机能实验家兔肠缺血再灌注损伤
家兔缺血再灌流损伤脊髓的病理学研究
图7
缺血 60 分钟组家兔术 后 1 天 L 4 脊髓。 大部分神经 元
变性坏死 , 呈现不 规则 絮状 嗜银 坏死 碎片。 Holmes 还原 银染 色 )
图 5 对照家兔术后 1 天 L 3 脊髓灰质 , 部份神经 元轻度变性 ,
但多数神经元结构基本正常。 Holmes 还原银染色 ) 200
图8
缺血 90 分钟组家兔术 后 1 天 L 4 脊髓。 灰质神经元 变
性坏死 , 呈现海 绵状 改变 , 整 个视 野未 见完整 的细 胞结 构。 Holmes 还原银染色 ) 200
讨
论Hale Waihona Puke 哺乳动物脊髓对损伤的反应十分敏感, 脊髓创 伤后的典型病理特征是急性、 进行性、 中央性、 出血 ∀2, 3# 性坏死 。脊髓 损伤后 数天内 即出现 广泛 性坏 死 , 同时伴有大量的巨噬细胞浸润 , 甚至形成空洞。 本实验中, 脊髓严重缺血损伤( 如缺血 90 分钟) 后再 灌流 1 天时即观察到整个灰质神经元广泛性坏死, 呈现空泡海绵状改变; 在再灌流 3 天、 7 天、 14 天时, HE 染色切片上可见大量的炎性细胞 浸润, 斑片状 出血, 有的出现神经元肿胀、 卫星状态和核固缩、 噬 神经细胞作用等典型神经病理学表现; 同时可见到 受损脊髓的炎性病理反应的动态变化过程 , 再灌流 3 天即见到明显炎性细胞浸润, 再灌流 7 天时炎性 反应达高峰 , 14 天时明显减轻。由 此可见, 炎症反
脊髓缺血损伤的病理改变程度及其变化规律直 ∀1# 接关系到脊髓 继发损伤程度 及损伤机制 。既往 研究表明: 脊髓创伤的 病理特征是脊 髓急性、 进行 ∀2, 3 # 性、 中央性出血性坏死 。是否缺血性损伤 脊髓 也表现出同样的变化特征 , 目前尚无统一认识 , 加强 这方面的研究仍然十分必要。作者在一种新的成年 家兔脊髓缺血再灌流损伤模型研究中, 发现家兔表 现出典型截瘫和脊髓感觉运动传导功能障碍∀4# , 这 种功能障碍与脊髓组织病理损害间关系怎样, 也需 探讨。本实验在上述研究的基础上从神经病理学入 手, 初步观察了缺血再灌流时脊髓组织的形态结构 变化特征 , 现报告如下。
兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建立
兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建立【摘要】目的建立小肠急性缺血再灌注损伤模型，确定合适的肠系膜上动脉阻断时间。
方法将70只新西兰兔按不同的肠系膜缺血时间（0、15、30、45、60 min）分为A、B、C、D、E共5组，每组14只。
每组取8只于恢复血供2 h后留取兔下腔静脉血标本及肠组织，检测血清中丙二醛（MDA）含量的变化，光镜下观察小肠组织形态学变化并对小肠黏膜损伤程度进行评分。
另6只兔用于术后24、48、72 h 生存率的观察。
结果 A、B、C组的术后生存率均>83.3%。
C、D、E 组的MDA含量及肠黏膜损伤评分与A组比较，差异均有显著性（F=12.13、280.24,P<0.01）。
结论肠系膜缺血30 min再灌注2 h 是建立兔小肠急性缺血再灌注损伤的合适时间。
【关键词】肠；缺血；再灌注损伤；模型,动物［ABSTRACT］Objective To create a model of acute intestinal ischemia reperfusion injury in rabbits so as to determine suitable blocking duration of superior mesenteric arteries (SMA). Methods Seventy rabbits were divided into five groups as groups A, B, C, D, and E, based on the different blocking durations of SMA for 0, 15, 30, 45 and 60 minutes, respectively, with 14 rabbits in each group. Eight of the rabbits in each group were detected for serum levels of MDA 2 h after recovery of blood supply, the changes of histomorphology of small intestine observed light microscopically. The other sixrabbbits in each group were used to observe the 24 h, 48 h and 72 h survival rates after the blockage of SMA. Results The survival rates were over 83.3% in groups A, B and C. Serum levels of MDA and score of injury of intestinal mucosa were significantly higher in groups C, D and E than that in group A (F=12.13,280.24；P<0.01). Conclusion The suitable duration for creating a model of acute SMA ischemia reperfusion injury in small bowel is ischemia for 30 minutes and reperfusion for 2 hours.［KEY WORDS］ intestines; ischemia; reperfusion injury; model, animal缺血再灌注损伤(IRI)是指组织缺血一段时间，当血流重新恢复后，细胞功能代谢障碍及结构破坏反而较缺血时进一步加重，器官功能进一步恶化的临床综合征[1]。
