电喷雾质谱图文共24页

（nano）HPLC联用质谱仪测定多肽
• HPLC用反相模式
– C8、C12、C18（ODS） – 0.1%TFA、0.1%FA、0.5%Hac
• 蛋白质组学大量使用胰酶trypsin
– N-term、K、R –分子量400-6000
• 时间串联
–离子阱
串级质谱
• 空间串联
–三重四极杆
ORBITRAP
• 2019年 纳升级电喷雾（nanoESI）
– Mann
喷雾 • 参数：电压、溶液组成、相对位置
谱图
质荷比mass-to-charge ratio
• Myoglobin
– 多电荷使得样品谱图复杂
原理
• 电喷雾的原理有两种主 流解释
– 库仑爆炸 – 离子蒸发
• 核心是去溶剂
nanoESI
• 流速
42 42 42 42
42 42 42 42 42 42
More to go，but not today
• 质谱仪可以定量地测定蛋白质 • 质谱仪的硬件构成 • 质谱仪的软件操作、方法的建立 • （nano）UHPLC、CE联用质谱仪 • 谱图解析、蛋白质定量自动化软件
新西兰爱恩思奶粉 iamnzchina/ 鲍丽华涹
–小于500nl/min
• 使用拉尖的石英或不锈钢毛细管
–末端小于30mm
• 电压
–小于2500V
• 没有辅助气或者极低的辅助气 • 常与nanoHPLC或者毛细管电泳（CE）联用
nanoHPLC
• 电喷雾产生的质谱信号强度与被测物质的 浓度相关
（nano）HPLC与质谱仪联用
使用电喷雾的ORBITRAP质谱仪
• ORBITRAP质谱仪能精确地测定质荷比 • CID、PQD、ETD、HCD都能够将多肽碎裂成
碎片离子
• 速度与精度的平衡
CID, PQD & ETD
LTQ detector
HCD ORBITRAP detector
ORBITRAP检测器
• 精确测定质荷比
– ppm级
LTQ检测器
• 较精确地测定质荷比 • 擅长多肽的碎裂
标准蛋白质组学流程
• 电喷雾是一种离子化方法，可以用作质谱仪的离 子源
• 质谱仪擅长测定生物大分子
–分子量 –多肽序列 –翻译后修饰
历史
• 1914年 第一次详细地描述
– Zeleny
• 1964-1969年 深入地研究
– Taylor – Dole
• 1989年 用于生物大分子
– 2019年诺贝尔化学奖（1/4）Fenn
• 从本质上来说是时间串联
–将生成第一张谱图的任务交给ORBITRAP检测器
多肽的碎裂 • a/x、b/y、c/z
某四肽的碎裂多肽碎裂的源自图 • 这是一张用LTQ检测器采集的CID碎裂谱图
谱图的解析 • 结合第一张谱图，主要信号峰都得到归属
翻译后修饰
• 第一张谱图
– DMass
• 第二张谱图