药物分析 第09章生物碱类药物的分析

（三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫
酸、硒硫酸、甲醛硫酸等
（四）UV
（五）IR
（六）色谱法
1. HPLC
2. TLC
硅胶为吸附剂：游离生物碱能顺利迁移，生物碱盐类吸附 太牢，造成严重拖尾。 解决方法：
（1）在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂
烃胺类； Baidu Nhomakorabea2）硅胶板用碱处理
97：83．咖啡因和茶碱的特征鉴别反应是( A. 双缩脲反应 D. 紫脲酸铵反应 B. Vitali反应 E. 绿奎宁反应
) C. Marquis反应
96 ： 136 ．用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的
试剂是( ) B. 盐酸 E. 高氯酸 C. 冰醋酸
A. 5％醋酸汞冰醋酸液 D. 二甲基甲酰胺
步骤：水相中反应→有机溶剂提取→比色法测定
（二）影响定量分析的因素 1. 水相的最适pH值 如果水相pH值过小，酸性染料 几乎仍以分子状态存在；如果水相 pH值过大，则生 物碱几乎全部以游离碱的形式存在
2. 有机溶剂的选择 CHCl3、CH2Cl2
3. 酸性染料的选择 （BTB）等 4. 水分的影响 严防水分的混入 有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过 5. 有色杂质的排除 常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝
（五）特点
简便、快速、准确、精密、取样量小，测定的是
生理活性部分。
如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差， 不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。
（六）片剂分析
片剂中许多赋形剂如硬脂酸盐、苯甲酸盐、羧甲基
纤维素钠等都消耗高氯酸，因此片剂的测定一般需提
取分离并经干燥后才可进行。
如硫酸奎宁片 碱化、有机溶剂提取后，供试品成为游离碱，如 1mol硫酸奎宁→2mol奎宁→消耗4mol HClO4，所以用 HClO4滴定时，反应摩尔比为1∶4
)
B. 有机溶剂提取能完全
C. 酸性染料以阴离子状态存在 D. 生物碱几乎全部以分子状态存在 E. 酸性染料以分子状态存在
99x：[116—120]滴定反应中
A. 被测物与HClO4的摩尔比为1∶1 B. 被测物与HClO4的摩尔比为1∶3
C. 均不是
99x：116．硫酸奎宁片经碱化、氯仿提取后用HClO4滴定( ) 99x：117．硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO4滴定( 99x：118. 硫酸奎宁原料药用HClO4滴定( 99x：119. 磷酸可待因用HClO4滴定（ 99x：120. 硝酸士的宁用HClO4滴定（ ） ） ) )
C0 C1 1 0.0011(t1 t0 )
（二）适用范围
有机碱及其盐类及有机酸碱金属盐类
8＜pKb＜10
10＜pKb＜12 pKb＞12
冰醋酸作溶剂
冰醋酸+醋酐 醋酐
（三）一般测定方法
一般采用半微量法。 Chp （ 2000 ）测定方法为：取供试品 适量〔约消耗高氯酸滴定液（0.1 mol/L）8 ml〕，加冰醋酸10～ 30 ml使溶解。若供试品为氢卤酸盐，应再加5％醋酸汞的冰醋酸 溶液3～5 m1，加各药品项下规定的指示液 1～2滴，用高氯酸滴 定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。
95: 87. 酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定
的有色物是( ) B. 生物碱盐 A. 离子对和指示剂的混合物
C. 指示剂
D. 离子对
E. 游离生物碱
95：[111—114]可选择的药物：
A. 阿托品
B. 吗啡
C. 两者均可
） ）
D. 两者均不可
95：111. 具有酯结构（ 95：112. 为两性化合物（
（四）生物碱盐类的滴定
置换滴定： BH A HClO 4 BH ClO 4 HA 无机酸在冰醋酸中的酸性次序为： 高氯酸＞氢溴酸＞盐酸＞硫酸＞ HSO4-＞硝酸＞其它 弱酸 （磷酸、有机酸）
1. 有机酸盐的测定
由于有机酸系弱酸，被高氯酸置换出的 HA ，对滴定 无干扰，能准确滴定。
（四）Marquis反应
吗啡生物碱
盐酸吗啡 + 甲醛硫酸
（五）Frohde反应 吗啡生物碱
紫堇色
盐酸吗啡+钼硫酸
紫色 棕绿色
兰色
（六） 官能团反应
吲哚生物碱
1. 利血平 + 新制香草醛→玫瑰红色
2.