家兔肠缺血再灌注损伤ppt课件
端，剪口部位尽量靠近远心
端，成45度角朝向近心端 剪一小口，约为管径的
1/3-2/3，插管方向朝向近
心端，插入2-4cm
【插管的注意事项】
插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气
泡，记录前应关闭三通管
插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠 勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血
【实验动物】
家兔（性别、体重）
【实验设计原理】
通过肠系膜上动脉结扎，即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)来阻断部分 肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注， 以复制肠缺血/再灌注损伤的动物模型，探
讨缺血/再灌注损伤的发生机制
【实验分组】
Байду номын сангаас Ⅰ组：持续缺血组 结扎肠系膜上动脉
（2）再灌注时遵循低压、低温、低钙的原则
（3）清除活性氧
（4） Ca2+拮抗剂的使用
（5） 减少白细胞的激活和炎性介质的释放 （6）补充能量及促进能量生成 （7）启动细胞内源性保护机制
【实验报告要点】
1、实验目的 2、实验动物 3、简单的实验步骤 4、列表记录所有组的实验指标 5、实验讨论 6、实验结论
① ② ③
时间
Ⅰ组：结扎→BP↑→BP↓趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水 肿），无出血点 Ⅱ组：结扎→ BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身 调节）→再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血 点，BP低于正常>1/2时→休克
※ Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与I/R是不同的 损伤过程，后者损伤更严重
【结果不明显可能存在的问题】
（1）实验过程中是否发生了大血？ （2）缺血是否完全？ （3）再灌注是否通畅？ （4）记录结果时基线是否改变？
家兔肠缺血再灌注实验
2010 李娜
•实验目的 •实验动物： 家兔2.5 Kg左右 •实验药品： 25% 乌拉坦 2ml/Kg… •实验方法：
1. 全身麻醉后，固定。 2. 颈部手术：① 气管切开插管 （3-4软骨环） 3.腹部手术 ： ① 膀胱颈部结扎，膀胱荷包缝合。 ② 分离肠系膜上动脉。 4. 颈部手术： 分离左侧颈总动脉，动脉插管，接测压装置记录血压 （充分肝素化 充分肝素化）并且做耳缘静脉穿刺，ivgtt 0.3%肝素生理盐水。 充分肝素化 5. 记录生理指征： 心电图，呼吸曲线，肛温等。 6. 动脉夹夹闭肠系膜上动脉，观察并记录各项生理指标的变化。 7. 分离腹主动脉，用肝素化的注射器抽取动脉血0.3 ml，立即针头插入橡皮塞并做血 气分析。 8. 将实验结果及数据整理、制表。 9.写出实验报告，一周后上交 一周后上交。 一周后上交
（一）生理指标的观测 1. 家兔体重： ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱg 2. 生理指标的变化
生理指标 皮肤黏膜 颜色
时间（分钟）
肠袢形态 学改变
呼吸
血压
心率
肛温
尿量
0 10 20 30 40
打开动脉夹
20
家兔正常血气参考值
家兔肠缺血／再灌注损伤的血液自由基改变及川芎嗪的保护作用
家兔肠缺血／再灌注损伤的血液自由基改变及川芎嗪的保护作
用
周水生;董加喜
【期刊名称】《中国中医药科技》
【年(卷),期】1997(004)002
【总页数】1页(P94)
【作者】周水生;董加喜
【作者单位】浙江省咸宁医学院;浙江省咸宁医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.超氧化物歧化酶及川芎嗪对家兔肠缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 周水生;董加喜;胡望平;程正启;刘复兴;李云;雷亚宁;
2.川芎嗪对家兔肠缺血再灌注损伤作用的实验研究 [J], 陈悦;单季先
3.川芎嗪对家兔肠缺血再灌注损伤时一氧化氮水平的影响 [J], 王卫;王万铁;徐正祄;金可可;李东;潘景业
4.家兔心肌缺血再灌注损伤及川芎嗪保护作用的超微结构改变 [J], 王宗敏;王万铁
