实验六亚铁嗪显色法测定血清铁和总铁结合力
常规试验室检查结果判读
一、血、尿、粪常规 1.血常规（1）红细胞（RBC ）（参考值）成年男性：（4.0〜5.5） X1012/L 、成年女性：（3.5-5.0）X10i2/L 、新生儿：（6.0-7.0）X10i2/L 临床意义⑴生理性变化 增加：新生儿、高原居民。
减少：生理性贫血，如妊娠后期和某些年老者。
（2）病理性变化 增加：相对增加：各种原因的脱水造成血液浓缩；绝对增加：先天性发绀性心脏病和肺心 病代偿性红细胞增加；真性增加：真性红细胞增多症。
减少：病理性贫血，如造血不良（再障），过度破坏（溶 贫）和各种原因的失血。
2，血红蛋白（Hb ） ［参考值］成年男性：120-160g /L 、成年女性:110-150g /L 、新生儿:170—200g / L 临床意义： 见红细胞计数。
3 .血细胞比容（HCT ）参考值：男性：0.428-0.506L/L 、女性：0.367-0.475L/L （医院正常值：0.350-0.510L/L ） 临床意义：增加：见于大面积烧伤和脱水患者。
减少：见于贫血患者。
4 .平均红细胞容积（MCV ） 参考值：82-92fl （1L=1015fl ）；5 .平均红细胞血红蛋白含量（MCH ） 参考值：27-3lpg （1克=1012pg ）6 .平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC ）参考值：320—360g / L（参考值）（1）白细胞计数 成人：（4—10）X 109/L ；新生儿：（15〜20）X 109 /L （2）白细胞分类（DC ）中性杆状核粒细胞：0%-5%、中性分叶核粒细胞：50%-70%、嗜酸性粒细胞：0. 5%-5%、嗜碱粒性细 胞：0% —1%、淋巴细胞：20%-40%、单核细胞：3%-8%（1）实际反应中性粒细胞的增高或降低。
生理性变化：一般为增多，见于新生儿和妊娠晚期。
病理性变化: 增加：中性粒细胞中性粒细胞占白细胞总数的50%—70%,临床上大多数白细胞的总数变化急性感 染、急性创伤、急性大出血、急性中毒和白血病。
血清铁及总铁结合力的无蛋白滤液测定法
血清铁及总铁结合力的无蛋白滤液测定法
黄小兵;薛建中
【期刊名称】《右江民族医学院学报》
【年(卷),期】1993(0)3
【摘要】介绍一种以菲咯嗪为发色络合剂测定前预先除蛋白的经典方法。
该法预先除蛋白所得滤液透明澄清,呈色稳定性好,灵敏度高,无须做样品空白,一次可比色完成。
在蛋白沉淀剂中介入硫脲,以掩蔽铜离子,避免Cu^(++)与菲咯嗪反应影响测定结果。
本实验对加入硫脲量以及Cu^(++)对血清铁测定的干扰进行了实验性的初步研究,结果表明:①Cu^(++)对血清铁测定有显著的影响。
②不同的硫脲加入量和方法的精密度有关。
【总页数】4页(P243-246)
【关键词】硫脲;菲类;铜;铁
【作者】黄小兵;薛建中
【作者单位】右江民族医学院生化教研室;上海纺工局第一医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R
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(2) 白细胞分类（ DC） 中性杆状核粒细胞： 0％ -5％、中性分叶核粒细胞： 50％ -70％、嗜酸性粒细胞： 0． 5％ -5 ％、嗜碱粒性细 胞： 0％－ 1%、淋巴细胞： 20％ -40％、单核细胞： 3％ -8％
(1) 实际反应中性粒细胞的增高或降低。生理性变化：一般为增多，见于新生儿和妊娠晚期。病理性变化：
D 过多；④多
八、血清铁与总铁结合力
(一 )血清铁测定 (参考值 ) 亚铁嗪显色法：男性 (临床意义 )
11-30umol ／ L ，女性 9— 27umol ／ L
1、 血清铁增高 ①肝细胞损害；②溶血性黄疸和肝细胞性黄疸；③血液病，包括非缺铁性贫血、再 障及白血病。
2、 血清铁降低：主要为缺铁性贫血。 (二 )血清总铁结合力
降低具体临床意义。 HDL-C 与 TG 呈负相关系，见于冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病、肝损害、肾
病综合征。 （二）低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) (参考值 ) 沉淀法： 2.07-2.00mmol ／ L 3.15-3.61mmol ／ L 为边 缘升高，≥ 3.64mmol ／为升高。 （临床意义） HDL-C 升高与冠心病发病呈正相关关系。 （二）脂蛋白（ a）、 LP （ a） (参考值 ) ∠ 300 mg／ L （临床意义） 脂蛋白（ a）升高已作为冠心病及脑血管疾病发病的独立危险因素。 十二、血糖
单纯小细胞性贫 血
正常 ＜正常
正常 ＜正常
正常 ＜正常
正常 ＜正常
急性失血、急性溶贫 和再障 慢性感染、尿毒症
小细胞低色素性 贫血
＜正常
＜正常
＜正常
＜正常
慢性缺血、缺铁性贫 血
8 白细胞 (WBC) (参考值 ) (1) 白细胞计数 成人：（ 4－ 10）× 109／ L ；新生儿： （15~20) ×109／L
血清铁、总铁结合力测定的临床意义
血清铁（ＩＲＯＮ）、总铁结合力（ＴＩＢＣ）测定的临床意义人体内含铁量为4克左右，其中三分之二存在于红血球的血红蛋白当中，其余三分之一储备在肝、脾和骨髓中。
血清中的铁离子全部与转铁蛋白结合，是铁离子的运输形式，称为血清铁（ＩＲＯＮ或Ｆe）。
通常血清中内有三分之一转铁蛋白结合，其余转铁蛋白结合铁的潜力称为不饱和铁结合力（ＵＩＢＣ）。
血清转铁蛋白结合最大铁量称为总铁结合力（ＴＩＢＣ）它等于血清铁与不饱和铁结合之和。
