肾缺血再灌注损伤(RIRI)动物模型具体步骤及方法

肾缺血再灌注损伤(RIRI)动物模型具体步骤及方法
原型物种人
来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法
模式动物品系Balb/c小鼠，SPF级，雄性，周龄：4~6周，体重：
20g~22g
实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组(3个浓度梯度组)，15只每组
实验周期24h、72h
建模方法1 选取20-22g左右小鼠，术前禁食12h，自由饮水。

2 3％戊巴比妥钠(80mg/kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒备皮。

3 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。

4 缺血45min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。

5 分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。

6 对照组不做缺血处理，其他操作相同。

7 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。

麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。

同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。

应用可用于研究肾缺血再灌注损伤在临床预防和治疗中的作用
1. 血清生化指标检测：取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。

2. 肾系数检测:
摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。

肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g）
3.肾小管坏死的评分:
每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按
0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%)，
2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %)，
3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，
4 = 重度损伤(受损肾小管> 7
5 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数。

4％多聚甲醛溶液固定48h。

常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。

石蜡切片进行HE染色和PAS染色。

对照组小鼠肾小球、肾小管及肾间质结构基本正常。

在模型组组，随着再灌注时间的延长呈现不同程度的肾脏病理改变，可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，
出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾小球病变不明显。

ELISA 法检测血清TNF-α、IL-6 含量, 模型组小鼠血清TNF- α 和IL- 6 含量在各时间点均显著高于对照组，其中24h为最显著。