5.川芎嗪对家兔肠缺血再灌注损伤肠组织超微结构的影响 [J], 王卫;方周溪;王青;金可可;王万铁;徐正介;潘景业
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家兔肾缺血再灌注损伤时肠微循环的变化及其意义
1.4 统计学分析 : 实验所得的数据采用均数 $ 标准差 (x!S > 表示 , 用 SPSS10.0 for Windows 统计学 软件进
行方差分析 O
缺血 - 再灌注 (ischemia-reperfusion, I-R) 在临床 上也是一种常见的严重的病理生理过程 , 许多因素 均可以引起 I-R 损伤 [1]O 机体缺血再灌注损伤主要 是由自由基 ~ 钙超载所引起的观点基本上得到了公 认 , 但目前缺血再灌注损伤的研究主要集中在缺血 再灌注时某些自由基含量的变化 ~ 自由基对机体的
一步缩小 9微动静脉血流进一步减慢 P!0.0l 表
附表 组别 管袢数 家兔肾缺血再灌注损伤时肠微循环的变化 缺血前 缺血 30min
再灌注 30min 再灌注 60min
7.00$0.53
5.63$0.92*
4.88$0.83**
4.00$0.53**
( 支 /mm)
微动脉管 径 (!m) 微静脉管 径 (!m) 微动脉
1.3 实验方法 : 用 20% 乌拉坦按 1g/kg 的剂量从兔的
耳缘静脉进行全身麻醉 , 行全身血液肝素化后 ,气管 切开并插管 O 从下腹正中切口入腹 , 分离出左右肾 , 结扎右肾动脉 ,分离出左肾动脉穿线识别 O 从右下腹 轻轻拉出一段游离度比较大的小肠肠袢 , 选择小血 管走行丰富 ~ 脂肪少的部位放在显微镜载物台上 ; 让 家兔安静 5min 后 , 用与 BI2000 医学图像分析系统 连接的微循环显微镜观察记录小肠微循环的各项指 标作为正常的对照值 , 然后用无损伤动脉夹夹闭左 肾动脉 30min 后松开动脉夹 ,恢复肾脏的血液供应 O 分别在缺血 30min ~ 再灌注 30min~ 再 灌 注 60min 时 各记录上述指标 1 次 O
家兔肠缺血-再灌注后各器官损伤变化的实验研究
家兔肠缺血-再灌注后各器官损伤变化的实验研究要瑞莉;刘爱东;李宏杰;张一兵【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2009(31)13【摘要】目的探讨家兔肠缺血-再灌注引起各器官变化的特点.方法选取10只健康家兔,随机分为实验组(5只)与对照组(5只),观察肝、肾、肺、心肌及胃肠的病理改变,检测血浆血浆丙二醛(MDA)、红细胞膜MDA、血浆黄嘌呤氧化酶(XOD)、血浆超氧化物歧化酶(SOD)的变化.结果实验组家兔的肝、肾、肺、心肌及胃肠均有较明显的病理改变.实验组血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量、肌酐含量、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、血浆和红细胞膜MDA及血浆XOD含量明显高于对照组(P＜0.05),血浆SOD明显低于对照组(P＜0.05).结论家兔肠缺血-再灌注可导致肝、肾、肺、心肌及胃肠损伤,氧自由基对各器官的破坏可能是病理变化的主要因素.【总页数】2页(P1554-1555)【作者】要瑞莉;刘爱东;李宏杰;张一兵【作者单位】063004,河北省唐山市,唐山职业技术学院基础医学部;063004,河北省唐山市,唐山职业技术学院基础医学部;华北煤炭医学院病理生理教研室;华北煤炭医学院病理生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R364.12【相关文献】1.肿瘤坏死因子、白细胞介素6活性变化对家兔肠缺血再灌注后急性肺损伤的影响[J], 沈炳玲;邢冬红;秦毅;黎新宪;杨芝红2.异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注后肺损伤磷脂酶A2变化的影响 [J], 吴新军;孙艳红;王俊科;邢亚楠3.亚甲蓝预防肠缺血再灌注后肺损伤的实验研究 [J], 吴多志;梁敏;陈揭晓;王俊博4.猕猴肠缺血再灌注后肠道菌群变化与肠黏膜屏障损伤的关系 [J], 范华;吴浩;谭庆华;胡兵;唐承薇5.亚甲蓝对家兔肠缺血再灌注后肺损伤的保护作用 [J], 陈揭晓;吴新民;刘毓和;欧阳碧山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
探究丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注肾损伤的影响
探究丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注肾损伤的影响摘要：目的：初步探究丹参处理对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤的作用。
方法：选用健康家兔24只，随机分为3组：肠系膜上动脉缺血前注射生理盐水的对照组（Ａ组）、缺血前注射丹参注射液的实验组（B组）、再灌注前注射丹参注射液的实验组（C组）。
常规动物实验操作找到肠系膜上动脉，夹闭家兔肠系膜上动脉30min造成缺血，再灌注30min。
观察尿量，收集不同时期尿肌酐、血肌酐、丙二醛（MDA）并测定其含量。