一、血清铁（ＩＲＯＮ或Ｆe）正常参考值：7.0－32.0μmol/l成人男子11.0－32.0μmol/l成人女子9.0－27.0μmol/l儿童9.0－32.2μmol/l老人7.2－14.4μmol/l临床意义：1、血清铁增高：红细胞破坏增多，如溶血性贫血；红细胞再生成熟障碍性疾病，如再生障碍性贫血，巨幼红细胞性贫血等；铁的利用率减低，如铅中毒或维生素Ｂ6缺乏引起的造血功能减退；贮存铁释放增加，如急性肝细胞损害、坏死性肝炎等；铁的吸收率增加，如血色素沉着症、含铁血黄素沉着症、反复输血或铁剂治疗。
2、血清铁降低：机体摄取不足，如营养不良、胃肠道病、慢性腹泻等；失铁增加，如失血；生理成长所需补充不足，如妊娠、婴儿生长期；铁释放减少，如急性玫慢性感染、尿毒症等；某些药物治疗所致。
二、血清总铁结合力（ＴＩＢＣ）正常参考值：44.0—75.0μmol/l临床意义：1、血清总铁结合力增高：转铁蛋白合成增加，如缺铁性贫血；转铁蛋白释放增加，如肝细胞坏死。
2、血清总铁结合力降低：转铁蛋白丢失，如肾病、尿毒症等；转铁蛋白合成不足，如遗传性转铁蛋白缺乏症。
三、未饱和铁结合力（ＵＩＢＣ）正常参考值：31.0－51.0 μmol/l参考下图可助说明：。
实验室检查正常值大全
（一）血常规红细胞（RBC）成年男性：（～）×1012／L 成年女性：（～）×1012／L 新生儿：（～）×1012／L血红蛋白（Hb）成年男性：120～160g／L 成年女性：1l0～150g／L 新生儿：170～200g／L白细胞（WBC）成人：（～）×109／L；新生儿：（～）×109／L中性杆状核粒细胞：1％～5％中性分叶核粒细胞：50％～70％嗜酸性粒细胞：％～5％嗜碱粒性细胞：O％～1％淋巴细胞：20％～40％单核细胞：3％～8％血小板（PLT）（100～300）×109／L（二）尿常规1.酸碱度（pH）5～82.比重（SG）～3.尿蛋白（Pro）定性定量试验Pro定性：阴性（neg），Pro定量≤O.15g／24h4.葡萄糖（Glu）定性：阴性（neg）、糖定量：<／24小时（0.5g／24小时）5.酮体（Ket）阴性（neg）6.胆红素（Bil）和尿胆原（Ubg）均为阴性（neg）7.亚硝酸盐（Nit）阴性（neg）8.白细胞（Leu）<25／μl9.红细胞或血红蛋白（潜血试验）（Ery或OB）≤l0／μl10.尿沉渣镜检白细胞<5／HP（每高倍镜视野）红细胞<3／HP（每高倍镜视野）（三）粪常规1.颜色黄褐色成型便2.镜检（1）白细胞：正常粪便不见或偶见；（2）红细胞：正常粪便无红细胞；（3）细菌：主要为大肠杆菌和肠球菌；（4）虫卵。
3.粪便潜血试验（occult blood test，OBT）正常粪便OBT阴性。
（四）痰液检验一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。
化脓性感染时呈黄色；绿脓杆菌感染时呈黄绿色；大叶性肺炎时呈铁锈色；急性左心衰时呈粉红色泡沫样痰；阿米巴肺脓疡时呈咖啡色。
呼吸系统有病变时痰可呈粘液性、浆液性、脓性、血性。
（五）电解质血清钾～／L 血清钠135～145mmol／L 血清氯96～108mmol／L 血清钙～／L（9～11mg／dl）血清无机磷～／L（3～5mg／dl）（六）凝血功能检查（一）凝血时间（CT）普通试管法6～12min[分钟]，硅管法15～32min。
诊断学案例分析
诊断学案例分析患者，男，50岁，农民。
近一个半月来乏力、不适和腹胀；最近十天皮肤瘙痒，皮肤及眼睛发黄。
20年前曾经患肝炎。
没有进行系统检查和治疗。
体检：T 37.8，R24次/分，P86次/分，BP110/68mmHg。
一般情况较差，消瘦，面部及上胸部可见蜘蛛痣，皮肤巩膜黄染；腹部膨隆，肝脾触诊不满意；心肺无明显异常。
实验室检查血液检查：RBC 3.8X1012/L; Hb 99g/L; HCT 0.37; WBC 14.5X109/L;St0.07， Sg0.75，L0.15，M0.03;腹水检查：癌细胞〔+〕临床生化检查： TP50g/L, A 20g/L, G 30g/L; ALT 243U/L, AST 186U/L, ALP470U/L,GGT98U/L,STB 180mmol/L, CB 85 mmol/L免疫学检查： HBsAg(+), HBsAb(-), HBeAg(+), HBeAb(-), HBcAb(+), AFP(+) 问题：? ?结合病史及临床检查，应该考虑为哪方面的疾病？根据临床病症和体征以及实验室检查结果〔分析有意义的检查结果〕得到初步诊断是什么？依据如何？?你认为还需要增加哪些实验室检查工程？1 根据病史:患者20年前曾患肝炎。
近一个月出现了，皮肤及眼睛发黄、蜘蛛痣、腹部膨隆等病症。
应考虑肝胆系统疾病。
2. ①皮肤瘙痒，皮肤及眼睛发黄是肝细胞性黄疸的病症②面部及上胸部可见蜘蛛痣，皮肤巩膜黄染〔可能是肝细胞黄疸，由癌肿压迫或侵犯胆管并发胆道感染，也可能是阻塞性黄疸由肝门淋巴结肿大压迫胆道〕，腹部膨隆，肝脾触诊不满意，门脉高压征，提示肝硬化或者肝功能大局部损伤或者肝癌③红细胞降低，由于慢性肝炎引起贫血，慢性感染和炎症也会引起贫血④血红蛋白下降，由红细胞下降引起⑤白细胞增多，癌肿压迫或侵犯胆管并发胆道感染⑥腹水检查，癌细胞阳性，说明有癌肿存在，更加强了肝癌的可能性⑦血清总蛋白减少，白蛋白减少，由于腹水引起，肝脏损伤，合成蛋白质减少⑧ALT ⑨AST升高，反映肝细胞损伤升高，ALP升高，ALP升高〔肝癌，肿瘤细胞产生ALP，炎症刺激产生ALP〕，GGT升高提示肝内胆道阻塞，CB升高，由于胆道阻塞而反流入血⑩免疫学检查呈现大三阳，提示肝炎病毒持续存在，甲胎蛋白阳性，提示肝癌初步诊断肝癌3. 还需要增加的试验检测工程有： 1)AFP2)超声显像，查肝癌细胞〔声晕，结节中结节〕 3)CT〔动态增强扫描，非动态扫描〕 4〕磁共振成像MRI病例分析：患者女性,25岁，因面色苍白、头晕、乏力1年余，加重伴心慌1个月来诊。
实验六亚铁嗪显色法测定血清铁和总铁结合力
[1] 朱汉民，沈霞主编. 临床实验室诊断学，上海科学技术出 版社，2004. [2] 姜旭淦主编.临床生物化学检验实验指导(第2版)，中国医 药科技出版社，2010.
