人正常垂体组织全长cDNA文库的构建及初步鉴定

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ＣＡＩＹｉｎｇ。ＵＡＮＧｕｉｌｎｇＨＨ —ｉ
（ａｊｎＨｕｎｓｉａ，ａｊｎＮｅｒｓｒｅｙＩｓｉｕｅ，ａｊｎ３０６Ｃｉａ）ＴｉｎｉａｈＵＨｏｐｔｌＴｉｎｉｕｏｕｇｒｎｔｔｔＴｉｎｉ０００，ｈｎ
关键词：体；因文库；转录聚合酶链反应；垂基逆ＲＮＡ；ＤＮＡ，补互
Ｃｏｓｒｃｉｎａｄｐｒｌｍｉｒｄｎｔｆｃｔｏｆｆｌ—ｅｇｈｃｎｔｕｔｏｎｅｉｎａｙｉｅｉｉａｉｎｏｕｌｌｎｔＤＮＡｌｂａｙｏｍａｔｉａｙｔｓｕｉｒｒｆｈｕｎｐｉｕｔｒｉｓｅ
ｌＤ－ＰＣＲ扩增得到全长双链ｃＤＮＡ，Ｓｌ酶切及ｃ经ｉｌＤＮＡ分级分离后，隆入改造的ｐｌｅｃｉｔＳ载体，到原克Ｂｕｓｒｐ玎Ｋ得
始文库。将质粒转化入宿主茵ＤＨ５，初步鉴定文库的质量。结果ａ以文库的总库容为１０克隆．组率１ｘ重９．５，入片段平均长度＞１０ｐｃＮＡ的完整性比率为４．。结论此法构建的人正常垂体组织全长３４插００ｂ，Ｄ４４ｃＮＡ文库符合建库要求，作为进一步研究与人垂体疾病相关基因的可靠材料。Ｄ可
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｖＴｏｃｎｔｕｔ３ｆｌｌｎｔＤＮＡｉｒｒｆｈｍａｏｍａｉｕｔｒｉｓｅｓｒｃ：ｊｃｉｅｏｓｒｃｕｌｅｇｈｃｌａｙｏｕｎｎｒｌｐｔｉａｙｔｓｕ．ｂ
基础研究．
人正常垂体组织全长ｃＤＮＡ文库的构建及初步鉴定
蔡英，慧玲黄
摘要：应用ＳＡ术构建人正常垂体组织的全长ｃＡ文库。方法用ＴＩｏ试剂提取组织总Ｒ目的ＭＲＦ技ＤＮＲｚｌＮＡ，利用逆转录酶的末端转移酶活性，先加入Ｓ预ＭＡＲ引物，Ｃｓ Ⅲ／ＰＲ引物的引导下合成ｃＡ第一链，Ｔ在Ｄ３ＣＤＮ
ｚｍｅＴｈＤＮＡｒｇｎｓｗｅｅｃｌｃｅｎｉａｅｔｄｆｅＢｌｅｃｉｔＩＫｅｔｒａ— ｙ．ｅｃｆａｍｅｔｒｏｌｔｄａｄｌｔｄｗｉｈｍｏｉｉｄｐｕｓｒｐＳｖｃｏｆｅｇ１
ｔｒｆａｔｏｎｔｏｈｒｇｈｓｎ４０ｃｕｍｎ．ｅｆｌｌｎｇｔＤＮＡｉａｙｗａｏｔｕｃｅｕｃｓ — ｅｒｃｉａｉｎｔｏｕｐｉ一０ｏｌＴｈｕｌｅ — ｈｃｌｂｒｒｓｃｎｓｒｔｄｓｃｅｓｆｌｎｄｉｅｉｉｄａｔｒｔａｆｒｉｇｐｌｓｉｏＤＨ一ａｂａｔｒａｕｌｙａｄｎｔｆｅｆｅｒｎｓｏｍｎａｍｄｔ５ｃｅｉ．ＲｅｕｔＴｈｅｌｂａｙｃｎｔｉｅｓｌｓｉｒｒｏａｎｄ
１× １０。ｃｏｓｎｌｎｅ，ｉｗｈｉｈ９３ｃ．４５ｗｅｅｅｏｂｎａｔｒｒｃｍｉｎ．Ｔｈｅａｅａｓｚｏｆｎｓｒｅｆａｖｒｇｅｉｅｉｅｔｄｒｇｍｅｔａｎｗｓ
ｍｏｅｔａ０ｒｈｎ１０ｂｐ，ｈｅｒｔｆｆｌ—ｅｇｔＤＮＡａ４４．ｎｃｕｓｏＴｈＤＮＡｉａｙｉｌ０ｔａｅｏｕｌｌｎｈｃｗｓ４．Ｃｏｌｉｎｅｃｌｂｒｒｓｅ —
华老年心腑血戗：杂志２病０１０年１２月第１２卷第１２期
ＣｉＪＧｅｉｔＨｅｒＢａｅｓｌｓＤｃ０１，ｏ２Ｎｏ１ｈｎｒｒａ！ｒｉＶｓｅＤｉｅＶｌ．．２ａｎ百度文库，２０１
・１９・ｌ２
ＭｅｈｄＴｈｅｔａＮＡａｘｔａｔｄｆｒｓｎｔｅｉｉｇｔｉｓｔａｆｃＮＡｓｎｇＳＭＡＲＴｔｏｓｏｔｌＲｗｓｅｒｃｅｏｙｈｓｚｎｈｅｆｒｔｓｒｎｄｏＤｕｉｔｃｎｉｕｅＴｈｅｄｂｌｔａｄｃＮＡａｍｐｉｉｄｂｙＬＤ— ｅｈｑ．ｏｕｅｓｒｎＤｗｓａｌｆｅＰＣＲｎｄｄｇｅｔｄｂｙＳｆＩｒｓｒｃｉｎｅ — ａｉｓｅｉｅｔｉｔｏｎ