结果：家兔肠系膜上动脉缺血再灌注后尿量减少，A组减少最显著，其次是B组，C组减少较轻。
缺血再灌注后血肌酐、血清中丙二醛浓度增加，尿肌酐浓度下降，其中A组变化最明显，其次是Ｂ组，C组变化不明显。
结论：丹参能减轻家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所引起的肾损伤，对肾损伤有保护作用。
关键词：肠系膜上动脉缺血再灌注丹参肾损伤肠缺血再灌注（ＩＩＲ）损伤是休克、严重创伤及复苏过程中常见的病理生理过程，普遍存在肠根阻、肠扭转、大手术、烧伤等。
研究表明，小肠缺血再灌注后除对小肠组织本身造成损害外，还会通过全是炎症反应对其他器官造成损伤。
目前认为，缺血再灌注损伤产生的主要机制与活性氧的损伤作用、钙超载的作用、白细胞损伤作用、补体级联的损伤作用有关。
研究表明，丹参具有扩张外周血管、抗血栓形成、改善微循环等作用。
本实验采用家兔肠系膜上动脉缺血再灌注模型造成肠缺血，探讨丹参对家兔肠系膜上动脉缺血再灌注所致的肾损伤的保护作用和影响及其可能的机制。
1.材料与方法1.1材料：1.1.1实验动物：健康家兔２４只，体重２—３㎏，清洁级，由南方医科大学实验动物中心提供。
1.1.2主要仪器：医用计算机记录系统（PcLab）及计算机、家兔手术台、哺乳动物手术器械一套、动脉插管、静脉插管、输尿管插管、压力换能器、离心机、分光光度计，恒温水浴箱、带刻度的试管及试管夹、试管和试管架、EP管、微量加样枪带枪头、电子天平、黑色丝线、纱布等。
家兔肠造血——再灌注损伤时脂质过氧化的变化及其意义
家兔肠造血——再灌注损伤时脂质过氧化的变化及其意义
张硕森;崔和勤
【期刊名称】《天津医科大学学报》
【年(卷),期】1998(004)004
【摘要】目的：探讨肠缺血－再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤时血浆及组织脂质过氧化的
变化及其意义。
方法：复制家兔肠Ｉ／Ｒ损伤模型，检测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）活性及丙二醛（ＭＤＡ）含量，实验分为Ｉ／Ｒ损伤组及假手术（Ｓｈａｍ）对照组，并进行比较。
结果：缺血前两组动物ＳＯＤ，ＸＯ及ＭＤＡ值均无统计学差异，Ｉ／Ｒ组再灌注后２ｈ与缺血前及Ｓｈａｍ组相比，ＳＯＤ活性显著下降，ＸＯ活性及ＭＤＡ含量明显增加（
【总页数】3页(P325-327)
【作者】张硕森;崔和勤
【作者单位】华北煤炭医学院病理生理教研室;华北煤炭医学院病理生理教研室【正文语种】中文
【中图分类】R574.02
【相关文献】
1.实验高压电烧伤家兔肠黏膜的微循环变化及意义 [J], 张庆富;王佳哲
2.家兔肝缺血再灌注损伤脂质过氧化的动态变化及川芎嗪干预的机制 [J], 徐正;王万铁;李东;林丽娜
3.家兔肾缺血再灌注损伤时肠微循环的变化及其意义 [J], 焦勇钢;张耀东;李希忠;
陈予
4.大鼠肠缺血再灌注损伤后肠黏膜免疫功能的变化与意义 [J], 李斌;文亮;郭毅斌;尹昌林
5.卡巴胆碱对肠部分缺血-再灌注损伤家兔血浆促炎细胞因子含量的影响及对烧创伤后防治的意义 [J], 白玉梅;胡森;刘秀华;曹卫红;黎君友;孙丹;吕艺
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机能学创新实验：维拉帕米对家兔心肌缺血性再灌注损伤的影响PPT课件
健康家兔24只 雌雄各半 体重2.0~2.5kg
由遵义医学院动物中心提供
肌酸激酶试剂盒(CK) 肌酸激酶同工酶试剂盒 (CK-MB)
0.25%盐酸维拉帕米溶液 10g/L肝素 250g/L乌拉坦溶液
1、Байду номын сангаас醉和固定 2、接心电图电极：
给家兔四肢剃毛后连接好心电图电极,记录波形。
3、颈部手术： 分离一侧颈总动脉，做颈总动脉插管待用。
在缺血再灌注前，缺血40min后和再灌注3h后这3个时 刻段分别在颈总动脉取血2ml按以下步骤测量出肌酸激酶和 肌酸激酶同工酶。
肌 酸 激 酶
肌酸 激酶 同工 酶
与A组相比,若再灌注末B组的CK含量增加、而 CK-MB含量差异不显著（P<0.05），则说明B组 家兔已造成心肌损伤。
与B组比较，C组的CK、CK-MB含量均降低，（ P<0.05）则说明缺血后适应对缺血心肌具有保 护作用。
如C组和D组的CK、CK-MB含量相同或降低（ P<0.05），则可初步说明药物后处理具有与缺 血后适应发挥同样的保护效应。
近年来，随着休克治疗的进步以及动脉搭 桥术、心肺复苏、心脏外科体外循环和器官移 植等方法的建立和推广运用，使许多组织器官 缺血后重新得到血液再灌注。
心肌
1、氧自由基生成增多 2、 3、白细胞的激活
药物后处理（P-postC）
“药物后处理”即在再灌注时或再灌注前用药物代替" 再灌—停灌"的循环处理过程，模拟缺血后适应的某些机 制而发挥保护心肌缺血再灌注损伤作用，若能证实其与缺 血后适应发挥同样的保护效应，那药物使用更加方便，同 时避免了因机械干预对心肌及血管的损伤作用，固临床上 将具有更为广泛的前景。
肠缺血再灌注损伤及缺血预处理实验设计
肠缺血再灌注损伤及缺血预适应处理的干预作用研究背景：缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI) 是指各种原因导致组织器官缺血时, 会引起细胞代谢障碍和组织结构出现破坏, 而当血供恢复时, 组织及细胞损伤反而出现加重的现象称为。