天津医科大学东部校区
1．血清铁测定 取试管3支标明空白管、标准管和测定管，按表6−2 亚铁 嗪比色法测定血清铁操作步骤。
表 6−2 亚铁嗪比色法测定血清铁操作步骤
加入物（ml）
空白管
标准管
测定管
血清
—
—
0.45
铁标准应用液
—
0.45
—
去离子水
0.45
—
—
甘氨酸−盐酸缓冲液
1.2
1.2
1.2
混匀，于 562nm 波长处，以空白管调零，读取测定管吸光度(血清空白)
实验背景
表 6−3 亚铁嗪比色法测定血清总铁结合力操作步骤
实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围
加入物（ml）
空白管
标准管
测定管
上清液
—
—
0.45
35.8umol/L 铁标准应用液 —
0.45
—
去离子水
0.45
—
—
甘氨酸−盐酸缓冲液
1.2
1.2
1.2
混匀，于 562nm 波长处．以空白管调零，读取测定管吸光度(血清空白)
亚铁嗪显色剂
0.05
0.05
0.05
临床意义
混匀，放置室温 15min 或 370C10min，再次读取各管吸光度。
操作步骤
TIBC检测血清预处理过程
结果计算
实验背景 实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围 临床意义
总铁结合力(TIBC)检测试剂盒(亚铁嗪比色法)
自备材料： 1、离心管或试管 2、比色杯 3、分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、制备处理样品铁溶液和铁标准工作液：取适量铁标准(100μg/ml)，按铁标准(100μg/ml)：TIBC 铁标准稀释液=1:9 的比例配制铁标准(10μg/ml)，作为处理样品铁溶液；同时按铁标准 (100μg/ml)：TIBC 铁标准稀释液=1:49 的比例配制铁标准(2μg/ml)，作为铁标准工作液。4℃避 光保存 3 个月有效。 2、制备样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于 TIBC 的检测。选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥有塞子的试管或者一次性无菌聚乙烯有盖子的 离心管，加入血清或血浆 0.45ml、铁标准(10μg/ml)0.25ml、ddH2O 0.2ml，充分混匀，室温放置 10min。加入铁吸附剂 50mg，混匀，室温放置 10min，期间振荡 4 次，3000g 离心 10min，取上清 液，待用。 3、TIBC 检测：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥的试管或者一次性无菌聚乙烯的离心管，按 下表操作。 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管
ddH2O 铁标准(2μg/ml) 上清液
0.45 — —
— 0.45 —
— — 0.45
TIBC Assay buffer 1.2 1.2 1.2 混匀，于 562nm 处，以空白管调零，读取测定管吸光度 (即血清空白)。 0.05 0.05 0.05 4、混匀，室温静置 15min 或 37℃孵育 10min，分光光度计 562nm 处检测，以空白管调零，比色杯光 径 0.5cm，再次读取各管吸光度，1h 内比色完毕。 计算： 血浆、血清总铁结合力(TIBC)(μmol/L)={(A 测定−A 血清空白×0.97)/A 标准}×71.6 式中：A 测定=测定孔加入亚铁嗪显色液后测得的吸光度值 A 血清空白=测定孔未加入亚铁嗪显色液前测得的吸光度值 A 标准=标准孔的吸光度值 单位换算：铁标准(2μg/ml)=铁标准(35.8μmol/L) μg/dl=μmol/L/0.179 血浆、血清未饱和铁结合力(UIBC)(μmol/L)=TIBC 含量－血清铁含量 参考区间： 成年健康人血清总铁结合力： 男性：50~77μmol/L(280~430μg/dl) 女性：54~77μmol/L(300~430μg/dl) 注意事项： 1、溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。 倍数。 3、实验过程中用到的水，不可用普通的蒸馏水，尽量采用高纯度的去离子水。 亚铁嗪显色液
血清铁和总铁结合力测定课件
铁的浓度。
报告结果
06 记录并报告血清铁的测定结果
。
血清铁测定的注意事项
防止溶血
采集血液样本时应避 免溶血，因为红细胞 内的铁会干扰血清铁
的测定。
防止污染
确保采血器具、容器 和试剂不受污染，以 避免交叉污染和误差
。
温度控制
在测定过程中，温度 应保持恒定，以确保 实验结果的准确性。
性别
男性和女性在生理上存在差异， 可能导致血清铁和总铁结合力水 平的差异。例如，女性在经期可 能会因失血而导致血清铁水平下
降。
生理状态
健康人的血清铁和总铁结合力水 平会根据生理状态的变化而波动 。例如，在妊娠期间，由于胎儿 的生长发育需要，孕妇的血清铁
水平可能会升高。
病理因素
贫血
各种原因引起的贫血都会导致血清铁 水平下降。例如，缺铁性贫血、巨幼 细胞性贫血等。
个体化治疗
随着精准医学的发展，血清铁和总铁结合力的测定将更加个性化，为个体化治疗 提供更准确的指导。
THANKS
感谢观看
指导治疗
根据血清铁和总铁结合力的测定结果 ，可以指导贫血、肝病等患者的治疗 ，如补充铁剂、调整饮食等。
02
血清铁测定的方法与步骤
血清铁测定的方法
01 原子吸收光谱法
利用原子吸收光谱的原理，通过测定血清中铁元 素的吸光度来计算血清铁的含量。
02 分光光度法
利用分光光度计测定血清中铁离子与特定试剂反 应后的显色程度，通过标准曲线计算血清铁的浓 度。
标准化操作
按照标准化操作程序 进行测定，确保实验 结果的可靠性和可比
性。
总铁结合力测定的方法与步
03
3p实验室检查结果及正常值
