科研项目申报书

项目名称探讨替米沙坦对人肾小管上皮细胞尿酸盐转运蛋白hUA表达的影响及其作用机制

一、立题依据（包括国内外研究现状分析）

近年来研究表明，血尿酸升高与肾脏疾病、动脉粥样硬化程度及冠心病、心肌梗死、原发性高血压、脑卒中、总心血管事件的发生率、死亡率和总死亡率等呈独立相关性，不依赖于一些常见的心血管危险因素及肾损伤指标。

尿酸排除减少或生成增加可导致高尿酸血症，其中90%是因为尿酸排泄减少所致。人体的尿酸约三分之二经肾脏排泄。原发性高尿酸血症主要由于近段肾小管上尿酸盐运转蛋白异常所致，属多基因遗传缺陷。

由于尿酸盐为极性分子，不能自由通过细胞膜，因此，其在近曲小管的重吸收和分泌过程依赖于离子通道，当中起主导作用的即是尿酸盐运转蛋白。近年来，运用生理、分子生物学和细胞生物等多种技术研究肾脏尿酸盐的运转，现已明确有4种尿酸盐转运蛋白参与人近曲肾小管对尿酸盐的转运,即生电型的尿酸盐转运体(human urat transporter, hUAT)、电中性的尿酸盐/阴离子交换体(human urate anion transporter 1, hURAT1)、有机阴离子转运体( human organic anion transporter,hOAT1)和hOAT3。其中hUAT主要参与肾近曲小管对尿酸盐的分泌, hURAT1主要参与肾近曲小管对尿酸盐的重吸收, hOAT1和hOAT3与管周细胞对尿酸盐的摄取有关。研究发现hUAT蛋白通道对亚酸盐的选择性比其他离子高，是一个生电性的高选择性的盐酸盐单向运转通道，在肾脏上皮细胞中起到重要的运转盐酸盐的作用。而hUAT活性降

低和(或)hURAT1的活性升高以及hOAT1和hOAT3活性的改变可成为高尿酸血症的重要发病机制。高浓度的尿酸对肾脏组织有着直接的致病作用。

我们前期实验发现，大鼠肾小管上皮细胞存在UAT的表达（见附图1），替米沙坦具有降尿酸的作用，可能是通过升高UAT的表达来完成的（见附图2-4），但并非所有ARB类药物均具有降尿酸作用。国外有研究表明替米沙坦是药物结构比较独特的ARB，除能阻滞肾素一血管紧张素系统外，还具有部分过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR )激动剂的功能，并能调控血糖、脂肪生成及代谢、胰岛素敏感性相关基因以及抑制炎症因子产生。且替米沙坦的此种作用并不依赖于血管紧张素Ⅱ受体的阻滞作用，研究证实，在缺乏血管紧张素受体的情况下，替米沙坦仍然能部分激活PPAR γ，是唯一一个在治疗浓度内能激活PPAR-γ的ARB，对PPAR-γ作用最强。而与替米沙坦结构类似的罗格列酮有降尿酸的作用，且是通过调节UAT表达完成的。那么，替米沙坦是否是通过激活PPARγ来调节UAT的表达的呢？目前国内外尚无相关报道。

附图1 大鼠肾小管上皮细胞存在UAT表达（免疫荧光）

溶解曲线吸收曲线

附图2 不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞UATmRNA表达变化（实时荧光定量PCR）

附图3 不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞UAT、TGF-β1、α-SMA蛋白表达变化（Western Blot）

附图 4 不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾脏提取蛋白UAT、TGF-β1表达变化（Western Blot）

二、研究内容和预期目标

1.通过体内实验，观察替米沙坦对痛风性肾病患者SUA、SCr、PPAR-γ、NO表达的影响，明确替米沙坦降尿酸的作用及机制。

2.通过体外实验，观察人肾小管上皮细胞（HK-2）尿酸盐转运蛋白hUAT的表达及定位。探讨在正常及高尿酸条件下HK-2上hUAT、PPAR-γ、NO、CO-X2、MCP-1、TGF-β1的表达情况，观察替米沙坦、罗格列酮及PPAR-γ阻断剂HL005干预后其表达变化，进一步明确替米沙坦降尿酸及保护肾脏的机制。

三、研究方法和技术路线及可行性分析

四、项目创新点

1.临床及基础实验相结合，共同探讨替米沙坦降尿酸作用及机制；

2.采用共聚焦显微镜等先进手段进行hUAT等指标检测。

六、项目年度计划安排（2014年12月至2016年12月）

时间工作安排

2014.12-2015.2 购买试剂，进行预实验

2015.3-2016.1 培养人肾小管上皮细胞（HK-2），观察其尿酸盐转运蛋白hUAT的表达及定位。检测在正常及高尿酸条件下HK-2上hUAT、PPAR-

γ、NO、CO-X2、MCP-1、TGF-β1的表达情况，观察替米沙坦、

罗格列酮及PPAR-γ阻断剂HL005干预后其表达变化，探讨替米

沙坦降尿酸及保护肾脏的机制。收集整理相应资料，撰写论文。2015.3-2016.12 收集痛风性肾病患者100例，观察替米沙坦对痛风性肾病患者SUA、SCr、PPAR-γ、NO表达的影响，明确替米沙坦降尿酸的作

用及机制。收集整理相应资料，撰写论文。