利血平 对 二甲氨基苯甲醛 绿色 红色
冰醋酸、硫酸 冰醋酸
（七）紫脲酸胺反应 黄嘌啉类生物碱
-
N+ .ClO4 H
-
用HClO4直接滴定硫酸喹宁时，摩尔比是1∶3
（2）加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定 硫酸奎宁 反应摩尔比为1∶2
硫酸阿托品 不能滴定
4. 硝酸盐的测定
因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位 法指示终点。如硝酸士的宁
5. 磷酸盐的测定
按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸可待因
即片剂滴定度不同于原料药。
二、提取中和法（提取酸碱滴定法、提取 容量法）
（一）原理与方法
依据性质 游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂 生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂
H2O 或 稀酸
游离生物碱或 生物碱盐类
sol(BH ) 水层
+
过滤 OH-
sol
中和法测定
有机层（B）
有机溶剂
1. 碱化
2. 有机溶剂提取
第九章 生物碱类药物的分析 The Analysis of Alkaloid
第一节 概述
一、生物碱（Alkaloids）
生物碱是生物体内含氮有机化合 物的总称
典型药物的结构
pKb=2.5
CH3O CH3O O 小檗碱 OH-+ N O
pKb=4.42
OH NHCH3 C H C H CH3
麻黄碱
CH3 N
第三节 特殊杂质检查
• 特殊杂质检查主要根据药物与杂质的理化性质差
异来进行。 一、物理法 利用药物和杂质在颜色、溶解行为、旋光性质、 对光吸收选择性等物理性质上的差异，检查杂质是否 符合限量规定
（一）溶解行为的差异 利用药物与杂质在溶解性方面的差异进行检查。如 硫酸奎宁中无机盐的检查；吗啡中其他生物碱的检查。 （二）旋光性质的差异
咖啡因 茶碱
+ HCl + KClO3
蒸干 氨气
紫色 KOH 紫色消失
（八）还原反应 吗啡与磷酸可待因的区分反应
吗啡 + K3[Fe(CN)6] K2[Fe(CN)6]
Fe
3+
普鲁士兰
二、一般鉴别反应
（一）熔点测定法
（二）沉淀反应
生物碱 + 生物碱沉淀试剂
H+
↓
常用的生物碱沉淀试剂为： 1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞等； 2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。
2- HClO )2·SO4 + 4
（1）直接滴定
注意硫酸盐的结构，正确判断反应的 摩尔比。
A. 硫酸阿托品 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1
CH3 N
H2SO4 H2O
O CO CH CH2OH 2
B. 硫酸奎宁 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3
CH CH2 OH CH3O N
第四节 含量测定
一、非水溶液滴定法（非水碱量法）
（一）原理 水溶液中滴定突跃不明显，在非水介质中，碱性增 强，使滴定顺利进行 1. 溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐 2. 滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液
原料药
或高氯酸的二氧六环溶液
3. 指示终点的方法 电位法：玻璃—甘汞电极系统 指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等 4. HClO4溶液稳定性
四、紫外—可见分光光度法
大多数 生物碱分子结构中含有生色团，可在紫外区产生吸收。
五、色谱法
（一）高效液相色谱法
1．反相 HPLC 分析生物碱类和有机含氮药物的特点 色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期地保留在色谱柱上。
2．解决方法
（1）加扫尾剂法 最常用的扫尾剂是三乙胺
（2）用硅胶作固定相法
（3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法
定量过量的酸标准溶液 碱滴定液滴定
（ 3 ）酸滴定液返提后剩余滴定法 定的生物碱
用于对热不稳
定量过量的酸滴定液 水层（ BH H ） 有机层（ B） 有机层（弃去） 碱滴定液滴定 水层 终点
（二）测定条件的选择
1. 碱化试剂 最常用氨水 2. 提取溶剂
