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试剂二：NaOH－SDS液
NaOH的作用是促使DNA变性，SDS是表面活性剂，除去蛋白质。
样品研磨需要充分研磨，组织结块、样品成团将极大的影响裂解液渗透和生物膜体系崩解，影响核酸溶出。
总RNA提取技术细节及原因：
RNase控制问题，裂解液处理完毕后的实验步骤必须严格无酶操作。原因在于样品经裂解处理离心后各步骤中样品不再处于RNase抑制剂保护下，如果在后续步骤使用的耗材中沾染RNase将对总量本就较少的RNA造成严重破坏。
对策：
OD230一般是多糖类物质（碳水化合物主要吸收峰），
4、电泳-胶孔发亮
对策：
胶孔发亮多是蛋白和多酚物质污染
1、上样量与裂解体系
上样量是DNA提取的经典问题，无论用什么方法，首先要解决的就是上样量问题，不同的上样量对应不同的试剂体系，上样量过多或多少都会影响裂解的效果。以GNT-B02的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒为例，标准上样量为200ul，上下浮动不超过100ul，搭配的裂解液用量为400ul，有些老师由于实验要求，需要大体积的上样量，这在实际操作中，就需要对磁珠法的操作流程进行改良，一般的改良思路是按比例放大裂解体系；但有些实验的上样量达到毫升以上，这种情况下，就不能再简单的放大裂解体系了，需要先用红细胞裂解液对样品进行处理，将上样体积浓缩后，再进行磁珠法操作流程的优化。
2、OD260/280不理想
对策：
OD260通常是表征核酸的，核酸因为共轭环光吸收发生在240~290nm之间，最大吸收峰一般在260nm左右，单链RNA，双链DNA，环状DNA等吸光略有差别，基因组DNA OD260/280应为1.8左右，偏高则意味着RNA污染；偏低意味着蛋白/多酚污染。
3பைடு நூலகம்OD260/230不理想
核酸提取大体上主要分三大类：基因组DNA、总RNA和质粒
一、常见提取方法/原理：
基因组DNA：CTAB法、SDS法等
以去污剂CTAB/SDS等处理样品，破坏细胞膜结构，裂解细胞（裂解液通常含EDTA抑制DNase活性，Tris-Cl缓冲防止核酸被破坏，同时具有较高NaCl浓度，维持核酸溶解性）；加氯仿去除蛋白复合物（有机相），离心分离，回收水相（内含核酸）；异丙醇沉淀DNA，离心回收絮状DNA，梯度乙醇清洗，自然挥干，溶解DNA于TEbuffer。
通过修改试剂配方，优化试剂配置，可以改善磁珠的结团现象，但是该工作较为复杂，需要对各种参数进行调整。不过对于磁吸速度较慢的磁珠，结团后能明显提高磁吸速度，提高实验效率，只要磁珠在洗脱步骤能够分散，而且结果也在标准范围内，磁珠结团并不会影响整体效果。
3、得率低
得率是影响下游实验的最直接因素，根据我们的经验，200ul的全血，得率一般在3ug以上，用GNT-B02的试剂盒，能稳定在5ug以上，有些老师的实验结果只有2ug左右，甚至更低，这就需要重点排查两个环节，一是裂解环节，二是洗脱环节，若是裂解环节的问题，往往会是在结合的时候磁珠不结团，或在洗涤的时候上清液颜色为深黄色或红色，这种情况下，更换全新的裂解液，并且严格按照SOP操作是较为效率的解决办法
总RNA：TRIzol法（苯酚+硫氰化胍）、异硫氰酸胍盐两步法、CTAB-PVP法等
与DNA提取的原理步骤基本一致。TRIzol/CTAB等buffer裂解细胞，解聚染色体，释放核酸；氯仿除蛋白，离心后回收水性酚相/水相（RNA提取必须是酸性酚或低盐水相）；异丙醇沉淀，乙醇清洗，挥干，溶解于TEbuffer。
质粒提取：碱裂解法
溶液I，50 mM葡萄糖/ 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；（作用于重悬细胞、保护DNA）；
溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；（碱裂解）
溶液III，3 M醋酸钾/ 2 M醋酸；（中和碱液，SDS钠离子取代，促蛋白-基因复合物沉淀）
样品研磨尽量迅速。原因在于通过减少样品细胞裂解的时间，使含RNase抑制剂的裂解液尽快浸润样品，阻遏样品内源RNase活性。