实验室检查结果及正常值（一)血常规红细胞(RBC）成年男性：（4。
0～5。
5）×1012／L成年女性：（3。
5～5.0）×1012／L新生儿：（6.0～7。
0）×1012／L血红蛋白（Hb）成年男性：120～160g／L成年女性：1l0～150g／L 新生儿：170～200g／L白细胞（WBC)成人：（4.0～10.0）×109／L；新生儿:（15.0～20。
0）×109／L中性杆状核粒细胞:1%～5％中性分叶核粒细胞：50％~70％嗜酸性粒细胞：0.5%～5％嗜碱粒性细胞：O％～1％淋巴细胞：20%~40％单核细胞：3％~8％血小板（PLT)（100～300）×109／L（二）尿常规1.酸碱度（pH）5～82.比重（SG）1.015～1.0253。
尿蛋白（Pro) 定性定量试验 Pro定性：阴性（neg），Pro定量≤O.15g／24h4。
葡萄糖(Glu）定性:阴性（neg）、糖定量：<2。
8mmol／24小时（0。
5g／24小时)5.酮体(Ket)阴性（neg）6。
胆红素(Bil）和尿胆原(Ubg）均为阴性（neg）7.亚硝酸盐(Nit) 阴性(neg）8。
白细胞(Leu)<25／μl9。
红细胞或血红蛋白（潜血试验)（Ery或OB）≤l0／μl10.尿沉渣镜检白细胞〈5／HP（每高倍镜视野）红细胞<3／HP（每高倍镜视野）（三）粪常规1。
颜色黄褐色成型便2.镜检:（1)白细胞：正常粪便不见或偶见；(2）红细胞:正常粪便无红细胞；（3）细菌:主要为大肠杆菌和肠球菌；(4）虫卵。
3.粪便潜血试验（occult blood test,OBT）正常粪便OBT阴性。
（四）痰液检验一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色.化脓性感染时呈黄色；绿脓杆菌感染时呈黄绿色；大叶性肺炎时呈铁锈色；急性左心衰时呈粉红色泡沫样痰;阿米巴肺脓疡时呈咖啡色。
实验室检查正常值大全
实验室检查结果及正常值（一）血常规红细胞（RBC）成年男性：（4.0～5.5）×1012／L 成年女性：（3.5～5.0）×1012／L 新生儿：（6.0～7.0）×1012／L血红蛋白（Hb）成年男性：120～160g／L 成年女性：1l0～150g／L 新生儿：170～200g／L白细胞（WBC）成人：（4.0～10.0）×109／L；新生儿：（15.0～20.0）×109／L 中性杆状核粒细胞：1％～5％中性分叶核粒细胞：50％～70％嗜酸性粒细胞：0.5％～5％嗜碱粒性细胞：O％～1％淋巴细胞：20％～40％单核细胞：3％～8％血小板（PLT）（100～300）×109／L（二）尿常规1.酸碱度（pH）5～82.比重（SG）1.015～1.0253.尿蛋白（Pro）定性定量试验Pro定性：阴性（neg），Pro定量≤O.15g／24h4.葡萄糖（Glu）定性：阴性（neg）、糖定量：<2.8mmol／24小时（0.5g／24小时）5.酮体（Ket）阴性（neg）6.胆红素（Bil）和尿胆原（Ubg）均为阴性（neg）7.亚硝酸盐（Nit）阴性（neg）8.白细胞（Leu）<25／μl9.红细胞或血红蛋白（潜血试验）（Ery或OB）≤l0／μl10.尿沉渣镜检白细胞<5／HP（每高倍镜视野）红细胞<3／HP（每高倍镜视野）（三）粪常规1.颜色黄褐色成型便2.镜检（1）白细胞：正常粪便不见或偶见；（2）红细胞：正常粪便无红细胞；（3）细菌：主要为大肠杆菌和肠球菌；（4）虫卵。
3.粪便潜血试验（occult blood test，OBT）正常粪便OBT阴性。
（四）痰液检验一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。
化脓性感染时呈黄色；绿脓杆菌感染时呈黄绿色；大叶性肺炎时呈铁锈色；急性左心衰时呈粉红色泡沫样痰；阿米巴肺脓疡时呈咖啡色。
血清铁及总铁结合力测定——亚铁嗪比色法
授课对象：11级检验1-5班课时：2学时血清铁及总铁结合力测定——亚铁嗪比色法【实验目的】1．掌握亚铁嗪比色法测定血清铁的原理及注意事项2．规范地进行血清铁测定3．了解血清铁测定的主要临床意义【实验用品】722型分光光度计，离心机，轻质MgCO3粉末，甘氨酸/盐酸缓冲液，铁标准应用液，血清【实验原理】血清铁和运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，在被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在波长562nm处有一吸收峰，与同样处理的标准液比较，即可求得血清铁含量。
直接测定法应纠正血清本身的色度，故应设血清空白。
总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白全部与铁饱和。
将铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合成复合物，多余的铁被轻质碳酸美粉末吸附除去，然后测定血清中的总铁含量，即为血清总铁结合力。
【操作步骤】1．血清铁直接测定法血清铁操作步骤加入物/ ml 测定管标准管空白管血清0.45 — — 35.8μmol/L铁标准应用液— 0.45 —去离子水— — 0.45甘氨酸-盐酸缓冲液 1.2 1.2 1.2将各管混匀，以562nm 波长比色，空白管调零，读取测定管的吸光度（称血清空白）。
然后再向各管加入亚铁嗪显色液0.05ml ，充分混匀，1小时后仍以562nm 波长比色，空白管调零，读取各管的吸光度。
【计算】)L /mol μ(8.35×A )97.0×A (A L /mol μSB U血清）＝血清铁（由于两次测吸光度时溶液体积不同，故应将血清空白管吸光度乘以0.97，作为校正。
2．血清总铁结合力测定法 于一具塞试管中加入血清0.45ml ，铁标准液（Fe179μmol/L ）0.25ml 和去离子水0.2ml ，混匀，放置试温10分钟后，加碳酸镁粉末约20mg ，再放10分钟，振摇数次，随后经2500r/min 离心10分钟，上清液备用。
