曲霉菌属检验技术

曲霉菌属检验技术

♦曲霉菌是丝孢目丛梗孢科的真菌。

♦广泛分布于自然界，达900余种，分为18个群，对工业和医药的用途很大。酿酒造酱，生产有机酸及酶制剂，抗生素等。

♦曲霉菌是实验室经常污染的真菌之一。可感染动物，也可在寄生的饲料、粮食中产生毒素，动物食后引致中毒。♦人体对曲霉有极强免疫力，只有在免疫功能降低时才能致病，如使用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素，放疗化疗，各种恶性肿瘤、糖尿病、AIDS等可诱发曲霉病。

♦曲霉可侵犯许多部位，呼吸系统曲霉病主要有三种：过敏型、曲霉球和肺炎。全身性曲霉病多发生败血症，危及生命。

♦曲霉产生黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素与原发性肝癌有关。

♦黄曲霉、寄生曲霉、棕曲霉、杂色曲霉等主要以所产毒素而致病。

微生物特性

菌丝：有隔，多细胞性，有分枝足细胞（接触培养基的部分，厚壁而膨大）

分生孢子梗：从足细胞直立

顶囊：孢子梗顶端膨大，半球形或椭圆形

小梗：顶囊上，辐射状，一层或二层杆状

分生孢子：小梗顶端，成串，球形或柱状，黄、蓝、棕黑

分生孢子头：菊花样的头状结构（顶囊，小梗，分生孢子）菌落：绒毛状或絮状开始为白色，后菌种不同颜色不同

繁殖：多数：无性少数：有性

1、烟曲霉（A. fumigatus）

烟曲霉广泛分布于自然界，在禽舍的地面、垫草、用具及空气中经常可分离出其孢子。

孢子对外界理化因素的作用有较强的抵抗力，煮沸5min，可被杀死；

一般消毒液要经1~3h才能杀死孢子。对一般的抗生素均不敏感，

制霉菌素、两性霉素B、灰黄霉素及碘化钾对本菌有抑制作用。

♦烟曲霉菌是曲霉菌属致病性最强的霉菌。

主要引起家禽的曲霉性肺炎及呼吸器官组织炎症，并形成肉芽肿结节。也可感染哺乳动物和人。在混合感染病例中，除烟曲霉外，亦可见黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、青霉菌及毛霉菌。本菌引起的霉菌病,世界各国均有报道。

本菌在感染组织的过程中，还产生一种蛋白质毒素，可导致动物组织发生痉挛、麻痹，直至死亡。

毒素的提取物对家兔、豚鼠、小鼠和鸡有毒性，兔和犬尤为敏感，但鸽却有抵抗力，而鹤对本菌感染十分敏感。微生物检验

♦迸行微生物学检查时要采取病料，如肺部结节、鼻分泌物、痰液或病损处刮取物，进行切片或压片，镜检，在

高倍镜下观察，可见分隔菌丝、分生孢子梗及孢子等结构。

♦必要时进行分离培养，有鉴别意义的主要特征是：顶囊由分生孢子梗逐渐膨大而形成，状如烧瓶，小梗着生于顶囊的上半部，小梗单层，小梗和分生孢子链按与分生孢子梗平行的方向升起，菌落呈暗绿色至黑褐色。2、黄曲霉（A. flavus）

菌落：黄色

顶囊：球形或近球形

小梗：双层，第一层长，布满顶囊表面，放射状

孢子：球形或梨形，有小棘，成链排列

黄曲霉毒素(Aflatoxin，简称AFT或AF)

♦黄曲霉菌中有30%~60%的菌株产生毒素，而寄生曲霉菌几乎都能产生黄曲霉毒素。

♦该毒素常见于霉变的花生、玉米等谷物，在鱼粉、肉制品、咸干鱼、奶和肝脏中也可发现。

黄曲霉毒素对多种动物呈现毒性作用，但不同动物的敏感性不同，鸭、兔、猫、猪、犬较敏感，猴、豚鼠、小鼠、羊敏感性较低。

♦根据黄曲霉毒素的毒性作用，可将中毒分为三类，即急性或亚急性、慢性、致癌性。

毒素检验

♦在各种黄曲霉毒素中，B1的毒性和致癌性最强，其次是G1。

♦黄曲霉污染物中，最常见的是黄曲霉毒素Bl，其含量最高。Ml是B1的代谢产物，用含黄曲霉毒素B1的饲料喂牛，奶牛可分泌M1入牛奶，危害人类健康。

♦美国食品药品管理局(FDA)对牛奶中的Ml检测含量控制<0.5mg/kg，而欧盟则为< 0.05mg/kg。

♦毒素检测从可疑饲料提取毒素，饲喂l日龄鸭，可见肝坏死、出血及胆管上皮增生等。

3、杂色曲霉（ A. versicolor）

♦分生孢子头呈粗糙的半球形、放射状,

♦分生孢子梗无色或微黄、壁厚、光滑

♦顶囊半椭圆形至半球形，顶囊生有双层小梗。

♦分生孢子为球形、有小刺，呈链状

杂色曲霉素

♦由杂色曲霉产生，是化学结构相似的一类毒素，其中杂色曲霉素Ⅳa为重要的一种，呈淡黄色针状结晶。

♦杂色曲霉素具有急性、慢性毒性及致癌性，主要损害肝、肾。

微生物检验

(1)直接显微镜检查

♦取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子。

(2)抗原检测用竞争性ELISA测定病人血清中曲霉抗原。