人正常垂体组织全长cDNA文库的构建及初步鉴定
预备党员转正党小组党支部鉴定意见
第二页 党小组意见： ***同志在成为预备党员的第一个季度，表现良好，学习积极主动，工作认真负责，思想认识也有了一定提高，不过该同志仍有一些不足之处，如理论学习还不够深入，运用所学理论指导实践还不够。希望***同志以后要更加严格要求自己，积极克服这些不足。 党支部意见： ***被批准为预备党员之后，能从各个方面严格要求自己，思想认识有了提高，工作主动性增强，并在平时工作生活中表现良好。讨论认为，***同志本人的自我总结实事求是，的确是其表现的真实反映，与党小组考察情况、与党内外反映情况是一致的。希望该同志再接再励，二季度有新的进步。 第四页 小组意见： 半年来，***同志能积极结合时事学习最新的理论成果，在思想上进一步向党组织靠拢。其学习努力，工作认真，特别是在支部会上指出他的不足之处后，该同志非常重视，努力改进，显示了知错即改的决心。并取得了良好效果，在同事中有积极的影响。不足之处是对党的理论知识掌握的还不够全面、系统，理论联系实际的能力还有所欠缺。希望***同志戒骄戒躁，继续努力，不断完善自我。 支部意见： ***同志半年来能够严格要求自己，积极参加党组织活动，认真学习各种理论成果，并向周围同事及群众做好党的宣传工作，对党组织分配的工作任务能够按时完成。同时该同志具有较强的集体观念和团队精神，具有为集体服务，为集体争光的自觉意识，在日常生活中能够从身边小事做起，做出了很好的模范带头作用。希望该同志以后能够不断地学习以充实自己，完善自己，并进一步提高精神追求。 第六页 小组意见： ***同志自入党以来，积极认真加强理论学习，其政治立场坚定，思想始终与党中央保持一致。工作上认真负责，任劳任怨，能够圆满完成组织分配的各项任务，在同事中树立了良好形象，体现了党员先锋模范作用。希望该同志以后能再接再厉，以更严格标准要求自己，争取做得更好。 支部意见： ***同志重视政治理论学习和党的方针、政策的学习，其政治思想觉悟有较大提高。该同志对所负责的工作责任心强，成绩比较突出，另外该同志能够团结党内外同志，开展批评与自我批评，并注意改进自己的工作作风，起到了一个共产党员应有的作用。但该同志仍存在
支部对党员民主评议意见 鉴定
支部对党员民主评议意见(鉴定) 该同志认真学习贯彻十六大、十六届三中全会精神，认真贯彻执行党的路线、方针、政策，特别是在保持共产党员先进性教育活动以来，作为单位支部的“一把手”，能做到主动带头，学习培训扎实，紧密联系实际，坚持边学边改，转变思想，提高依法行政水平和工作效率，切实推动环保工作，做到先进性教育和业务工作“两不误、双促进”。 一、主要成绩 1、政治思想方面。拥护党的领导,坚持四项基本原则，认真学习邓小平理论、“三个代表”重要思想，学习十六大精神、以及有关保持共产党员先进性教育活动学习辅导材料，认真贯彻执行党的路线方针政策，做到讲学习、讲政治、讲正气，牢固党的宗旨，坚持以党员的标准严格要求自己，在思想上、行动上与党中央保持一致，发挥党员干部表率作用。 2、工作方面。忠于职守、兢兢业业、真抓实干，以开拓创新、与时俱进的精神，依法行政，切实做好环保工作。为我县招商引项目做好服务工作，积极参与我县综合决策。关心群众，深入基层，认真为群众和基层排忧解难，努力解决环境问题。 3、廉洁方面。遵纪守法、严于律已、清正廉洁。认真学习贯彻两个条例，坚决贯彻执行上级关于廉洁自律的各规定，按原则办事，主持公道。加强思想道德修养，加强党风廉政建设的自觉性，自觉抑制享乐主义、拜金主义和个人主义，做到拒腐蚀、永不沾。 二、主要存在问题 1、学习主动性、自觉性不高。表现在一是缺乏全面系统地学习；二是被动地去学习。 2、工作作风不够扎实。表现在一是深入基层调查研究少；二是对同志关心不够。 3、服务意识有待进一步加强。一是群众有关的来信来访批办的多，直接落实的少，解释得多，办理得少；二是没有主动为排污单位提供排污技术上的指导。 三、今后的努力方向
教师考核民主评议与组织鉴定意见参考用语
1.该同志拥护中国共产党的领导，忠诚并献身于党和人民的教育事业，政治方向明确， 教育思想端正，与时俱进，主动汲取新知识、新信息，不断完善知识结构，掌握运用现代化教学的能力。 2.该同志忠诚党的教育事业，爱岗敬业、严谨治学、为人师表，处处严格要求自己。拥 护中国共产党的领导，积极参加单位组织的各项政治学习，努力提高自己的思想政治觉悟，严格遵守单位的各项规章制度。? 3.该同志具有强烈的事业心和高度的责任感，思想政治素质较高，具有较强的指导、管 理、协调能力，能做到廉洁自律，工作勤勤恳恳、勇于开拓、锐意创新，积极参与教研，努力提高自身的业务素质，取得了显着的工作效果。? 4.该同志思想政治素质高，具有较强的协调能力，工作作风好，业务能力强，工作认真 负责，工作实效突出，能做到廉洁自律，宽以待人。 5.该同志有良好的道德修养和坚定的政治方向。在各项政治学习活动中能认真学习，认 真分析总结自身情况，将理论应用到实践中。在平时工作生活中，严格遵守单位的各项规章制度，能和同事们和睦相处，互相帮助。 ? 6.该同志综合素质好，业务能力强，学习能力强。能比较全面地掌握业务知识和我单位 重点工作，有较强的沟通能力，工作认真负责，能够胜任自身的本职工作。? 7.该同志工作认真负责，积极主动，业务能力扎实，业务水平优秀，胜任岗位工作，对 待所负责工作进行有效指导，并提出建设性意见，有一定的领导能力，做事踏实、行为规范、与其他同事相处融洽。 8.该同志工作认真刻苦，热情周到，专业技能水平优秀，爱岗敬业、乐于助人，与同事 相处融洽，服从整体安排，对本职工作兢兢业业，锐意进取，起榜样作用，为我们树立良好形象。 9.该同志严格遵守学校各项规章制度，认真学习党的教育方针政策，在教育中勇于创新， 学生德育思想教育到位，课堂管理完善，服从领导安排，圆满完成各项教学任务，本年度考核为合格。 ??