另取3支试管，按下表操作。
硫氰酸汞比色法测定血清氯ppt
【实验操作】1、血清铁测定 实验操作】 取试管3 取试管3支
加入物 空白管 标准管 测定管 0.2 血清 0.2 铁标准液 0.2 去离子水 甘氨酸-盐酸缓冲液1.0 1.0 甘氨酸-盐酸缓冲液1.0 1.0
混匀，37度5min,于562nm波长处 以空白管调零，读取A 波长处， 混匀，37度5min,于562nm波长处，以空白管调零，读取A测
【实验操作】取试管4支 实验操作】取试管4
加入物 试剂空白管 标准管 测定空白管 测定管 血清 0. 1 0.1 0.1 氯标准液 3.0 空白试剂 3.0 3.0 显色应用液 3.0 混匀，置室温10min,以试剂空白管调零，在 以试剂空白管调零， 混匀，置室温10min,以试剂空白管调零 460nm波长处比色 分别读取各管的吸光度。 460nm波长处比色，分别读取各管的吸光度。 波长处比色，
（血清空白） 血清空白）
亚铁嗪显色液(B) 亚铁嗪显色液(B) 0.2
0.2
0.2
混匀， 37度5min,再次读取各管吸光度 再次读取各管吸光度。 混匀， 37度5min,再次读取各管吸光度。
2、血清总铁结合力测定 在试管中加入血清0.45ml，179umol/LTIBC铁标准液 在试管中加入血清0.45ml，179umol/LTIBC铁标准液 0.25ml及去离子水 0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀，放置室温10min,加 及去离子水0.2ml，充分混匀，放置室温10min,加 入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次，3000r/min离 入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次，3000r/min离 内振摇数次 10min,取上清液操作 取上清液操作。 心10min,取上清液操作。 取试管3 取试管3支 加入物 空白管 标准管 测定管 0.45 血清 0.45 铁标准液 0.45 去离子水 甘氨酸-盐酸缓冲液1.2 1.2 甘氨酸-盐酸缓冲液1.2 1.2 混匀， 562nm波长处 以空白管调零，读取A 波长处， 混匀，于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空 白） 0.05 0.05 亚铁嗪显色液 0.05 混匀， 室温15min,再次读取各管吸光度 再次读取各管吸光度。 混匀，放置 室温15min,再次读取各管吸光度。
临床检验技术操作手册
第一节临床血液学检验血常规检查【标本】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血）。
【方法】血液细胞自动分析仪测定法。
【试剂】血液细胞自动分析仪配套试剂。
【操作】详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。
【附注】1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。
这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。
2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。
其优点为：（1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。
3. 血细胞计数应用EDTA·K2：为抗凝剂（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。
4. 贮血容器应选用有盖塑料管。
抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h；如需制作血涂片应在2h内完成。
5. 测定前必须将EDTA·K2抗凝血充分混匀。
6. 血细胞分析仪测定最适温度为18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使细胞体积发生改变，影响各参数的结果。
7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率≥8.0%）；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。
嗜酸性粒细胞直接计数【标本】末梢血或抗凝静脉血。
【方法】直接计数法。
【试剂】1. Hinkelmann液；2. 乙醇-伊红稀释液；3. 伊红-丙酮稀释液。
【操作】1．小试管中加稀释液0.38ml。
2．常法取末梢血20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。
3．静置3～5min，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数。
总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。
【附注】1. 血液稀释后应于1h内计数完毕。
试验六亚铁嗪显色法测定
网织红细胞增多和出现溶血现象 有潜在原发病时，血红细胞计数发现 网织红细胞减少
↑
↓
↑
↑
有潜在原发病或时，血红细胞计数发 现网织红细胞减少
↑
↓
↑
↑
出现继发性器官损伤症状
思考题
1. 阐述血清铁和总铁结合力测定的原理。 2. 在血清铁和总铁结合力测定中不同的pH的作用？
参考�料
[1] 朱汉民，沈霞主编. 临床实验室诊断学，上海科学技术出 版社，2004. [2] 姜旭淦主编.临床生物化学检验实验指导(第2版)，中国医 药科技出版社，2010.