质粒抽提技术细节及原因：
溶液II加入进行样品碱解时，动作必须轻缓。原因在于NaOH+SDS的组合主要目标在于迅速裂解样品，但强碱存在的情况下，基因组DNA极有可能断裂，如果裂解过程中过于粗放，基因组DNA将断裂进入裂解液，无法伴随蛋白沉淀而从体系中清除。
洗脱环节的问题，经常表现为结团的磁珠未被打散，可考虑加大震荡力度，或用吸头吹吸、搅拌。有些老师在得率较低的时候，喜欢加大上样量，这可能会适得其反：过大的上样量会抑制裂解液的裂解能力。
总RNA提取常见问题与对策：
质粒提取常见问题与对策：
1.提质粒主要用到三种试剂：
试剂一：溶菌液
其中的溶菌酶的作用是水解细胞壁，葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，维持渗透压，EDTA作螯合金属离子用。
三、核酸提取常见问题及对策
基因组DNA提取常见问题与对策：
1、DNA得率低
对策：
“巧妇难为无米之炊”，因此收集尽可能多的样本是首选方法！！！
在样品量无法增加的情况下，裂解液务必与样品充分混匀，各种试剂千万不要过期（PS：节俭是美德，但要不坏事才是美德）
若全程操作规范，得率尚不理想，则可以考虑对抽提DNA过程进行重复。
从上清回收质粒
二、核酸提取技术细节注意点：
基因组DNA提取技术细节及原因：
CTAB/SDS裂解液配制中必须注意pH值，酸碱度严重影响提取所得核酸的质量。原因在于DNA提取与RNA提取所用的裂解液理论上是可以通用的，但DNA与RNA在溶解性差异上的表现在高盐状态下DNA-蛋白复合物可溶，低盐状态下RNA-蛋白复合物可溶；而在苯酚溶液中，酸性酚下RNA可溶，碱性酚下DNA可溶；故必须注意buffer酸碱和盐平衡问题。
2、磁珠结团
磁珠结团是经常遇到的现象，是由磁珠本身特性和磁珠所处试剂环境两方面造成的，有些磁珠不仅在全血DNA提取过程中会结团，其他的样本也同样会结团，有些老师在初次遇到这种现象的时候会感觉不适应，其实结团现象可以用来提前预判实验结果，结团往往是吸附了大量核酸，如果哪次实验没有结团，本次的实验结果或许会不太好，不过也不能一概而论，杂质太多也是引起磁珠结团的原因。
NaOH的作用是促使DNA变性，SDS是表面活性剂，除去蛋白质。
样品研磨需要充分研磨，组织结块、样品成团将极大的影响裂解液渗透和生物膜体系崩解，影响核酸溶出。
总RNA提取技术细节及原因：
RNase控制问题，裂解液处理完毕后的实验步骤必须严格无酶操作。原因在于样品经裂解处理离心后各步骤中样品不再处于RNase抑制剂保护下，如果在后续步骤使用的耗材中沾染RNase将对总量本就较少的RNA造成严重破坏。
对策：
OD230一般是多糖类物质（碳水化合物主要吸收峰），
4、电泳-胶孔发亮
对策：
胶孔发亮多是蛋白和多酚物质污染
1、上样量与裂解体系
上样量是DNA提取的经典问题，无论用什么方法，首先要解决的就是上样量问题，不同的上样量对应不同的试剂体系，上样量过多或多少都会影响裂解的效果。以GNT-B02的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒为例，标准上样量为200ul，上下浮动不超过100ul，搭配的裂解液用量为400ul，有些老师由于实验要求，需要大体积的上样量，这在实际操作中，就需要对磁珠法的操作流程进行改良，一般的改良思路是按比例放大裂解体系；但有些实验的上样量达到毫升以上，这种情况下，就不能再简单的放大裂解体系了，需要先用红细胞裂解液对样品进行处理，将上样体积浓缩后，再进行磁珠法操作流程的优化。
2、OD260/280不理想
对策：
OD260通常是表征核酸的，核酸因为共轭环光吸收发生在240~290nm之间，最大吸收峰一般在260nm左右，单链RNA，双链DNA，环状DNA等吸光略有差别，基因组DNA OD260/280应为1.8左右，偏高则意味着RNA污染；偏低意味着蛋白/多酚污染。
3பைடு நூலகம்OD260/230不理想
核酸提取大体上主要分三大类：基因组DNA、总RNA和质粒
一、常见提取方法/原理：
基因组DNA：CTAB法、SDS法等