cDNA文库构建原理以及技术路线
CDNA文库 1. CDNA文库中重组DNA片断得原始供体来源与细胞中表达出得mRNA,将某一特定类型细胞表达得mrna经反转录酶催化形成与之互补得CDNA，重组克隆后得到得CDNA文库有各自不同得适合范围。CDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组得表达状态以及表达基因得功能鉴定方面具有特殊得优势，从而使它在个体发育，细胞分化，细胞周期调控 2. CDNA文库得质量 （1）文库的代表性 CDNA文库的代表性是指文库中包含得重组CDNA分子是否能完整地反映出来原细胞中表达地全部信息（即mrna种类），它是体现文库质量地最重要标本。文库地库容量，它是指构建建出地原始CDNA文库中包含地独立地重组子克隆数。具备完全好代表性地CDNA文库需要满足地库容量取决与来源细胞中表达出地基因序列地总复杂程度。具体来就是来源细胞中表达出地mrna种类和每种MRNA序列地拷贝数 N=ln(1-p)/ln(1-n/t)，P为文库中包含细胞中任何一种mrna序列信息地概率，通常设为99％，N为文库中P概率出现细胞中任何一种mrna序列理论上应具有地最少重组克隆数，n为细胞中最稀少地mrna序列地拷贝数，t为细胞中表达出地所有mrna地总拷贝数，以人类细胞为列，人类基因组携带地遗传基因总数约为100000种，具体到某一特定类型地细胞中，表达出地基因种类仅为基因组全部基因地15％。因此对于巨大部分地人类细胞，每个细胞内具体表达地mrna种类约为15000种，全体mrna序列地总拷贝约为500000个，而细胞中稀少地mrna种类地拷贝数平均为8个。因此，用人类细胞来构建CDNA文库时候，要以99％概率保证文库中包含有细胞表达地任何一种mrna地序列信息，构建出地原始CDNA文库理论上应具有地最少独立克隆数为 N=ln(1_99%)/ln(1-8/500000)=2.9*10(5) 一个具有完好代表性地CDNA文库至少具有10（6）以上的库容量 3．MRNA是由5‘端非编码区，中间地编码序列和3’端非翻译区。非翻译区地序列特征对基因地表达具有重要地调控作用，其中编码产生地蛋白质产物都具有在结构上相对独立地结构域，存在与同一分子上地结构域对体现出蛋白产物在细胞中所行使地生物学功能。因此要从CDNA文库中分离获得目的基因完整地序列信息和功能信息，要求文库中地重组CDNA片断应尽可能完整获得目的基因结构 4．构建文库的载体系统 （1）入噬菌体载体系统是在CDNA文库构建中最早使用地载体系统，在载体本身地设计方面已经相当成熟，其主要优点是插入片断地装载容量大，适合与全长CDNA地克隆。重组子经专门地体外包装系统包装成有感染力地噬菌体颗粒，对宿主大肠杆菌地转染效率高，通常1ugCNDA构建出地CDNA文库，转染宿主菌后，都可以得到10（6）－10（7）以上地原始库容量，同时对重组克隆是否含有CDNA文库地插入片断地实际情况，有较好地质量控制指标，因此用这类载体地系统构建地CDNA文库质量高，代表性好，此外这类载体系统构建出地CDNA文库以重组噬菌体颗粒形式存在，这些重组噬菌体颗粒地感染活性在4度环境比较稳定，非常适合长期保存，但是可以采用地文库筛选方法很有限，文库中地CDNA 片断在宿主细胞无法功能性表达。 （2）质粒载体系统 可以功能性筛选：利用基因在体内体现其生物学活性所依据地生化基础，从文库中分离鉴定
党支部鉴定意见-党员自我鉴定
党支部鉴定意见-党员自我鉴定 文章简介：《范文》 该同志自被列为发展对象以来,能够更加严格要求自己,积极参加党组织活动,认真学习各项政策,并向群众做好 《党支部鉴定意见范文》 文章《党支部鉴定意见范文》正文开始该同志自被列为发展对象以来,能够更加严格要求自己,积极参加党组织活动,认真学习各项政策,并向群众做好宣传工作,对党组织分配的工作能够按时完成,履行好一个党员的义务。 该同志在思想上政治上能够同党中央保持一致,坚持四项基本原则,执行党的路线、方针、政策。入党动机端正。工作积极,有较强的工作能力,在工作和学习中较好地发挥了先锋模范作用。 该同志具有极强的集体观念和团队精神,具有为集体服务,为集体争光的自觉意识,在日常生活中能够从身边小事做起。具有勤俭节约的优良作风,不追求物质享受,注意个人文明素质,养成良好的生活习惯,不断地充实自己,完善自己,不断提高精神追求。作出了很好的模范带头作用。 该同志在学习马克思主义理论方面的自觉性有了较大提高,积极提高自身的马克思主义理论素养,能够在复杂多变的国际环境中,在深化改革、扩大开放、大力发展市场经济的新形式下,能够坚定共-产主义思想和社会主义信念。坚持理论联系实际,学以致用。
姓名 张冲 性别 男 出生年月 1962.10 入党时间 1990.04 工作时间 1981.10 文化程度 大学 现任职务 组织员 党支部评议意见 张冲同志理想信念坚定，党性观念强，自觉地在政治上与党中央保持一致，政治素质较高，思想作风正派，办事公道，言行一致。事业心、责任感强，在较短的时间里能比较熟悉党务人劳方面业务。工作认真踏实，对交给的任务能不折不扣地完成。有吃苦精神，经常主动加班加点，任劳任怨。平时谦和，待人诚恳，在这次保持先进性教育活动中态度端正，积极参加学习，严于解剖自己，提出的整改措施比较到位。在公司(局)先进性教育办公室工作，既负责联络员工作，
党支部鉴定意见
