微生物学：综合性实验 细菌感染性腹泻的诊断

纸片间中心距离＞24mm 纸片中心离平板边缘＞15mm 纸片一旦与平板接触,不得再移动
选择抗菌药物
1.根据染色性: G-菌
β-内酰胺类抗生素: 头孢×三、四代；单环类；拉氧头 孢√；碳青霉烯类。√
广谱抗生素：喹酮类√；磺胺类√；四环素类√ 其他：氯霉×素类；氨基×糖苷类（庆大霉素）
2.考虑耐药性 G-菌细胞壁特点(教材P13) 周浆间隙含多种水解酶 肠杆菌科细菌 易产生β-内酰胺酶、AmpC酶 3.患者的因素
病例二由A2 A4 B2 B4四组同学接诊
【病例二】患者,女,25岁。发热6天入院,食欲不 振、乏力、腹胀,查体:T 38.1℃,肝脾略肿大。血 常规WBC无变化;粪检见少量脓细胞和白细胞。 血培养阴性,取血清做肥达试验 TO1:80,TH1:80, PA1:40, PB:1:40。
问题： 3. 按照病程发展,患者还可能出现哪些临床症状?
(氧化酶 -, 触酶 +) 系列生化 集试验 敏感试验
鉴定试验
第四天
确证报告
实验内容及操作（第一天）
1. 细菌的分离培养
(1)材料：模拟粪便标本每组1支(A1.A3.B1.B3 为大肠埃希菌、A2.A4.B2.B4为伤寒沙门菌)； SS平板1个/组、MAC平板1个/组 (2)操作:用分区划线法把标本接种到培养基上
问题： 3. 在等待实验室结果期间,要如何治疗患儿?
病例一由A1 A3 B1 B3四组同学接诊
【病例一】
病程: 经补液和补电解质,物理降温(或服用退 热药),作用肠黏膜保护剂等治疗后,患儿急性 症状有所好转,此时实验室危急值报告:“镜下 查见革兰阴性杆菌”
问题： 4. 根据实验室初步报告,可选择哪类抗菌药物治 疗?用药过程中主要考虑哪种耐药机制的产生？
病例二由A2 A4 B2 B4四组同学接诊
【病例二】 病程：入院第二天中午,病人T39.5℃,P88/分, R28/分;右胸前皮肤有数个淡红色皮疹,压之退色; 肝肋下1.5cm,剑突下1cm,脾肋下1cm。危急值报 告:“镜下查见革兰阴性杆菌”,粪便培养显示两种 无色菌落,一种无色半透明,另一种中心有黑色
KIA
MIU
连续划线越密越好
病例一由A1 A3 B1 B3四组同学接诊
【病例一】3岁男孩,因腹痛、腹泻(7次/日)、呕 吐(1次),伴发热就诊,查体:T 38.5℃,P100次/分, 粪便稀液状、有腥臭。血常规:WBC12.7×109/L ,N 89.8%;粪常规:镜检见WBC 2+,潜血试验阳性。
问题： 4. 根据实验室初步报告,可选择哪类抗菌药物治 疗?用药过程中主要考虑哪种耐药机制的产生？
实验内容及操作（第三天）
一、初步鉴定试验结果观察
1.KIA：斜面: 乳糖发酵？ 红色为不发酵产碱(K)
葡萄糖发酵？
黄色为发Fra Baidu bibliotek产酸(A)
底层 有无气裂？(有为葡糖发酵产气)
产H2S？(有黑色的产H2S)
大肠埃希菌: A/A,气++,H2S-
沙门菌属:
K/A 气± H2S +
实验内容及操作（第三天）
一、初步鉴定试验结果观察
2.MIU：观察顺序动力(M)→尿素酶(U)→吲哚(I)
云雾状,M+ 全管玫红色+ 滴试剂2滴, 交界
记录顺序M→I→U
面试剂变红色为+
大肠埃希菌:+ + - 沙门菌属:+ - -
2.临床常见致腹泻病原菌的形态结构观察
霍乱弧菌(“鱼群样”排列)、沙门菌(周鞭毛)、铜 绿假单胞菌、产气荚膜梭菌、炭疽杆菌、白喉杆 菌(异染颗粒)
烧环冷却 后再划2区
1区
2区
3区 4区
实验内容及操作（第二天）
一、 细菌的菌落特征
SS
MAC
病例一 红色不透明的菌落 红色不透明的菌落
(发酵乳糖), 中等大 (发酵乳糖), 中等大
问题： 1. 根据实验室初步检查结果,该患者拟诊断为什 么病?依据是什么? 2. 为进一步确诊,仍需做哪些实验室检查?采集 什么标本送检?
粪便 分离培养 第一天
（SS、MAC）
37 ℃ 18~24h G染色 初步报告
第二天 可疑菌落
纯培养及初步鉴定试验
（KIA、MIU）
第三天
定科试验 肠杆菌科 血清凝 抗菌药物
二、进一步鉴定
氧化酶试验：接种环取KIA上细菌，刮于滤纸片上， 滴加氧化酶试剂于菌上，菌苔不变色为阴性(-) 触酶试验: 接种环取KIA上细菌于载玻片上, 滴过氧
化氢于菌上, 产气泡者阳性(+)
实验内容及操作（第三天）
三、抗菌药物敏感试验(K-B法)
棉签在NS沾湿→于KIA上取少量菌→均匀涂布于平板 →镊子取试验药物纸片贴于平板上→37℃ 培养18h
小,S型
小,S型
病例二 无色半透明菌落(不 无色半透明菌落(不
发酵乳糖),中心黑 发酵乳糖),中心黑
色(产H2S),较小,S 色(产H2S),较小,S
型
型
实验内容及操作（第二天） 二、初步鉴定试验
1.G染色:每组染一片 NS1滴+菌落少量→涂片→干燥→固定→染色
镜检
2.纯培养及复合生化试验 (1)KIA:接种针取菌,先穿刺再划线 (2)MIU:接种针取菌,穿刺法
综合性实验
细菌感染性腹泻的 病原学诊断
实验目的
掌握细菌感染性腹泻的诊断程序和方法 （临床诊断和实验室诊断）。
熟悉细菌感染性腹泻病原学标本的采集 和送检。
了解临床标本微生物学检验的检验流程 和检验方法。
病例一由A1 A3 B1 B3四组同学接诊
【病例一】3岁男孩,因腹痛、腹泻(7次/日)、呕 吐(1次),伴发热就诊,查体:T 38.5℃,P100次/分, 粪便稀液状、有腥臭。血常规:WBC12.7×109/L ,N 89.8%;粪常规:镜检见WBC 2+,潜血试验阳性。
问题： 1. 根据实验室初步检查结果,该患儿能否诊断为 细菌感染性腹泻?依据是什么? 2. 为进一步确诊,仍需做哪些实验室检查?采集 什么标本送检?
病例二由A2 A4 B2 B4四组同学接诊
【病例二】患者,女,25岁。发热6天入院,食欲不 振、乏力、腹胀,查体:T 38.1℃,肝脾略肿大。血 常规WBC无变化;粪检见少量脓细胞和白细胞。 血培养阴性,取血清做肥达试验 TO1:80,TH1:80, PA1:40, PB:1:40。
【病例一】
病程: 对患儿继续补液和补电解质,口服肠黏 膜保护剂，加以环丙沙星治疗后,患儿日腹泻 次数减少，水样便转为稀便。