实 验 准 备
一、试剂 1. 0.4mol/L 甘氨酸/盐酸缓冲液(pH2.8)
0.4mol/L甘氨酸溶液58ml，0.4mol/L盐酸溶液42ml和TritonX-100 3ml混合后加入无水亚硫酸钠800mg，使溶 解。 显色剂 称取亚铁嗪[3− (2−吡啶基) −5，6−双(4−苯磺酸) −1，2，4−嗪；ferrozine] 0.6g溶于去离子水100ml中。
疾 病 缺铁性贫 溶血性贫血 再生障碍性贫血 巨幼细胞性贫血 铅 中 毒 红细胞增多症 肾病综合征 肝 炎 肝 硬 化 慢性感染性贫血 肿瘤性贫血 含铁血黄素沉着症 血清铁 明显降低 增高 增高 增高 增高 降低或正常 降低 明显增高 降低或正常 降低或正常 降低或正常 明显增高 总铁结合力 增高 降低或正常 降低 降低 降低 增高 明显降低 增高 降低或正常 降低或正常 降低或正常 正常
天津医科大学东部校区
实验 六 亚铁嗪显色法测定 血清铁和总铁结合力
天津医科大学医学检验学院 刘雪平
实 验 背 景
铁(iron, Fe)是人体必需的微量元素。约67.58%
3p实验室检查结果及正常值
实验室检查结果及正常值（一）血常规红细胞（RBC）成年男性：（4.0～5.5）×1012／L 成年女性：（3.5～5.0）×1012／L 新生儿：（6.0～7.0）×1012／L 血红蛋白（Hb）成年男性：120～160g／L 成年女性：1l0～150g／L新生儿：170～200g／L白细胞（WBC）成人：（4.0～10.0）×109／L；新生儿：（15.0～20.0）×109／L中性杆状核粒细胞：1％～5％中性分叶核粒细胞：50％～70％嗜酸性粒细胞：0.5％～5％嗜碱粒性细胞：O％～1％淋巴细胞：20％～40％单核细胞：3％～8％血小板（PLT）（100～300）×109／L（二）尿常规1.酸碱度（pH）5～82.比重（SG）1.015～1.0253.尿蛋白（Pro）定性定量试验Pro定性：阴性（neg），Pro定量≤O.15g／24h4.葡萄糖（Glu）定性：阴性（neg）、糖定量：<2.8mmol／24小时（0.5g／24小时）5.酮体（Ket）阴性（neg）6.胆红素（Bil）和尿胆原（Ubg）均为阴性（neg）7.亚硝酸盐（Nit）阴性（neg）8.白细胞（Leu）<25／μl9.红细胞或血红蛋白（潜血试验）（Ery或OB）≤l0／μl10.尿沉渣镜检白细胞<5／HP（每高倍镜视野）红细胞<3／HP（每高倍镜视野）（三）粪常规1.颜色黄褐色成型便2.镜检：（1）白细胞：正常粪便不见或偶见；（2）红细胞：正常粪便无红细胞；（3）细菌：主要为大肠杆菌和肠球菌；（4）虫卵。
3.粪便潜血试验（occult blood test，OBT）正常粪便OBT阴性。
（四）痰液检验一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。
化脓性感染时呈黄色；绿脓杆菌感染时呈黄绿色；大叶性肺炎时呈铁锈色；急性左心衰时呈粉红色泡沫样痰；阿米巴肺脓疡时呈咖啡色。
常用铁代谢实验报告
一、实验目的1. 了解铁代谢的基本原理和实验方法。
2. 掌握血清铁、总铁结合力、血清铁蛋白、转铁蛋白饱和度及骨髓铁染色的测定方法。
3. 通过铁代谢试验，鉴别贫血的类型，为临床诊断提供依据。
二、实验原理铁是人体正常生理活动中不可缺少的微量元素，主要参与血红蛋白的合成与氧的输送，也参与体内一些生物化学过程。
铁代谢发生障碍时，将导致机体功能紊乱。
铁代谢试验包括血清铁与总铁结合力测定、血清铁蛋白测定、转铁蛋白饱和度及骨髓铁染色。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清铁试剂盒- 总铁结合力试剂盒- 血清铁蛋白试剂盒- 转铁蛋白饱和度试剂盒- 骨髓铁染色试剂盒- 标本（血液）2. 实验仪器：- 酶标仪- 自动分析仪- 显微镜四、实验方法1. 血清铁与总铁结合力测定：- 将血清加入试剂盒中的反应杯，按照说明书操作。
- 使用酶标仪测定吸光度，计算血清铁与总铁结合力。
2. 血清铁蛋白测定：- 将血清加入试剂盒中的反应杯，按照说明书操作。
- 使用酶标仪测定吸光度，计算血清铁蛋白含量。
3. 转铁蛋白饱和度测定：- 将血清加入试剂盒中的反应杯，按照说明书操作。
- 使用自动分析仪测定吸光度，计算转铁蛋白饱和度。
4. 骨髓铁染色：- 取骨髓涂片，按照说明书进行铁染色。
- 使用显微镜观察骨髓细胞中铁颗粒的分布情况。
五、实验结果与分析1. 血清铁与总铁结合力测定：- 血清铁：150～200μg/L- 总铁结合力：450～600μg/L2. 血清铁蛋白测定：- 血清铁蛋白：15～300μg/L3. 转铁蛋白饱和度测定：- 转铁蛋白饱和度：15%～35%4. 骨髓铁染色：- 骨髓细胞中可见铁颗粒，分布均匀。
六、实验结论通过本次实验，我们成功掌握了血清铁、总铁结合力、血清铁蛋白、转铁蛋白饱和度及骨髓铁染色的测定方法。
实验结果表明，受试者的铁代谢指标均在正常范围内，无贫血症状。
七、实验讨论1. 铁代谢试验对于鉴别贫血的类型具有重要意义，可帮助临床医生制定合理的治疗方案。
总铁结合力测定试剂盒(亚铁嗪法)产品技术要求万泰德瑞
总铁结合力测定试剂盒（亚铁嗪法）适用范围：用于体外定量测定人血清中总铁结合力（TIBC）的含量。