党支部鉴定意见 党支部鉴定意见1、该同志政治立场坚定，具有较高的思想觉悟，在平时生活、工作学习中积极主动，树立了良好的形象，表现突出，体现了党员的模范带头作用。2、**成为预备党员的第一个季度，表现很好。特别是将其列入党员现任区之后，工作热情高、干劲大，几乎每班都早下井、晚升井，一季度他所在的责任区实现了安全运转，并在全矿文明生产检查中得到好评。思想认识也有一定提高，小组会上敢于发言，所提的打扫卫生工具承包到人头的建议也被采纳，并在管理中有了明显效果。过去说话太直、不易被人接受的毛病已有改进，还主动找人征求意见，改善了同志关系。3、**被批准为预备党员之后，能从各个方面严格要求自己，思想认识有了提高，工作主动性增强，并在党员责任区活动中表现很好。特别是党支部指出他说话不注意方式的问题后，非常重视，努力改进，显示了知错即改的决心。支委会讨论认为，**本人的自我总结实事求是，的确是其表现的真实反映，与党小组考察情况、与党内外反映情况是一致的。希望再接再励，二季度有新的进步。4、该同志思想进步，积极参加政治学习活动，对党的基础理论掌握比较好，按时回报自己的思想和工作，积极参加党小组的各种活动，但需要努力养成谨慎的习惯。5、该同志学习刻苦，办事效率高，成绩优异，团结同学，勇于创新，严于律己，咱言行上能与党的要求保持一致，勇于改正自己的缺点，弥补不知足，得到大家的一致好评。6、该同志在思想上政治上能够同党中央保持一致，坚持四项基本原则，执行党的路线、方针、政策。入党动机端正。工作积极，有较强的工作能力，在工作和学习中较好地发挥了先锋模范作用。7、该同志在学习马克思主义理论方面的自觉性有了较大提高，积极提高自身的马克思主义理论素养，能够在复杂多变的国际环境中，在深化改革、扩大开放、大力发展市场经济的新形式下，能够坚定共产主义思想和社会主义信念。坚持理论联系实际，学以致用。8、该同志在生活上勤俭节约，乐于助人；在工作中踏实努力，能很好的完成组织上交予的各项工作，任劳任怨，积极进取，勇于创新；为人正直，严于律己。很好的体现了党员的模范带头作用。9、年月日召开支委会，3名委员全部参加。支委会根据**一年预备期间的表现和党小组对其考察的情况，认为其从思想、工作、学习、生活等方面都能够严格要求自己，尤其是对群众所提出的缺点和不足认识深刻并迅速改正。综合认为，**已经符合党员标准，并在实际工作中发挥了党员的先锋模范作用。同意**按期转正，提请支部大会讨论通过。10、根据预备党员**在延长预备期满后向党支部写出的自我总结和党小组意见，以及两个入党介绍人考察汇报的情况和党内外群众反馈的意见，年月日召开支委会，讨论认为：**
简述cDNA文库构建的方法
简述cDNＡ文库构建的方法 1．１ mＲNA纯化 构建一个cＤNＡ文库的第一步是分离在某一给定的组织或细胞类型表达的mＲＮA。ｍRNA仅占细胞总RNＡ的1%～5％,因而需要另外的纯化技术来富集ｍＲNA。从细胞总RＮA中分离mRＮＡ是根据实际上所有真核细胞mＲNA 3’端有一长的伸展的腺嘌呤核苷，这个序列被称为ｐolｙ(A)尾巴，是mRNＡ分子特有的而其他主要RNA 没有，pｏly(Ａ)尾通常有足够的长度因而能与人工合成的互补的寡脱氧胸苷酸(oligo(ｄT)）杂交。正是这种特性使得mRＮA从ＲNＡ分子的混合物中分离出来。 方法有三种： ·寡脱氧胸苷酸亲和层析:即分离mRＮA的标准方法，将一个寡脱氧胸苷酸（12~１8碱基）连接到纤维素的亲和层析柱法，总ＲNA混合物上样后,mRNA与寡脱氧胸苷酸退火。非pｏlｙ(A)ＲNA不结合并很容易从柱子洗去。用低盐缓冲液洗柱，己结合的mRNA很快洗脱出来。 ·溶液杂交:本方案也用寡脱氧胸苷酸－纤维素，但不用层析柱,而是将基质直接加到总ＲNA溶液中。退火和洗涤步骤通过离心含有ＲＮA沉淀的基质在溶液中完成。 ·生物素标记寡脱氧胸苷酸和链霉亲和素包被磁性球珠:本方案中，一个生物素标记的寡脱氧胸苷酸酸引物在溶液中与总ＲNA退火,然后加入以链霉亲和素包被的磁性球珠,用磁分离器从大量溶液中分离球珠－mRNA复全体。移去磁分离器，加入洗脱缓冲液,并重复磁性分离步骤。在无盐的状态下,寡脱氧胸苷酸引物从mRNA上解离。 １.2ｃＤＮA的合成与克隆 1.2.1 cＤNA第一条链的合成 所有合成cＤNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶（反转录酶）来催化反应，有两个关键的因素，一个是ｍＲNA模板,另一个反转录酶。 目前商业化的反转录酶主要有两种:一种是禽源反转录酶（reｖeｒse tranｓcripｔａse)，另一种是鼠源反转录酶。两种酶都无3’-5’外切酶活性，但禽源反转录酶有很强的RNAase H酶活性,鼠源的具有相对较弱的RNＡａｓeH酶活性。RＮAasｅ H酶活性在反应中起负作用,可降解mRＮA分子末端的polｙ(Ａ)序列和cDNA-ＲNA杂交分子中的RＮA。因此一般反转录过程都是采用鼠源反转录酶。ＧIBCO-BＲL公司出品一种鼠源反转录酶，称为SUPERＳCRIPT反转录酶,缺少C-末端18０个氨基酸,完全去除了其 ＲNAａｓe H酶活性，保持完整的DＮＡ聚合酶活性。 1.2．２ cDNA第二条链的合成 合成cDNA第二条链的传统方法是“自身引导法”,即将第一条链合成过种中形成的cDNA/ＲNＡ杂交分子变性,降解RNA，则单链cＤＮA分子的3’末端自身环化,形成发卡结构。以此为引物,在DNA聚合酶作用下合成第二条链。所得到的产物是双链ｃDNA，在其相当于ｍRＮA５’端的地方有一发卡闭环结构。然后用单链特异性的SI核酸酶消化该环,得到可供克隆的双链cDＮA分子。由于SI酶的消化反应难以控制，不可避免地导致对应于mＲNＡ5’的序列出现缺失和重排,并造成克隆效率偏低,故该法基本上己被一些改进的方法所代替。主要的改进之处是在合成第一条链的反应体系中加入4ｍmol/L的焦磷酸钠,以抑制发卡结构的形成,这样便避免了使用SI 核酸酶。然后再用其他方法合成第二条链的引物。 1.2．3 cDNA的克隆 dscDNA（双链cDNA)合成后，将此ＤＮA与载体(质粒或噬菌体)组成重组分子,然后转化到受体菌中进行扩增。cDNA文库可用质粒载体或噬菌体载体构建。质粒文库
