细菌室显微镜检查法操作规程

细菌室显微镜检查法操作规程

显微镜检查是细菌鉴定工作中的一重要手段，有助于细菌的初步鉴别，同时对下一步鉴定工作起着重要的指导作用。有时通过形态学检查可得到初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。显微镜检查有不染色标本检查法和染色标本检查法两种。

1、不染色标本的检查：不染色标本主要用于检查细菌的动力及运动状况。

1.1、压滴法：用接种环取细菌悬液2环，置于清洁载玻片中央，覆上盖玻片，于高倍镜下观察。制片时菌液要适量，不可有气泡，不可外溢。

1.2、悬滴法：取洁净的凹窝载玻片及盖玻片各1块，将凹孔四周的平面上涂上一层凡士林，取一环菌液置盖玻片中央，将凹窝载玻片的凹面向下，对准于盖玻片的液滴上，然后迅速翻转玻片，用小镊子轻压盖玻片使之与凹孔边缘粘紧。镜下观察时先低倍后高倍，不可压碎盖玻片。有动力的细菌可见细菌从一处移到另一处，无动力的细菌呈布朗运动而无位置的改变。螺旋体由于菌体纤细、透明，需用暗视野显微镜观察其形态、活动。

2、染色标本检查法：通过对标本的制片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性以及荚膜、芽胞、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步鉴定。

2.1、快速革兰染色法

2.1.1、操作见试剂说明书

2.1.2、结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

2.1.3、注意事项：染色关健在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度，菌龄为18～24小时为佳。

2.2、抗酸染色法

2.2.1、操作见试剂说明书

2.2.2、结果：抗酸杆菌呈红色。

2.2.3、注意事项：每一张玻片只能涂一份标本且不能在染色缸中染色，以免造成不同标本间的交互污染从而导致阴阳性结果混淆，至无红色液体流下。

3、墨汁负染镜检：背景着色而菌体不着色的染色法，用以观察新型隐球菌的宽厚荚膜等。

细菌室菌室标本操作流程

1、标本的接受

1.1、标本接受的时间：原则上全天任何时间均可。

1.2、标本的接受：接受标本者要认真核对标本的数量、标本与检验单要求是否相符以及标本的质量等。

1.3、把接受的标本编号。

2、临床标本的接种

2.1、检验目的是细菌培养+药敏试验。各临床标本的培养基选择如下：

2.1.1 培养基的选择

标本类型培养基

血

中段尿

脑脊液

穿刺液

胆汁

呼吸道标本粪便标本病灶分泌物血培养瓶

血平板、麦康凯平板血平板、巧克力平板血平板、麦康凯平板血平板、麦康凯平板血平板、麦康凯平板SS平板

血平板、麦康凯平板

2.1.2、生殖器标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板，操作如下：淋球菌培养接种淋球菌平板；念珠菌培养接种沙保罗培养基；支原体培养则按《支原体培养的操作规程》操作；作普通细菌培养，则接种血平板和巧克力平板；衣原体抗原检测的按《衣原体抗原检测的操作规程》进行检验。

2.2、接种的方法：标本做分区划线。

2.3、检验目的为找抗酸杆菌的按《找抗酸杆菌的操作规程》进行检验。

3、所接种的平板必须写上标本的编号和接种的日期，然后根据要求进行培养。

4、标本的培养条件、温度、时间

平板培养条件、温度、时间

血平板

巧克力平板淋球菌平板沙保罗平板其他的平板孵箱、35—37℃、18—24小时

孵箱、35—37℃、18—24小时

孵箱、35—37℃、18—24小时

孵箱、28—31℃、24—36小时

孵箱、35—37℃、18—24小时

5、根据生长在平板上的细菌菌落形态、菌落涂片、染色、镜检等来综合判断细菌形态和染色性质，按各属鉴定的作业指导书进行各菌属的常规鉴定及药敏试

验。

6、结果的报告

确认细菌鉴定及药敏试验结果后，进行检验验单结果报告的存盘、打印。

7、对各类细菌培养标本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求进行无害化处理。