIV检测的严肃性：
保证输血、器官移植的安全 错误结果将导致严重的法律问题 结果严格保密
采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也 可联合检测抗原抗体。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检 样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加 发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结 果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合 试剂盒规定。
（3）快速检测（RT）及其它检测试验
优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊
以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血 清样品。
斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶
体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间
在10 min以内，使用抗原量少。
金标诊断试验原理
急
诊检测。不需专门设备,
人员培训简单,一般可在10～30分钟内得出结
果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易
保存。
HIV快速检测试剂按原理不同，分为以下三类：
1 免疫渗滤试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点 状 固定在膜上。加待检样品后，阳性结果在膜上抗 原部位显示出 有色斑点。有效试验质控点必须显色。
HIV抗体检测
行业标准:
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》WS298-2008
技术规范:
《全国艾滋病检测技术规范》（ 2009年修订版）
HIV抗体检测程序
筛查试验
– 初筛 – 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局 注册批准、在有效期内的试剂，其中 酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用 临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 HIV抗体筛查样品 血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。
初筛试验 对呈阴性反应的样品，可出具 HIV抗体阴性（-）报告； 对呈阳性反应的样品，需要进一步 做复检试验和确证试验。
复检试验
对初筛呈阳性反应的样品，应使用 原有试剂和另外一种不同原理（或厂家） 的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家 的试剂进行复检试验。 如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必
注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同 cutoff=NC+0.1 cutoff=NC*2.1
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代 病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
第二代 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2
IgG抗体
IgG 抗体 HIV-1 / -2
间接
病毒裂解液
第三代 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O
夹心
第四代
病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、
判断结果标准客观、
结果便于记录和保存
用途：流行病学监测及临床大量标本的检测
(2)化学发光或免疫荧光试验
3 明胶颗粒凝集试验（PA）：将HIV抗原致敏明胶 颗粒 作为载体，加待检样品后。当待检样品含有 HIV抗体时，明胶颗 粒与抗体发生凝集反应，根据 凝集情况判读结果。
(1)酶联免疫吸附试验（ELISA）
可使用血液、唾液、尿液样品
单纯HIV抗体检测试剂
HIV抗原抗体联合检测试剂：同时检测血液中
HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品
和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪
测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。
HIV抗体检测目的
– 诊断：确定个体HIV感染状况而进行的检测， – 包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、
根据特殊需要进行的体检等。 – 监测：了解不同人群HIV感染率及其变化趋势 – 而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群 – 和一般人群。 – 血液筛查：防止输血传播HIV而进行的检测， – 包括献血员筛查和原料血浆筛查。
快速诊断试剂
（1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样
品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待 检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗 粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒 在孔中的凝集情况判读结果。
PA法原理
PA法操作步骤
PA法
快速诊断试剂
（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）
须包括一种抗原抗体联合试剂。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样 品，确证实验室可以直接进行确证试验。
HIV抗体筛查试验
筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CLIA）： 采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪 测定结果。 快速检测（RT）及其它检测试验
(1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 (3)免疫层析试验
间接法检测抗体
酶标二抗
E
E
标本（含抗体）
固相抗原
E
Βιβλιοθήκη Baidu
底物
双抗原夹心法检测抗体
固相抗原
标本（含抗体）
E
底物
E
酶标抗原
E
ELISA法结果判断
临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的OD值 代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值
判断标准:标本OD值与临界值的比值大于等于 1(S/CO≥1)为阳性（对间接法及双抗原夹心法）
HIV抗体检测技术
HIV生活周期
吸附－穿入－脱壳－生物合成－组装成熟和释放
HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合
HIV感染后的血清学改变
艾滋病诊断的特殊性
高度依赖实验室诊断 HIV检测的严肃性：
保证输血、器官移植的安全 错误结果将导致严重的法律问题 结果严格保密
采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也 可联合检测抗原抗体。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检 样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加 发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结 果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合 试剂盒规定。
（3）快速检测（RT）及其它检测试验
优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊
以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血 清样品。
斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶
体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间
在10 min以内，使用抗原量少。
金标诊断试验原理
急
诊检测。不需专门设备,
人员培训简单,一般可在10～30分钟内得出结
果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易
保存。
HIV快速检测试剂按原理不同，分为以下三类：
1 免疫渗滤试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点 状 固定在膜上。加待检样品后，阳性结果在膜上抗 原部位显示出 有色斑点。有效试验质控点必须显色。
HIV抗体检测
行业标准:
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》WS298-2008
技术规范:
《全国艾滋病检测技术规范》（ 2009年修订版）
HIV抗体检测程序
筛查试验
– 初筛 – 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局 注册批准、在有效期内的试剂，其中 酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用 临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 HIV抗体筛查样品 血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。
初筛试验 对呈阴性反应的样品，可出具 HIV抗体阴性（-）报告； 对呈阳性反应的样品，需要进一步 做复检试验和确证试验。
复检试验
对初筛呈阳性反应的样品，应使用 原有试剂和另外一种不同原理（或厂家） 的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家 的试剂进行复检试验。 如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必
注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同 cutoff=NC+0.1 cutoff=NC*2.1
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代 病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
第二代 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2
IgG抗体
IgG 抗体 HIV-1 / -2
间接
病毒裂解液
第三代 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O
夹心
第四代
病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、
判断结果标准客观、
结果便于记录和保存
用途：流行病学监测及临床大量标本的检测
(2)化学发光或免疫荧光试验