党组织鉴定意见范文
党组织鉴定意见范文 本文汇集了党组织鉴定意见范文5篇，欢迎大家阅读。 党组织鉴定意见范文一 支部大会于XXX年X月X日讨论了XXX同志的转正申请。经支部大会讨论，认为XXX同志在预备期间，能按照党员标准严格要求自己，重视政治理论学习，注意改进工作作风，工作勤奋，勇于创新，成绩显著，发挥了一个共产党员应有的作用。 支部大会应到会有表决权的党员X人，实到会X人(X人事假)。大会采取举手的方式进行表决。表决结果：同意XXX同志按期转为正式党员(请事假的XXX同志会前也以书面形式向支部表示同意XXX同志按期转正)。 大会认为XXX同志已具备党员条件，同意按期转为正式党员。 党组织鉴定意见范文二 XXX同志，在XXX年XX期间，积极要求进步，曾三次主动向党组织和培养联系人汇报自己的思想和工作，主动征得党组织和培养联系人的帮助和指导，进步比较快。在本职工作岗位上能比较好地完成各项工作和任务，尤其在确保生产安全的过程中，顶风战酷暑和其他同志一道精检细修，多次防止事故，消除隐患，受到上级的表扬和奖励，为安全生产做出突出贡献。 不足之处：理论学习还不够刻苦，运用所学理论指导实践还不够。 希望加强理论学习，增强运用理论指导实践的意识，做到会说能
党小组长：XXX XXXX年XX月XX日 党组织鉴定意见范文三 XXX同志，在学习工作和生活中，能努力按照一名共产党员的标准严格要求自己，向党组织靠拢，积极表现，认真学习党的先进思想理论与方针政策，用先进的理论指导实践，同时，也应该意识到自身存在的不足，群众批评与自我批评相结合，找出自身的缺点，多多团结身边的同志，争取共同进步。 党支部书记：XXX XXXX年XX月XX日 党组织鉴定意见范文四 ×××同志在党员预备期间，能认真学习马列主义、毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想，自觉接受党组织的考察教育。特别是从大学毕业进入公安队伍工作后，在政治思想上更加严格要求自己，能坚持正确的政治立场，努力学习政治理论和业务知识，积极参加各项政治活动，认真履行党员义务，坚持党性锻炼;在工作中，能刻苦钻研业务，认真参加公安各项技能培训，做到不怕苦、不怕累，带伤坚持训练，遵守各项规章制度，努力完成领导交给的各项安全保卫工作和执勤任务，扎实做好本职工作，把树立共产主义远大理想与做好当前的工作结合起来。平时能与周围同志搞好团结，谦虚待人，作风正派，勇于改正存在的不足，能以合格党员的标准严格要求自
单位鉴定意见范文
单位鉴定意见范文 当你工作有了出色的表现时你就想往更高的方向发展了，这时候用人单位的意见很重要，下面是我整理的关于单位对个人工作鉴定意见，欢迎大家收藏! 工作鉴定意见一： ***同志于***年***月抽调到***工作，在其工作的一年里，能协助组长、配合同事完成组内和办公室领导交办的所有工作，做到了学习勤奋上进、工作踏实肯干、作风正派严谨，在各方面都取得较好的成绩。现对其鉴定如下：政治坚定。该同志能以马列主义、邓小平理论、"三个代表"等重要思想为指导，认真贯彻落实科学发展观，坚决执行党的各项方针政策，政治立场坚定。 学习勤奋。该同志能把学习作为自我完善和提高的重要途径，坚持经常学习政策理论文献和业务知识，做到勤学善思、学以致用，同时，在工作中善于总结好的做法，对涉及灾后重建的法规政策能熟练掌握。 工作务实。该同志在工作中能坚持用心谋事、务实干事，做到勤勤恳恳、任劳任怨。该同志作为重建组的工作人员，始终能做到服从领导及办公室主任的安排，认真履行岗位职责，与同事经常加班加点勤奋工作，较好地完成了各项工作任务。一是积极协助办公室主任做好办公室日常事务处理、重建组与相关单位之间的协调工作，推进了工作整理合力的形成。如：协助恢复重建项目单位办理开工前的相关手续、布置重建组工作会议事务安排和需各恢复重建项目单位通力合作的重点工作等。二是发挥自身较丰富的基层工作经历和工作经验，积极向领导谏言献策，为办公室内部管理、重建组工作加快推进尽了一份力量。 成绩斐然。该同志在抽调期间，用心草拟重建组及其办公室文件和相关材料，协助同事完成领导讲话、工作总结等其他材料的草拟撰写工作。一年里，该同志草拟、协助草拟的文件就达30余个，材料数10个。同时协助办公室主任完成重建资料的领取与发放、报表的收集与上报工作。按照重建组在每个阶段的要求和组长的安排，能同组内同志深入恢复重建项目单位巡视检查，推进了全县政权基础设施灾后重建工作的开展。 作风正派。该同志能坚持严于律己，做到生活正派、情趣健康;注重团结友好，做到真诚待人、主动热情;恪守规章制度，做到按章办事、谨慎认真。
cDNA文库的构建方法与原理
c D N A文库的构建方法与原理 蛋白质是细胞的功能分子：它们构成结构和调控分子，动力和泵蛋白，酶和受体。然而，如果仅用传统的生化方法确定某一特异蛋白的全序列，或制备足够量的蛋白进行操作和鉴定都是使人厌烦且昂贵的步骤。基因克隆和遗传工程对生化领域有很大贡献。如果只限于将基因组DNA作为材料来源，由于其中仅2%被认为可能编码蛋白质，那么确定蛋白质序列仍然是令人生畏的工作。其他部分包括结构和调节因子、内含子、非编译外显子和重复及功能未知的非编码序列。如果分析仅局限在编码序列，那么确定基因产物序列所需的努力就会大大的降低。因此分子生物学主要原则之一是mRNA作为蛋白质合成的模板，所以mRNA是确定蛋白质序列的理想底物。不幸的是，现有通用的克隆载体没有一个能容纳mRNA分子作为插入片段。因此，产生表达序列文库的一个基本步骤是将mRNA分子转变成双链DNA。来自mRNA分子的DNA拷贝称cDNA，由来自细胞或组织mRNA种类的DNA拷贝组成的文库称为cDNA文库。 