2. 氢卤酸盐的测定
一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，
以消除氢卤酸对滴定的干扰。
2BH X Hg(Ac)2 2BH Ac HgX 2
理论量1～3倍
3. 硫酸盐的测定
生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱 的硫酸氢盐。
(BH
+ + BH+ ClO BH HSO4· · 4 +
pKb=4.35
O CO CH CH2OH 阿托品
CH CH2 OH CH3O N 奎宁
H
C N H
pKb1=5.07
pKb2=9.7
pKb1=6.0
N
N
pKb2=11.7
O O 士的宁
OCH3 OCH3
CH2 CH3O N
pKb=7.87
CH3O 罂粟碱
CH3 N O
O
CH3 N
N CH3 咖啡因
99：78. 非水溶液滴定法测定硫酸奎宁原料的含量时，可以用高 氯酸直接滴定冰醋酸介质中的供试品，1摩尔硫酸奎宁需要消耗
高氯酸的摩尔数为(
A. 1 B. 2 C. 3
)
D. 4 E. 5
97：130.非水溶液滴定法测定硫酸奎宁含量的反应条件为( A．冰醋酸一醋酐为溶剂 B. 高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定 C．1mol的高氯酸与⅓mol的硫酸奎宁反应 D. 仅用电位法指示终点 E．溴酚蓝为指示剂 96：77. 酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则( A. 能形成离子对 )
（1）提取溶剂选择的原则
（2）常用的提取溶剂 最常用氯仿 （3）提取溶剂的用量及提取次数
通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半， 以后几次应各为第一次的一半
3. 提取终点的确定 用合适的沉淀反应确定
4. 指示剂的选择
三、酸性染料比色法
（一）基本原理 在适当的pH介质中
制剂
B + H+ BH+ HIn H + + In(BH + In · )水相 + (BH ·In )有机相
H
C N H
H2SO4 H2O
2
滴定反应如下：
CH3O
CH CH2 CH(OH) CH3O N CH CH2 CH(OH) CH3O N N+ H N+ H
. SO2 4
CH CH(OH) N+ .HSO4
-
CH2
H N + .ClO4 H
-
+3HClO4
+
CH CH2 CH(OH) CH3O N + .ClO4 H
95：113. 显较强碱性（
95：114. 用提取容量法测定（
）
）
例. 用非水溶液滴定法测定二盐酸奎宁时，二盐酸奎宁和HClO4 的摩尔比是( )
A. 1∶1
B. 1∶2
C. 1∶3
D. 1∶4
)
E. 1∶1.5
例. 检查硫酸阿托品中莨菪碱时，应采用( A. 色谱法 D. 显色法 B. 红外分光法 E. 直接检查法
一般多为左旋体有效。
第二节 鉴别试验
一、特征鉴别反应
（一）双缩脲反应
OH 盐酸麻黄碱 CuSO + 4 盐酸伪麻黄碱
侧链具有氨基醇结构
-
紫堇色
乙醚
醚层 紫红色 水层 兰色
（二）Vitali反应
托烷生物碱
硫酸阿托品 + 发烟HNO3· 氢溴酸山莨菪碱
黄色
醇制 KOH
深紫色
（三）绿奎宁反应
硫酸奎宁、硫酸奎尼丁
N
pKb=14.15
pKb=6.13
N H CH3
HO
O 吗啡
OH
pKa=9.85
CH3 N O
O
H N N
N CH3 茶碱
二、生物碱类药物的通性
1. 碱性 季铵碱＞脂肪胺、脂环胺＞芳胺、N-芳杂环＞酰胺 小檗碱＞麻黄碱、阿托品＞罂粟碱＞咖啡因 吗啡具酸碱两性
2. 溶解性
游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机 溶剂，在稀酸中成盐而溶解 生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂 3. 旋光性
C. 旋光度法
例[1～5]
如 硫酸阿托品中“ 莨菪碱 ”的检查。
（三）对光吸收性质的差异
如利血平中氟化产物的检查，利血平供试品置于365nm 紫外光灯下检查，不得显明显荧光。
（四）吸附或分配性质的差异
如硫酸奎宁中“其他金鸡纳碱”的检查，利用其吸附性质的
二、化学法
利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。
如生成沉淀或显色反应。
3. 中和法测定
（1）直接滴定法 用于碱性较强的生物碱
，蒸干 有机层（ B） 残渣（ B） 中性乙醇 酸滴定液滴定 sol（B） 终点
（2）剩余滴定法
，蒸干
用于碱性较弱的生物碱
有机层（B） 残渣（B） sol（BH H ） 终点