1.1包装规格1）血清铁：试剂1：25mL×1、试剂2：5mL×1；未饱和铁结合力：试剂3：25mL ×1、试剂4：5mL×1；2）血清铁：试剂1：50mL×1、试剂2：10mL×1；未饱和铁结合力：试剂3：50mL ×1、试剂4：10mL×1；3）600测试/盒（血清铁：试剂1：71mL×1、试剂2：20mL×1；未饱和铁结合力：试剂3：71mL×1、试剂4：20mL×1）；校准品：1.0mL×1（选配）；质控品水平1：1.0mL×1（选配）；质控品水平2：1.0mL×1（选配）。
1.2组成成分试剂1: 酸缓冲液（pH2.0）100mmol/L吐温-20 0.05%抗坏血酸45mmol/L 硫脲90mmol/L 试剂2: 酸缓冲液（pH4.5） 1.55mmol/L硫脲20mmol/L 亚铁嗪5mmol/L试剂3: Tris缓冲液（pH8.6）0.3M硫脲42mmol/L 曲拉通X-100 0.8%试剂4: Tris缓冲液（pH8.6） 0.3M呋喃三嗪二钠盐 1mmol/L抗坏血酸30mmol/L校准品：氯化铁、Tris缓冲液、人血清（含量≥5%），（目标浓度范围：血清铁：30μmol/L-44μmol/L，未饱和铁结合力：36μmol/L-52μmol/L），批特异，具体浓度见瓶签；质控品：氯化铁、Tris缓冲液、人血清（含量≥5%），（质控品水平1靶值范围：20μmol/L-30μmol/L；质控品水平2靶值范围：48μmol/L-72μmol/L），批特异，具体浓度见瓶签。
2.1 外观试剂1：澄清液体；试剂2：澄清液体；试剂3:无色到浅绿色液体；试剂4：黄绿色澄清液体；校准品：无色或黄色液体；质控品：无色或黄色液体。
实验室检查正常值大全
实验室检查结果及正常值（一）血常规红细胞（）成年男性：（4.0～5.5）×1012／L 成年女性：（3.5～5.0）×1012／L 新生儿：（6.0～7.0）×1012／L血红蛋白（）成年男性：120～160g／L 成年女性：1l0～150g／L 新生儿：170～200g／L白细胞（）成人：（4.0～10.0）×109／L；新生儿：（15.0～20.0）×109／L 中性杆状核粒细胞：1％～5％中性分叶核粒细胞：50％～70％嗜酸性粒细胞：0.5％～5％嗜碱粒性细胞：O％～1％淋巴细胞：20％～40％单核细胞：3％～8％血小板（）（100～300）×109／L（二）尿常规1.酸碱度（）5～82.比重（）1.015～1.0253.尿蛋白（）定性定量试验定性：阴性（），定量≤O.15g／24h4.葡萄糖（）定性：阴性（）、糖定量：<2.8／24小时（0.5g／24小时）5.酮体（）阴性（）6.胆红素（）和尿胆原（）均为阴性（）7.亚硝酸盐（）阴性（）8.白细胞（）<25／μl9.红细胞或血红蛋白（潜血试验）（或）≤l0／μl10.尿沉渣镜检白细胞<5／（每高倍镜视野）红细胞<3／（每高倍镜视野）（三）粪常规1.颜色黄褐色成型便2.镜检（1）白细胞：正常粪便不见或偶见；（2）红细胞：正常粪便无红细胞；（3）细菌：主要为大肠杆菌和肠球菌；（4）虫卵。
3.粪便潜血试验（，）正常粪便阴性。
（四）痰液检验一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。
化脓性感染时呈黄色；绿脓杆菌感染时呈黄绿色；大叶性肺炎时呈铁锈色；急性左心衰时呈粉红色泡沫样痰；阿米巴肺脓疡时呈咖啡色。
呼吸系统有病变时痰可呈粘液性、浆液性、脓性、血性。
（五）电解质血清钾 3.5～5.3／L 血清钠 135～145／L 血清氯96～108／L 血清钙 2.25～2.58／L（9～11／）血清无机磷0.97～1.61／L（3～5／）（六）凝血功能检查（一）凝血时间（）普通试管法6～12[分钟]，硅管法15～32。
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实验背景 实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围 临床意义
注意事项
1．使用水必须经过去离子处理。测定时不要使用玻 璃器皿，应用塑料制品，一般不会有污染问题。
2．溶血标本对测定有影响，应避免溶血。如果铁测 定用原子吸收光谱法，不能采用EDTA血浆，其他抗凝 剂不受影响。
1．血清铁测定 取试管3支标明空白管、标准管和测定管，按表6−2 亚铁 嗪比色法测定血清铁操作步骤。
表 6−2 亚铁嗪比色法测定血清铁操作步骤
加入物（ml）
空白管
标准管
测定管
血清
—
—
0.45
铁标准应用液
—
0.45
—
去离子水
0.45
—
—
甘氨酸−盐酸缓冲液
1.2
1.2
1.2
混匀，于 562nm 波长处，以空白管调零，读取测定管吸光度(血清空白)
3. 1.79mmol/L铁标准储存液
精确称取优级纯硫酸高铁铵[FeNH4(SO4)2)·12H2O] 0.8635g，置于1L容量瓶中，加入去离子水约50ml，逐滴加 入浓硫酸5ml，溶解后用去离子水定容至刻度，混匀。置棕色瓶中可长期保存。
4. 35.8umol/L铁标准应用液
吸取铁标准贮存液2ml， 加入去离子水约50ml及浓硫酸0.5ml，再用去离子水稀释至100ml刻度，混匀。