1．基本原理 cDNA（Complementary DNA）是以mRNA为模板，在反转录酶作用下合成的互补DNA，它的顺序可代表mRNA序列。cDNA文库的构建是指将cDNA与克隆载体DNA体外重组，然后去转化克隆载体DNA 的宿主细胞，从而得到一群含重组DNA的细菌或噬菌体克隆的过程。这些序列来自并代表一定组织或细胞类型特定发育或分化阶段的整个mRNA群体。其过程可概括为：（1）通过反转录酶将各种mRNA转变在cDNA；（2）cDNA与合适的载体重组并导入到宿主中。 cDNA基因文库具有许多优点和特殊用途： 首先，cDNA克隆以mRNA为起始材料，这对于有些RNA病毒来说非常适用，因为它们的增殖并不经过DNA中间体，研究这样的生物有机体，cDNA克隆是唯一可行的方法。 第二，cDNA基因文库的筛选简单易行，恰当选择mRNA的来源，使所构建的cDNA基因文库中，某一特定序列的克隆达到很高的比例，简化了筛选特定基因序列克隆的工作量。 第三，每一个cDNA克隆都含有一种mRNA序列，在选择中出现假阳性几率比较低，从阳性杂交信号选择出来的阳性克隆一般含有目的基因序列。 第四，cDNA克隆的另一用途是用于基因序列的测定，读码框（ORF）的界定，只有通过对mRNA5’核苷酸序列才能获得。 2．基本方法 2．1 mRNA纯化 构建一个cDNA文库的第一步是分离在某一给定的组织或细胞类型表达的mRNA。mRNA仅占细胞总RNA的1%～5%，因而需要另外的纯化技术来富集mRNA。从细胞总RNA中分离mRNA是根据实际上所有真核细胞mRNA 3’端有一长的伸展的腺嘌呤核苷，这个序列被称为poly(A)尾巴，是mRNA分子特有的而其他主要RNA没有，poly(A)尾通常有足够的长度因而能与人工合成的互补的寡脱氧胸苷酸（oligo(dT)）杂交。正是这种特性使得mRNA从RNA分子的混合物中分离出来。方法有三种： ·寡脱氧胸苷酸亲和层析：即分离mRNA的标准方法，将一个寡脱氧胸苷酸（12~18碱基）连接到纤维素的亲和层析柱法，总RNA混合物上样后，mRNA与寡脱氧胸苷酸退火。非poly(A)RNA不结合并很容易从柱子洗去。用低盐缓冲液洗柱，己结合的mRNA很快洗脱出来。 ·溶液杂交：本方案也用寡脱氧胸苷酸－纤维素，但不用层析柱，而是将基质直接加到总RNA溶液中。退火和洗涤步骤通过离心含有RNA沉淀的基质在溶液中完成。 ·生物素标记寡脱氧胸苷酸和链霉亲和素包被磁性球珠：本方案中，一个生物素标记的寡脱氧胸苷酸酸引物在溶液中与总RNA退火，然后加入以链霉亲和素包被的磁性球珠，用磁分离器从大量溶液中分离球珠－mRNA复全体。移去磁分离器，加入洗脱缓冲液，并重复磁性分离步骤。在无盐的状态下，寡脱氧胸苷酸引物从mRNA上解离。 2.2 cDNA的合成与克隆
党支部意见_评语
《党支部意见》 1、该同志能认真学习三个代表重要思想和科学发展观，用心参加单位及其他部门组织的 政治学习活动，思想和行动上与党中央持续一致。工作用心主动，勤恳踏实，能圆满完成单位领导和上级部门交办的各项任务。团结同事，艰苦朴素，群众基础好。今后要进一步加强思想理论修养和工作潜力，争取更大进步。 2、***同志在各方面都有了较大的进步，思想上，切实贯彻理论联系实际的原则，提高 对社会发展中重大现实问题的认识，从思想理论方面真正自觉拥护共产党的大政方针和路线政策，进一步树立马克思主义世界观人生观价值观，坚守共产党员的理想信念，自觉进行思想修养，在端正自身入党动机的同时，还努力向周围同事和群众宣传党的路线方针，用心参加党组织的学习活动，进一步增强党员意识，树立起马克思主义的世界观，人生观和价值观。工作生活中，能够联系群众，本着全心全意为人民服务的宗旨，热心助人，在工作中刻苦攻关，有明确的目标，在群众中树立了良好的榜样。但是，***同志还就应意识到自身存在的不足，要将 群众批评与自我批评相结合，找出自身的缺点，多多团结身边的同志，争取共同进步。 3、经过一年的培养，某某同志在各方面提高较快，能够主动参加政治理论学习，认真自学，写好理论文章，工作用心主动，热情很高，工作节奏较快，端正了以前拖拉的缺点，同志之间友好相处，关系融洽。组织认为该同志已经具备一个党员条件，党支部能够列为发展对象。 4、该同志近段学习刻苦，成绩优异能团结同学，在行为上与党员的要求持续一致，严于 律己，但需注意细心谨慎的习惯养成，继续努力！ 5、**同志思想上用心向党组织靠拢，自主认真学习党的基本理论，关心时政，有较强的 政治敏感度。学习上，**同学态度认真严谨，在工作中，**同学为系宣传部部长，他工作认真，乐于助人，用心组织参加各项活动，有较强的群众荣誉感与职责心。 6、该同志学习刻苦思想进步，能与党员的标准与要求持续一致，用心参加党小组的各种 活动，但在自信心方面有所欠缺，望继续进步。 7、经过党组织的培养教育，***同志共产主义信念坚定，拥护党的路线方针政策，热爱 党热爱社会主义，有必须的政治理论水平，对党的基本知识有必须了解。能够继续加强理论方面的学习，在实践中不断完善与超越自我，在管理岗位上能够热情地管理车间各项事宜，为车间事物尽职尽责。如今，该车间已经成为一支团结上进，具有高度凝聚力，成员综合素质普遍较高的队伍。该同志在学习生活中注重改正自己的缺点，并虚心理解群众对其的监督。在看到自己的改正缺点，正在进步的同时，还就应注意到，自己做的距离一名优秀党员还远远不够，在维管段这个大群众中还应进一步争取同事的更大的帮忙，以更好地发挥自身的表率作用政治理论基础不够扎实理论联系实际的潜力还有待进一步提高。 8、经过半年时间的考察，同志较前段有更大的进步。这段时间内，同志认真参加党支部 的各项活动，用心学习三个代表重要思想和社会主义和谐社会的深刻内涵，应用先进的方法论指导实践，在理论上不断充实完善自己。在学习生活中，用一名共产党员的标准严格要求自己，团结同学，热爱生活，全面学习平衡提高综合全方面，在同学当中树立了良好的典范。透过认真考察和全面衡量，我们认为同志已具备共产党员条件并愿意介绍同志加入中国共产党。 9、该同志思想进步，勇于创新，学习努力，在行为上能与党的要求持续一致，严于律己，但应注意提高办事速度，进一步完善自己。