以去污剂CTAB/SDS等处理样品，破坏细胞膜结构，裂解细胞（裂解液通常含EDTA抑制DNase活性，Tris-Cl缓冲防止核酸被破坏，同时具有较高NaCl浓度，维持核酸溶解性）；加氯仿去除蛋白复合物（有机相），离心分离，回收水相（内含核酸）；异丙醇沉淀DNA，离心回收絮状DNA，梯度乙醇清洗，自然挥干，溶解DNA于TEbuffer。
通过修改试剂配方，优化试剂配置，可以改善磁珠的结团现象，但是该工作较为复杂，需要对各种参数进行调整。不过对于磁吸速度较慢的磁珠，结团后能明显提高磁吸速度，提高实验效率，只要磁珠在洗脱步骤能够分散，而且结果也在标准范围内，磁珠结团并不会影响整体效果。
3、得率低
得率是影响下游实验的最直接因素，根据我们的经验，200ul的全血，得率一般在3ug以上，用GNT-B02的试剂盒，能稳定在5ug以上，有些老师的实验结果只有2ug左右，甚至更低，这就需要重点排查两个环节，一是裂解环节，二是洗脱环节，若是裂解环节的问题，往往会是在结合的时候磁珠不结团，或在洗涤的时候上清液颜色为深黄色或红色，这种情况下，更换全新的裂解液，并且严格按照SOP操作是较为效率的解决办法
总RNA：TRIzol法（苯酚+硫氰化胍）、异硫氰酸胍盐两步法、CTAB-PVP法等
与DNA提取的原理步骤基本一致。TRIzol/CTAB等buffer裂解细胞，解聚染色体，释放核酸；氯仿除蛋白，离心后回收水性酚相/水相（RNA提取必须是酸性酚或低盐水相）；异丙醇沉淀，乙醇清洗，挥干，溶解于TEbuffer。
质粒提取：碱裂解法
溶液I，50 mM葡萄糖/ 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；（作用于重悬细胞、保护DNA）；
溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；（碱裂解）
溶液III，3 M醋酸钾/ 2 M醋酸；（中和碱液，SDS钠离子取代，促蛋白-基因复合物沉淀）
样品研磨尽量迅速。原因在于通过减少样品细胞裂解的时间，使含RNase抑制剂的裂解液尽快浸润样品，阻遏样品内源RNase活性。
质粒抽提技术细节及原因：
溶液II加入进行样品碱解时，动作必须轻缓。原因在于NaOH+SDS的组合主要目标在于迅速裂解样品，但强碱存在的情况下，基因组DNA极有可能断裂，如果裂解过程中过于粗放，基因组DNA将断裂进入裂解液，无法伴随蛋白沉淀而从体系中清除。
洗脱环节的问题，经常表现为结团的磁珠未被打散，可考虑加大震荡力度，或用吸头吹吸、搅拌。有些老师在得率较低的时候，喜欢加大上样量，这可能会适得其反：过大的上样量会抑制裂解液的裂解能力。
总RNA提取常见问题与对策：
质粒提取常见问题与对策：
1.提质粒主要用到三种试剂：
试剂一：溶菌液
其中的溶菌酶的作用是水解细胞壁，葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，维持渗透压，EDTA作螯合金属离子用。
三、核酸提取常见问题及对策
基因组DNA提取常见问题与对策：
1、DNA得率低
对策：
“巧妇难为无米之炊”，因此收集尽可能多的样本是首选方法！！！
在样品量无法增加的情况下，裂解液务必与样品充分混匀，各种试剂千万不要过期（PS：节俭是美德，但要不坏事才是美德）
若全程操作规范，得率尚不理想，则可以考虑对抽提DNA过程进行重复。
从上清回收质粒
二、核酸提取技术细节注意点：
基因组DNA提取技术细节及原因：
CTAB/SDS裂解液配制中必须注意pH值，酸碱度严重影响提取所得核酸的质量。原因在于DNA提取与RNA提取所用的裂解液理论上是可以通用的，但DNA与RNA在溶解性差异上的表现在高盐状态下DNA-蛋白复合物可溶，低盐状态下RNA-蛋白复合物可溶；而在苯酚溶液中，酸性酚下RNA可溶，碱性酚下DNA可溶；故必须注意buffer酸碱和盐平衡问题。
2、磁珠结团
磁珠结团是经常遇到的现象，是由磁珠本身特性和磁珠所处试剂环境两方面造成的，有些磁珠不仅在全血DNA提取过程中会结团，其他的样本也同样会结团，有些老师在初次遇到这种现象的时候会感觉不适应，其实结团现象可以用来提前预判实验结果，结团往往是吸附了大量核酸，如果哪次实验没有结团，本次的实验结果或许会不太好，不过也不能一概而论，杂质太多也是引起磁珠结团的原因。