微血管通透性增加、组织间质水肿、血管调节机制受损及炎症细胞浸润与缺血再灌注所引发的器官功能障碍相关。
肠缺血再灌注（intestinal ischemia reperfusion，IIR）损伤是由多种临床情况引起的，如出血性休克、败血症、严重创伤、绞窄性肠梗阻和急性肠系膜缺血等，具有高发病率和死亡率的一种常见临床问题。
IIR 会导致不可逆转的组织损伤，血流恢复后通过诱导细胞凋亡、炎症反应及氧化应激又会进一步加重损，严重者还会引起全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），甚至进一步诱发多器官功能衰竭（multiple organ failure，MOF）。
因此，防治肠缺血再灌注损伤是危重病研究领域的重点之一。
缺血预适应（ischemic preconditioning, IPC）是短期缺血应激使机体对随后长时间的缺血再灌注损伤产生明显保护作用的一种适应性机制进行反复的、短暂的、无创伤、无危害的缺血预适应训练，能够激发人体免疫系统的应急机制，产生和释放内源性保护物质（如：腺苷、缓激肽、一氧化氮等，这些物质参与保护心肌和能量代谢）减轻和抵抗随后更长时间因为人体缺血缺氧造成的损伤。
故本次研究的目的是探究不同的缺血预处理方法对肠道I / R损伤的可能保护作用。
材料与方法：1.动物与分组：中国家兔16只，雌雄各半，随机分为4组，分别为假手术组（只进行开腹手术，辨认肠系膜上动脉，不结扎）；对照组（进行肠系膜上动脉根部夹闭及复灌）；预适应处理A组（先进行缺血预处理，方法为夹闭5min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）；预适应处理B组（先进行缺血预处理，方法为夹闭20min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）。
家兔脑缺血后再灌注损伤与动脉血压相互影响的效应观察
１ 材料 与 方法
或 ６ ｉ， ０ｍｎ 同时用 ５ ｌ ０ｍ 肝素 化注 射器 经股 动脉 放血 ， 使 ＭＡ Ｐ下降不 超 过 ２ Ｈ ， 缺 血 后 恢 复 大 脑 血 液 灌 ０ｍｍ ｇ 脑 清洁 级家 兔 １８只 ， 雄 各半 ， 质 量 注 ， 慢 回输 放 出 的血 液 。手 术 期 间监 测 肛 温 ， 持 在 ０ 雌 体 缓 维
压会加重脑损伤 。结论
本研 究成功 的建立 了家兔高血压和低血压模型 ， 并通过 有创 的方 式监 测 了脑缺 血再灌 注前 后
的平均动脉压 ， 更好 地反 映 了脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 与 血 压 之 间 的 关 系， 为今 后 继 续 深 入 研 究 不 同基 础 血 压 产 生 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 的 治 疗 提 供 了前 期 实验 依 据 ， 有 较 大 的价 值 。 具
【 关键词 】 脑缺血后再灌注
高血压
低血压
家兔
心脑 血管 疾病 是较 为严 重 的致 死 、 残 、 发 率 较 夹 闭双 侧 颈总 动 脉 时 间 分 为 ２ ｉ、０ｍｎ ６ ｉ 致 复 ０ｍｎ ４ ｉ、０ｒｎ ａ 高 的疾 病 ， 居各 种死 因首 位 Ｊ 。其 中脑梗 死 更是 严 重 威 个 亚组 ， 每个 亚 组 ８只家兔 。参 照 欧册华 等 介 绍 的方 胁 着人 类 、 尤其 老 年 人 群 的健 康 。 在 老年 患 者 中 ， 常伴 法 对家 兔 实施缺 血 再 灌 注 ， 要 操 作 步 骤 如 下 ： 前 禁 主 术
家兔 脑 缺 血 是 制 作 较 成 熟 的模 型 ｌ ， ＿ 我们 于 ２ １ ２ ００年 ５ 机械通 气 。右侧 股 动 脉 置 管 监 测 平 均 动 脉 压 （ Ｐ 。 ＭＡ ） 月至 ６月 间先 建立 起家 兔不 同基 础 血压 的模 型 ， 继而 模 在第 ６颈椎 椎 间孔 附近 的臂 丛 神 经 中分 离 暴 露 双 侧 椎 拟 脑缺 血后 再灌 注发 病 的实 际情 况 ， 观察 二 者之 间 的关 动脉 ， ４号丝 线 结 扎 ， 闭 双侧 颈 总 动脉 ２ ｉ、０ｍｎ 夹 ０ｒｎ ４ ｉ ａ
关于“缺血再灌注损伤的防治”的设计性实验
第五组设计性实验报告专业：XX 班级：XX 组数：XX成员：XX实验内容：缺血—再灌注损伤的防治实验目的：探究清除自由基对缺血再灌注损伤的防治作用即不同浓度GSH对缺血再灌注损伤的防治作用及给药时机的选择实验原理：心肌缺血再灌注损伤（MRI）是指心肌细胞因缺血发生可逆的、可存活的损伤，在缺血纠正时，这种损伤反而加重，继而引起细胞死亡或进一步功能障碍。
所有器官都能耐受一定时间的缺血，超过一定时间后，则会发生再灌注损伤。
自由基的作用是缺血再灌注损伤的重要发病学环节。
缺血再灌注时，自由基生成增多，将使膜脂质过氧化增强、蛋白质功能抑制、核酸及染色体破坏，因此清除过多的自由基，可减轻缺血再灌注损伤。
还原型谷胱甘肽（GSH）能提供电子使自由基还原，从而清除自由基。