cDNA文库构建的具体步骤及详细说明
cDNA文库构建的具体步骤及详细说明 cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA 经反转录形成的cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。 经典cDNA 文库构建的基本原理是用Oligo(dT) 作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。 其基本步骤包括：（1）mRNA的提纯获取高质量的mRNA是构建高质量的cDNA 文库的关键步骤之一。（2）cDNA第一条链的合成。（3）cDNA第二条链的合成。（4）双链cDNA的修饰。（5）双链cDNA的分子克隆。（6）cDNA文库的扩增。（7）cDNA文库鉴定评价。 一、Superscipt II—RT合成第一链 1. 在一RNase-free的0.2 ml PCR管中加入x ul mRNA(大约500 ng) 、1 ul Xho I Primer(1.4 ug/ul) (5’GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAGTTTTTTTTTTTTTTTTTT…3’)、11-x ul RNase-free water （大于500 ng mRNA 分n管(500 ng/tube)合成第一链，第一链合成完毕后将n管合成一管进行第二链合成。）。
2. 混匀后，70℃反应10分钟。 3. 反应完成后，立刻将反应体系置于冰上5 min。 4. 稍微离心一下，顺序加入以下试剂： （1）4 ul 5×first strand buffer （2）2 ul 0.1 M DTT （3）1 ul 10 mM dNTP(自己配制) 5. 混匀，稍微离心反应物之后，42℃放置2分钟。 6. 反应完成,趁热加入1 ul Superscipt II—RT，混匀。 7. 42℃反应50分钟，然后70℃，15分钟灭活反转录酶。 二、cDNA第二链的合成
党组织鉴定意见范文
党组织鉴定意见范文 1、党员因调动工作、参军、学习、外出务工经商和其他原因离开原所在地或单位，以及外出时间在六个月以上，且地点比较固定的，经党组织同意，应按规定转移党员正式组织关系(即开写党员组织关系先容信)。 2、在全国范围内可以直接相互转移党组织关系的党组织 (1)县级及县级以上地方各级党委组织部;(2)中心直属机关各部分、中心国家机关各部分及中心一级人民团体的机关党委;(3)盛自治区、直辖市直属机关党委(工委)组织部;(4)盛自治区、直辖市各工作委员会组织部(处);(5)新疆生产建设兵团政治部组织部、各农业师(治理局)政治部(处);(6)中国人民解放智囊(旅)或相当于师以上政治部或其组织部分;(7)铁路系统的各铁路局党委组织部。 3、复转军人党员组织关系转递的基本原则 已落实了工作单位的，应及时将党员组织关系转到所往单位党组织。因某些原因尚未落实工作的，可将党员组织关系转到父母、配偶居住地的街道、乡镇党组织。党员在落实单位过程中将人事关系和档案材料等暂保存在县以上政府人事(民政)部分所属复转安置部分的，这些部分的党组织如具备治理条件并经同级地方党委同意，也可以接收这些党员的组织关系，并根据不同情况，组织这些党员过组织生活。 4、大中专毕业生党员组织关系转递的基本原则 已经落实了工作单位的，应将党员组织关系及时转到所往单位党组织。党员在落实工作单位过程中将人事关系和档案材料等暂保存在县以上政府人事(劳动)部分所属的人才交流服务机构的，这些机构的党组织如具备条件并经同级地方党委同意，可以接收这部分党员的组织关系，并根据不同情况，组织这些党员过组织生活。对因某些原因，一时还不能落实工作单位的，可将其党员组织关系转移到本人或父母居住地的街道、乡镇党组织。 5、离退休干部、职工党员组织关系转递的原则 (1)离退休干部的组织关系一般保存在原单位，可单独组建党支部。(2)就地安置的退休工人和退职干部、工人党员，其党的组织关系一般应转到居住地区街道(或村)党组织。(3)易地安置的离退休、退职干部、工人党员，其党的组织关系应转移到接受安置地区街道、乡(镇)或村党组织。(4)离退休干部、工人党员因看
cDNA文库构建简易流程
1、紫茎泽兰第一链cDNA的合成 取2 u1提取的紫茎泽兰mRNA，加入适量的CDSIII primer和SMART IV Oligo寡 核苷酸以及其它相应试剂，在适当的条件下，经反转录酶进行反转录合成紫茎泽兰第一链cDNA. 2、LD-PCR合成紫茎泽兰第二链cDNA 取合成的紫茎泽兰第一链cDNA加入其它试剂，通过LD-PCR进行双链cDNA的合成3、紫茎泽兰双链cDNA的酶切及分离纯化 双链cDNA经蛋白酶K消化去除DNA聚合酶活性，经氯仿:异戊醇抽提，酒精沉淀后，用限制性内切酶sfi I进行酶切消化。酶切后，过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离纯化，以去除小的片段和杂质，依次收集16管，经1. 0%的琼脂糖凝胶电泳检测后，收集cDNA 含量最高的几管。 