实验二 培养基及胰酶的配制精品PPT课件

结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
3. 用NaHCO3 调pH至8.0。
4. 小滤器（实验一中已湿热灭菌过的）过滤除菌至小瓶内,(不 能装的过满,防止冷冻后瓶爆裂)、检查滤器、贴好标签、-20℃ 保存。每人过滤20 mL 。
（注意：1.拧紧滤器2.注射器吸液体3.注射器插好滤器4.对着烧 杯慢推压针芯看是否漏5.如不漏对小瓶过滤。6.滤器放在小瓶 瓶口上，取下针头再吸液体，反复多次，滤完。7.检查滤器滤 膜是否完好。）
Leabharlann Baidu 消化液
0.1-0.25% 胰酶 0.02% EDTA pH=8.0
二、实验目的
1. 掌握DMEM培养基、胰酶的配制 2. 学习针头滤器的使用方法
三、实验步骤
(一） DMEM培养基的配制
1. 三袋DMEM粉末用双蒸水溶解（先加入2/3DDW，再用DDW 冲洗袋子）、磁力搅拌器搅拌半小时以上。
2. 加入1.2g/袋 NaHCO3定容3000 mL、搅拌30分钟。
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
实验二 、培养基及胰酶的配制
一、实验原理：
（一）细胞培养的气体环境与pH环境 ( 二）细胞培养的营养条件
1. 培养用液 培养液（基）、缓冲液、平衡盐溶液、血清及消
化液、pH调节液和抗生素等。
血清的主要成分及含量
培养基的主要种类（基础培养基） (1) MEM (低限量基础培养基，minimum eessential media): (2) DMEM(Dulbecco’s modified Eagle medium) (3) IMDM(Iscove’s modified Dulbecco’s medium) (4) RPMI1640 (5) HamF10、 HamF12 (6) McCoy’s 5A
每人在超净台内用大滤器过滤、分装、写好种类、名字。（留 取少许做污染测试放CO2培养箱72小时）
3. 每8个人为一组，每人过滤90 mL，其余的过滤到100 mL试剂 瓶中，每瓶90mL培养基备用。
使用前在超净台内加入56℃灭活好的FCS 10 mL，使血清 的终浓度为10%，4℃保存待用。
（二）胰酶的配制
1. 取实验一中准备好的D–Hanks 液 200 mL （8人一组）
2. 称取0. 5g胰酶（0.25%）放入研磨器中并加入少量D – Hanks液成为糊状，研磨200次，再加入D –Hanks液终体积为 200ml，合并胰酶，加0.02%EDTA助消化，磁力搅拌使之完 全溶解。（8人一组，分别研磨，再合并）