实验对象：5只健康成年家兔，2.0~3.0kg实验药品和器材：1.药品：生理盐水、3%的戊巴比妥钠、1g/kg GSH的生理盐水、0.5g/kgGSH的生理盐水、0.1g/kg GSH的生理盐水2.器材：BL—420E生物功能实验系统、二道生理记录仪、压力换能器、多用电源插座、缝线、注射器、手术器械一套实验方法：1.将5只家兔分别记为A、B、C、D、E2.耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠1ml/kg全身麻醉，仰卧位固定于兔台上3.进行气管插管，从左侧颈总动脉逆行插管至左心室，经压力换能器与生物功能实验系统相连，以观察记录心功能变化。
在左股动脉插管经压力换能器与二道生理记录仪相连，以观察血压。
左股静脉连输液装置，输注生理盐水（10ml/(kg·h))和给药4.沿胸骨左缘切断第2、3、4肋软骨，小心剪开心包膜，在不损伤胸膜情况下暴露心脏，辨认左冠脉左室支，用医用无创缝合针线在左室支中点下穿线备用阻断。
术后稳定20分钟，双活结结扎冠脉左室支，造成急性心肌缺血，40分钟后松开结扎线，再灌注120分钟，以复制缺血再灌注模型5.观察指标，将结果记录于下面的表中:分别于缺血即刻及缺血后20分钟、40分钟，再灌注后20分钟、40分钟、60分钟、120分钟，在生物功能实验系统同时记录以下心功能指标（血压在二道生理记录仪上记录）（1）心率和血压（2）左室收缩功能指标：左室内收缩压力峰值（LVSP）和左室内压力最大上升速率（+dp/dt max）（3）左室收缩功能指标：左室内舒张压力峰值（LVDP）和左室内压力最大下降速率（—dp/dt max）6. A兔：在再灌注即刻以10ml/(kg·h)速度输注39.4℃生理盐水120分钟B兔：在再灌注即刻以10ml/(kg·h)速度输注39.4℃1g/kg GSH的生理盐水120分钟C兔：在再灌注即刻以10ml/(kg·h)速度输注39.4℃0.5g/kg GSH的生理盐水120分钟D兔：在再灌注即刻以10ml/(kg·h)速度输注39.4℃0.1g/kg GSH的生理盐水120分钟E兔：在分析了不同浓度的GSH的治疗作用后选择最佳浓度，在缺血前120分钟以10ml/(kg·h)速度输注39.4℃最佳浓度的GSH的生理盐水120分钟，然后再进行缺血再灌注处理注意事项：1.为防止结扎过紧影响再灌注时缝线的剪断，在结扎处置1.5mm的凹槽塑料管，一同结扎，心肌缺血到达时间后，从塑料管凹槽处剪断结扎线2.手术防止出血，结扎冠脉放松后腰确保冠脉已再通实验结果：A兔缺血即刻缺血后20分缺血后40分再灌注20分再灌注40分再灌注60分再灌注120分心率血压LVSP +dp/dt maxLVDP -dp/dt maxB兔心率血压LVSP +dp/dt maxLVDP -dp/dt maxC兔缺血即刻缺血后20分缺血后40分再灌注20分再灌注40分再灌注60分再灌注120分心率血压LVSP+dp/dt maxLVDP-dp/dt maxD兔心率血压LVSP+dp/dt maxLVDP-dp/dt maxE兔心率血压LVSP+dp/dt maxLVDP-dp/dt max实验结论：XX结果讨论与分析：XX。
机能实验学：肠缺血再灌注损伤
人血清（浆）7.1 ±1.2nM/ml 标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1ml时，则吸光度为0.060-0.070
四、注意事项
（一）耳沿静脉为后期输液通道，麻醉时尽量使 用一侧耳沿静脉；
（二）分离肠系膜上动脉时要细心，一定避免损 伤门静脉和下腔静脉；
再灌注至第30min时 放血处死动物
夹闭前 测量动脉血压、脉压、
心率。 动脉取血1.5ml 夹闭至第30min时 测量动脉血压、脉压、
心率
夹闭至第60min时 测量动脉血压、脉压、
心率 动脉取血1.5ml
三、实验技术路线
附MDA含量测定方法： ① 配制甲、乙液
甲液配制方法：1号试剂：2号试剂：3号试剂=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 乙液配制方法：1号试剂：2号试剂：冰醋酸=0.1ml：3ml：1ml混合备用。 ② 测定方式：
（三）缺血再灌注损伤的防治原则 1、尽早恢复血流，尽量减少缺血时间； 2、注意再灌注时的低流、低压、低温； 3、改善缺血组织的代谢； 4、清除自由基。
三、实验技术路线
（一）实验动物 家兔 （二）观察指标
1、动脉血压、脉压、心率 2、血清丙二醛（MDA）含量
丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）
MDA是自由基引起的脂质过氧化过程中生成的一种醛类物质。丙二醛可以 作为交联剂促进核酸、蛋白质及磷脂的交联，改变生物大分子的功能。通过检测 丙二醛的含量可以反映脂质过氧化的程度。
SOD可以岐化超氧离子生成H2O2，SOD作用的重要意义在于清除H2O2和 OH·的前身超氧离子，从而保护细胞不受毒性氧自由基的损伤。
后，组织的损伤程度较缺血时进一步加重， 器官功能进一步恶化的综合征。
丹参酮_A对家兔心肌缺血_再灌注损伤后心功能的改善作用及其机制_艾丹
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丹参酮 Ⅱ A 对家兔心肌缺血 -再灌注损伤后 心功能的改善作用及其机制
艾 丹 （ 咸宁市第一人民医院心电图科， 湖北 咸宁 437000 ）
466