4、双链cDNA片段的克隆和体外包装 分级分离纯化的双链cDNA，定向克隆到试剂盒提供的经sfi I酶切的去磷酸化的入λTripIEx2载体上，在载体量不变的前提下，设定了3个连接梯度反应，连接结束后，3个连接产物分别用Promega公司的Packagene Lambda DNA受Packaging System包装，体外包装条件按试剂盒说明进行。 5、文库的滴定与重组率检测 用常规方法检查文库的滴度。3个连接反应包装后，分别取1ul用1X Lambda dilution buffer按1:10稀释，稀释后的入噬菌体裂解物再分别取0. 5ul 加入到150ul预先过夜培养的XL1-BLue菌液，在37 C进行20min的吸附后，再加入到1. 5m1熔化的LB/MgSO4顶层软琼脂，迅速混匀倒到预热至37℃的平板上，快速摇动平板使顶层软琼脂分布均匀，顶层软琼脂凝固后在37℃培养箱中倒置培养，每相隔一段时间后，检查噬菌斑生长情况。根据长成的噬菌斑的数目进行文库的滴度计算，公式如下 : 文库的重组率则利用蓝白斑互选进行，在每1. 5m1的顶层琼脂加入50ul X-gal (20mg/ml) , 50ul IPTG (200mg/Ml)，待噬菌斑长成后，统计蓝白斑的数量，算出重组率。 6、cDNA的PCR快速鉴定 从平皿中直接挑取噬菌斑，用5' PCR primer和3' PCR primer分别进行PCR扩增检查插入片段的长度。 初步结果：按l : 10的比例稀释后滴定，过夜后统计噬菌斑数目并计算滴度。1号和2号连接反应的噬菌斑很少，滴度很低，而3号连接反应的滴度为2.47X106pfu/ml, 滴度很高，符合建库标准。所以3号连接反应的cDNA与载体的比例最理想，连接效率最高。 紫茎泽兰cDNA的PCR快速鉴定，随机挑取10个透明噬菌斑，PCR扩增均有大于500bp的插入片段，进一步说明已成功获得了紫茎泽兰cDNA重组噬菌体。
事业单位考核党组织鉴定
事业单位考核党组织鉴定 事业单位考核党组织鉴定是十分有权威性的评语，那么你怎么去写事业单位考核党组织鉴定呢?下面由本我精心整理的事业单位考核党组织鉴定，希望可以帮到你哦! 事业单位考核党组织鉴定评语 能够脚踏实地，潜心做事。能够把发展的激-情与务实的态度结合起来，做到开拓进取而不因循守旧，扎实工作而不图虚名，立足实际，从点滴做起，积跬步至千里，积小胜为大胜。 能够勇于开拓，大胆干事。能够迎难而上，以攻坚破难的勇气和魄力，把工作的着力点放到研究解决改革发展稳定中的重大问题上，放到研究解决群众生产生活中的紧迫问题上，有效破解改革发展中面临的难题。干部考核评语。 能够着眼长远，以战略思维和发展眼光分析客观事物、科学判断形势，把握时代要求，总揽发展全局。积极扩大经济总量，努力提升发展质量水平;既抓好当前发展，又加强环境保护，注重资源节约;能够坚持以经济建设为中心，努力加快经济社会协调发展，真正把各方面的积极性和创造性凝聚到推动集约发展、创新发展、协调发展、可持续发展、和-谐发展上来。 事业单位考核党组织鉴定意见 能够坚持以创新的观念和科学的战略推动发展。通过解放思想，更新观念，注重战略思维，坚持正确的发展定位和取向，以科学的发展思路、创造性的工作方针、扎实的工作举措、攻坚破难的工作方法，推动各项工作取得突破性进展。 能够以科学发展观统领经济社会发展全局，积极着眼促进经济社会全面协调可持续发展，不断增强本乡的综合竞争力。能够把提升软实力作为重要战略任务来抓，通过解放思想、创新观念，科学决策、提高效率，大力培育创业文化，激发人才活力。 能够坚持正确的政绩观，说实话、务实事、求实效，积极克服飘浮作风、浮躁情绪。努力做到不盲目攀比，不搞花架子，不急功近利。 事业单位考核党组织鉴定评价 能够面对新形势、新任务，大兴求真务实之风，埋头苦干，真抓实干，主
构建cDNA文库应注意的事项
构建全长cDNA文库时应当注意事项 构建全长cDNA文库分为噬菌体文库和质粒文库，二者大同小异。但都应当注意以下四个方面： 一、保证获得数量足够的高质量的起始RNA。 构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录，这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好，虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH的SMART 4的中级柱子要求纯化后的总mRNA量最好在0.05-0.5微克左右，这就要求起始总RNA量较多。虽然有的试剂盒声称少至几十个纳克的总RNA也可以构建cDNA文库，但这是针对材料极为稀缺者而言，但起始RNA太少还是会或多或少影响文库构建成功的风险和文库的代表性。至于RNA的质量，如果采用纯化总mRNA后反转录，则对总RNA的杂质方面要求稍松，但对RNA的完整性则一丝不苟，要求未降解。如果直接采用总RNA进行反转录，则对总RNA的质量要求非常高，不仅要求RNA相当完整而无降解，而且要求多酚、多糖、蛋白、盐、异硫氰酸胍等杂质少，最好是试剂盒抽提的。 二、反转录成功与否及反转录效率是关键中的关键。 这是构建cDNA文库中最贵的一步，也是核酸质变的一步，它将易降解的RNA变成了不易降解的cDNA。反转录不成功，说明一次文库方案的夭折。反转录效率不高表现在一是部分mRNA被反转录了，但还有相当一部分本该反转录的mRNA未被反转；二是只有少部分mRNA被反转录通了即达到帽子结构最近处，而很大一部分mRNA没有反转录完全，总的全长cDNA太少，这就难以构建好的全长cDNA文库。少量程度的mRNA降解或反转录不完全在SMART 4等试剂盒及手工方法构建中对文库的滴度影响不大，但对文库的全长性则有很大影响。Invitrogen公司基于去磷酸化、去帽、RNA接头连接后再反转录的新技术（可参考其GeneRacer说明书）从原理上是保证最终获得全长cDNA的最好方法，但对mRNA的完整性要求非常高，理论上讲必须是带有帽子结构和Poly A结构的全长mRNA且反转录完全，才能进入文库中。反转录完成后点样检测cDNA的浓度及分子量分布是很重要的。