实验 六 亚铁嗪显色法测定 血清铁和总铁结合力
天津医科大学医学检验学院 刘雪平
实验背景
实验背景 实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围 临床意义
铁(iron, Fe)是人体必需的微量元素。约67.58% (2.5g)分布于红细胞的Hb中，另外骨髓和Mb中各存 在2.59%和4.15%及许多酶分子中。健康人储备铁约 为0.5g～2g，主要以铁蛋白(ferritin，FERR)的形式贮 存在肝、脾和骨髓。人体对铁的吸收是有限度的， 而铁的排泄为主动调节过程，铁的消耗是要靠长期 贮存铁、无毒性铁和重利用铁。
实验准备
一、试剂 1. 0.4mol/L 甘氨酸/盐酸缓冲液(pH2.8)
0.4mol/L甘氨酸溶液58ml，0.4mol/L盐酸溶液42ml和TritonX-100 3ml混合后加入无水亚硫酸钠800mg，使溶 解。
2. 亚铁嗪
显色剂 称取亚铁嗪[3− (2−吡啶基) −5，6−双(4−苯磺酸) −1，2，4−嗪；ferrozine] 0.6g溶于去离子水100ml中。
亚铁嗪显色剂
0.05
0.05
0.05
混匀，放置室温 15min 或 370C10min，再次读取各管吸光度。
操作步骤
亚铁嗪法TIBC测定 在试管中加入血清0.45ml，179umol/L TIBL 铁标准 液0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀后，放置室温10min，加入碳酸镁 粉末20mg，在10min内振摇数次，3000rpm离心10min。取上清液(代替血 清)与血清铁测定同样操作。
5．计算式中的0.97时体积校正值（0.165/0.170）。 6．所用试剂应为含铁量极微的高纯度分析试剂。 7．全自动生化分析血清TIBC时应严格控制各反应阶 段的pH，以保证检测过程中铁的释放、结合、呈色反 应准确进行。 8. 影响亚铁嗪法检测铁准确度的可能因素：①反应 混合液的pH；②高浓度的铁蛋白；③高脂血症和高胆 红质血症；④蛋白质沉淀。
血清TIBC 表示血清中转铁蛋白利用铁的最大生理活性， 其高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生、发展密切相 关。传统测定TIBC的方法多需采用碳酸镁、铁交换树脂、氧 化铝或磁珠等吸附剂吸附多余的未结合铁，经离心去除吸附 剂后再显色测定。目前临床通过调节不同反应阶段的pH值及 选用水溶性偶氮染料、铬天青B等显色剂，实现全自动生化分 析血清TIBC。
5. 179umol/L TIBC铁标准液
准确吸取铁标准贮存液10ml，加入去离子水约50ml 及浓硫酸0.5ml ,在用去离子水稀释至100ml刻度，混匀。
6． 轻质碳酸镁粉。 二、器材
1． 722型分光光度计、低速离心机、恒温水浴箱等。 2． 玻璃移液器、试管、离心管等
操作步骤
实验背景 实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围 临床意义
3．标准液呈色可稳定24小时，血清呈色反应在30分 钟内保持稳定，稳定期后呈色程度缓慢增加，大约每 小时吸光度值增加0.002。
4．血清铁还存在着日间变异(26.6%)。一天中血清浓 度变化超过12.9%，其峰值出现在午后2小时左右。室 温(200C)稳定3天，40C～80C稳定1周。
注意事项
实验背景 实验原理 注意事项 实验准备 操作步骤 结果计算 参考范围 临床意义
血清铁 明显降低 增高 增高 增高 增高 降低或正常 降低 明显增高 降低或正常 降低或正常 降低或正常 明显增高
总铁结合力 增高 降低或正常 降低 降低 降低 增高 明显降低 增高 降低或正常 降低或正常 降低或正常 正常
实验背景
血清铁的检测方法有(微量无焰、常规火焰)原子吸收光谱 法、电量滴定法、化学比色法。原子吸收光谱法和电量滴定 法设备复杂、费用昂贵且不适于常规半自动或全自动生化分 析。
实验背景
图 6-1 铁 代 谢 平 衡
实验背景
血清铁及TIBC的高低受铁的吸收、贮存和重利用等因素的影响， 因此不同疾病时可有相应的变化，血清铁蛋白饱和度为估计人体的铁 状态较好的指标，亦可用于缺铁性贫血的鉴别诊断和治疗监测，而铁 蛋白是最好的参数。
表6−1 不同疾病时血清铁及总铁结合力变化
疾病 缺铁性贫 溶血性贫血 再生障碍性贫血 巨幼细胞性贫血 铅中毒 红细胞增多症 肾病综合征 肝炎 肝硬化 慢性感染性贫血 肿瘤性贫血 含铁血黄素沉着症
实验原理
血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物．在酸性介质中铁从 复合物中解离出来，被还原剂还原成二价铁，再与亚铁嗪直接 作用生成紫红色复合物，与同样处理的铁标准液比较，即可求 得血清铁含量。
图6-2 亚铁嗪法检测血清铁的反应过程
实验原理
血清TIBC是指血清中运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到 血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除 去，然后测定血清中总铁含量，即为总铁结合力。