〔Journal of Hubei University of Science and Technology （ Medical Sciences） 〕 湖北科技学院学报（ 医学版） 2013 年第 27 卷第 6 期 再灌注完成后， 处死动物。 迅速切取其结扎 线以下缺 血 区 心 室 肌， 用 于 检 测 心 肌 SOD 以 及 MDA 含量。 1． 2． 2 MDA 检测 心肌组织 SOD、 所取缺血区心室肌加入预冷生理盐水 ， 匀浆， 20 ℃ 冰箱储存， 离心， 取上清液置测定时分别按 照试剂盒中说明书严格操作。 1． 2． 3 心功能参数检测 420 生物机能实验系统分别于缺血前、 用 BL缺血后 30 min、 再灌注 120 min 时记录左心室收缩 LVSP ） 、 压（ left ventricular systolic pressure ， 左心室 systolic pres舒张 末 期 压 力 （ left ventricular endsure， LVEDP） 作为心功能的指标。 1． 3 统计学分析 ± s ） 表示， 所有数据以均数 ± 标准差 （ x 珋 采用 P ＜ 0． 05 即为差异有统计学意 成组 t 检验分析， 义。 2 2． 1 结 果 丹参酮ⅡA 对家兔心功能参数的影响 如表 1 所示， 假 手 术 组 家 兔 的 LVSP 和 LVEDP 在缺血前至再灌注 120 min 内并没有明显变 化。缺 血再 灌 注 组 家 兔 的 LVSP 值 在 缺 血 30 min、 再灌注 120 min 时均低于假手术组， 且均低于 缺血前。而预先给予药物治疗的丹参酮 Ⅱ A 组家 兔的 LVSP 值在缺血 30 min 时低于假手术组以及 缺血前数值； 再灌注 120 min 时 LVSP 值 高 于 缺 血再灌注组， 并也高于缺血 30 min 时数值。 这些 结果显示， 丹参酮Ⅱ A 能改善缺血再灌注家兔的 收缩功能。 同时， 缺血再灌注组家兔的 LVEDP 值在缺 血 30 min、 再灌注 120 min 时均高于假手术组， 且 高于缺血前。 丹参酮 Ⅱ A 组家兔的 LVEDP 值在 缺血 30 min 时高于假手术组以及缺血前数值， 而 略低于缺血再灌注组； 再灌注 120 min 时 LVEDP 值低于缺血再灌注组， 并也低于缺血 30 min 时数 值。这些结果显示， 丹参酮 Ⅱ A 也能改善缺血再 灌注家兔的舒张功能。 2． 2 影响 如表 2 所示， 缺血再灌注组心肌组织的 MDA 含量高于假手术组， 其 SOD 活性则低于后者。 在 丹参酮 Ⅱ A 组， 心肌组织的 MDA 含量低于缺血再灌注组， 其 SOD 活性高于后者缺血再灌注组。 丹参酮 Ⅱ A 对家兔心肌组织脂质过氧化的
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气管平行，颜色鲜红、 较细、触之有搏动感， 长约2-3cm，穿线备用
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注意：（1）钝性分离 （2）辨清颈A鞘内的血管神经
血管插管
先结扎远心端，后夹闭近心 端，剪口部位尽量靠近远心 端，成45度角朝向近心端 剪一小口，约为管径的 1/3-1/2，插管方向朝向近 心端，插入1-1.5cm
家兔肠缺血/再灌注损伤
Ischemia-reperfusion Injury in Rabbit (I/R)
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1
【目的要求】
掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较 缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别
观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血 再灌注损伤发生的机制
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2
【实验动物】
家兔
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血流30min）
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肠系膜上动脉示意图
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【注意事项】
1. 移动内脏时，动作要轻柔 2. 分离肠系膜上A时需小心细致，不要使用锐利
器械，以免损伤血管造成大出血 3. 肠系膜上A夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时
注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全
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【如何防治I/R】
（1）尽早恢复血流灌流，缩短缺血时间 （2）再灌注时遵循低温、低压、低钙的原则 （3）清除活性氧 （4）Ca2+拮抗剂的使用 （5）减少白细胞的激活和炎性介质的释放 （6）补充能量及促进能量生成 （7）启动细胞内源性保护机制
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【实验分组】
Ⅰ组：持续缺血组 夹闭肠系膜上动脉1h