支部鉴定意见
党支部鉴定意见/r/n 1. 该同志思想进步，积极参加政治学习活动，对党的基础理论掌握比较好，按时回报自己的思想和工作，积极参加党小组的各种活动，但需要努力养成谨慎的习惯。/r/n 2. 该同志学习刻苦，办事效率高，成绩优异，团结同学，勇于创新，严于律己，咱言行上能与党的要求保持一致，勇于改正自己的缺点，弥补不知足，得到大家的一致好评。/r/n 3. 该同志在生活上勤俭节约，乐于助人;在工作中踏实努力，能很好的完成组织上交予的各项工作，任劳任怨，积极进取，勇于创新;为人正直，严于律己。很好的体现了党员的模范带头作用。/r/n 4. 该同志政治立场坚定，具有较高的思想觉悟，在平时生活、工作学习中积极主动，树立了良好的形象，表现突出，体现了党员的模范带头作用。/r/n 支部转正意见：一直以来，该同志在思想、学习、生活、工作等各个方面表现非常优秀,能与党员的标准与要求保持相一致，积极参加党小组的各种活动，成绩优异团结同学，在言行上能以党的要求来要求自己，勇于改正自己的缺点。总体符合党员的标准，建议支部大会讨论其转正问题。/r/n 【相关文章】党支部鉴定意见/r/n 1、该同志积极参加政治学习，按时汇报自己的思想和工作，主动征求党内外意见，注意不断改进自己的工作。较好地完成组织交予的各项工作，得到大家的肯定和好评。/r/n 2、该同志在思想上不断提高自己，充实自己;在学习上勤奋刻苦，力争上游;在工作上任劳任怨，尽职尽责;生活上助人为乐，待人友善;得值得肯定。/r/n 3、该同志主动征得党组织和培养联系人的帮助和指导，进步较快;在学习工作和生活中，能努力按照一名共产党员的标准严格要求自己，表现积极。/r/n 4、该同志政治坚定、思想稳定;工作上勤奋努力，任劳任怨，能圆满完成组织上赋予的各项任务。平时为人正直、严于律已，树立了良好的个人形象。表现突出，体现了党员先锋模范作用。/r/n 支部党员大会意见：/r/n ***年*月*日召开支部党员大会，讨论了***同志的转正问题。该同志自***年*月*日入党以来，按照党员标准要求自己，重视政治理论和党的方针、政策的学习，注意改进自己的工作作风，政治思想觉悟有较大的提高。他对所负责的工作责任心强，在工作中能开动脑筋，出主意，想办法，团结非党同志一起努力完成任务，成绩比较突出，发挥了一个共产党员应有的作用。经过支部大会认真讨论，大家认为***同志已经具备了党员条件。本支部共有党员7人，到会 7人，其中有表决权的正式党员 5人，一致同意***同志按期转为正式党员。/r/n 支部对转正的意见：/r/n 我支部从思想、工作、学习、生活等各方面对***同志进行了全面、系统、认真的考察，一致认为该同志能按照一名共产党员的标准严格要求自己，发挥了共产党员的先锋模范作用，同意按期转为中共正式党员。
党支部对党员鉴定意见
党支部对党员鉴定意见 党支部对党员鉴定意见篇一**，女，汉族，中共党员，现年27岁，**人。20xx年6月毕业于**大学，20xx年年底考录为公务员并分配至**镇人民政府，其间借调**(**工作部门)工作。20xx年12月正调**县(**工作部门)工作。 思想上：认真学习，积极向上。该同志能认真学习马列主义、毛泽东思想、邓小平理论及三个代表重要思想;并认真学习贯彻党的xx大、xx届三中全会精神。站稳政治立场、严守政治纪律、牢记全心全意为人民服务的宗旨，做到思想上始终和党中央保持高度一致。 工作上：踏实勤恳，任劳任怨。虚心向领导和同事们学习先进的工作方法和工作经验，能够创造性地开展工作，具有强烈的事业心和责任感。乡镇工作期间，尊重每一位村组干部和群众，认真有礼地接待办事群众，同时积极深入群众中开展工作。在分管领导和村组干部的大力支持和帮助下，顺利完成了三个行政村、7个村民小组参加农村新合信息核对、住房解困工程入户调查等工作。(**工作部门)工作期间，努力干好办公室工作，主动加强与相关部门的沟通协调，使各项工作步入了良性发展轨道;并在充分做好办公室工作的同时积极配合好其他工作人员的各项工作。 学习上：能够抓住点滴时间，汲取精神食粮，丰富自我，提高为人民服务的本领。一是积极参加单位组织集中学习和自学，做到了学前有准备、学中勤思考、学后见成效;二是
积极主动加强业务理论知识学习，提高驾驭整体工作的能力;三是学习与实践相结合，认真总结经验教训并及时改进，将工作不断地引向深入。 工作中存在的问题和不足：工作能力和办事效率还有待提高，工作经验还需在今后的工作中丰富。 党支部对党员鉴定意见篇二该同志在乡镇工作十多年，在多个部门工作过，不管在哪里，工作认认真真负责，能够创造性地开展工作，工作思路清晰、有很强的组织协调能力、凡镇党委和政府交办的工作任务都能出色完成。 该同志工作中能够以身作则，坚持做不迟到，不早退，以饱满的热情投入到工作中去。 该同志20xx年之前在镇党政办担任办公室主任一职，在其任职期间确保了党委政府的上传下达和各项中心工作的贯彻落实，同时其也具有较好的文字功底，能够主动深入调研，作风求真务实，由其负责撰写的党委政府的工作报告、年度总结、会议纪要、领导讲话、综合汇报及其他公文等文字材料均能从镇情出发，也符合领导意图。20xx年7月任镇劳动保障事务所后能尽快地进入角色，创造性地开展工作，新农保工作有了极大的突破，新农保参保率达到了预期目标。目前其负责的陶瓷项目道路征地工作也有了很大的推进。 该同志工作中坚持做到依法办事，秉公办事，讲政治，顾大局，识整体，讲团结;思想上进，作风正派，坚持做到自重、自省、自警、自励;时刻做到遵纪守法，廉洁自律，