Ⅱ组：再灌损伤组 夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血
流30min
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【实验方法与步骤】
1. 称重
2. 全 麻 （ 耳 缘 静 脉 注 射 25% 乌 拉 坦
4ml/kg）
★注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，
pt
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Ⅰ组：结扎→BP↑→ BP↓趋于平稳（相似于结 扎前）， 肠壁粉红→暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点
Ⅱ组：结扎→ BP↑→BP↓趋于平稳（机体自身调节） →再灌→BP↓，肠壁暗红、水肿、出血点BP低于正常 >1/2时→休克
※ Ⅰ、Ⅱ组比较说明：缺血损伤与 是不同的 损伤过 程， 损伤过程，后者损伤更严重
3
【实验器材】
兔 手 术 台 、 BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、 动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、 实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、 25%乌拉坦、生理盐水
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【实验设计原理】
通 过 肠 系 膜 上 动 脉 结 扎 ， 即 SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)来阻断部分肠的血液供应一段时 间后再恢复血流灌注，以复制肠缺血/再灌 注损伤的动物模型，探讨缺血/再灌注损伤 的发生机制
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【结果分析】
① 峰表示：结扎肠系膜上A→ 血管床容量↓→ 有效循环血量相 对↑→BP↑ 压力感受器 (+) 减压 反射→BP↓
② 峰表示：松开肠系膜上A→ 血管床容量↑→有效循环血量相 对 →BP↓升压反射（再灌注损 伤还未来得及发生）有时②峰
不出现，BP↓直到死亡
③ 血压持续下降，有再灌注损
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【典型结果】
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【结果不明显可能存在的问题】
（1）实验过程中是否发生了大血？ （2）缺血是否完全？ （3）再灌注是否通畅？ （4）记录结果时基线是否改变？ （5）个体差异
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【I/R的发生机制】
（1）活性氧的作用 ） （2）钙超载 ） （3）白细胞的作用 ） （4）高能磷酸化合物生成障碍 ）
腹主动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免
损伤其他血管（缺血再灌注夹闭时注意垫橡皮管）
7.记录一段正常血压曲线 8.复制肠缺血-再灌注模型，轻轻提起肠系膜上动脉
的穿线，用动脉夹夹闭，同时观察各项生理指标变化。
9.分组进行实验并记录各项指标。（Ⅰ组：夹闭肠系 膜上动脉1h Ⅱ组：夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复
★麻醉效果：角膜反射
基本消失，钳夹家兔
舌头无回收，四肢松软
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3. 仰卧固定（背部交叉）、备皮 颈部正中（甲状软骨下缘→胸骨上切迹） 腹部正中（剑突下1.5cm起向下5cm） ★注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！
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4.颈部正中切口行动脉插管
切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘→胸骨 上切迹，长约5cm
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【插管的注意事项】
插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气 泡，记录前应关闭三通管
插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠 勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血
管
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5.腹部正中切口：
腹正中线自剑突下1.5cm起向下做5cm切口
※6.寻找肠系膜上动脉：
将家兔腹腔内脏左移，找到齐右肾门对侧垂直向