显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法,含偶氮化试剂)
厦门市鲎试剂实验厂 透析专用细菌内毒素检测鲎试剂盒说明书
透析透析专用专用专用细菌内细菌内细菌内毒毒素检测鲎试剂盒使用说明书(凝胶法)【品名品名】】透析用水及透析液细菌内毒素检测鲎试剂盒【规格规格】】1样份/盒【用途用途】】用于透析用水或透析液细菌内毒素检测。
【原理原理】】该鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有C因子、B 因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下，细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【试剂盒组成试剂盒组成】】名称 规格/数量 用途 1 鲎试剂（TAL ） 0.5EU/ml ×8支 反应主剂 2 内毒素工作标准品（CSE ） 1EU/支×2支 阳性对照和供试品阳性对照 3 细菌内毒素检查用水（TRW ） 2ml ×3支 鲎试剂与内毒素溶解 4 辅液Ⅰ 0.7ml ×1支 样本稀释 5 采样瓶 10ml ×1支 透析用水或透析液采集 6 空安瓿 2ml ×1支 样本稀释 7 除热原吸头 200µl ×2包，1ml ×1包 移取样本及内毒素溶液 8 使用说明书 1份 操作说明 9 质检报告 1份 质检报告【需准备的材料和设备需准备的材料和设备】】除本试剂盒外需准备旋涡混合器、移液器、试管架、恒温水浴箱或恒温器（37±1℃）。
【用法用法】】1. 供试品溶液及对照制备1.1阴性对照溶液的制备即细菌内毒素检查用水（TRW ）。
1.2阳性对照溶液的制备一般为浓度为2λ的内毒素溶液（λ为鲎试剂的的标示灵敏度）。
例如：取效价为1EU/支的内毒素工作品（CSE ）１支，加入1.0ml 细菌内毒素检查用水（TRW ），在旋涡混合器震摇2-3min 得1.0EU/ml 内毒素阳性对照溶液。
1.3供试品溶液的制备用无热原采样瓶采集适量透析用水或透析液。
若样本的内毒素限值(L )为1.0EU/ml ，按鲎试剂的灵敏度λ及样本的内毒素限值L 计算供试品德最大有效稀释倍数(MVD )，M V D = L /λ当λ= 0.5 EU/ml ，L= 1.0EU/ml 时，M V D =2(倍),取样本0.7ml 于试剂盒配套辅液Ⅰ中，用旋涡混合器混匀1min 后，即为待测供试品溶液。
鲎内毒素(endotoxin)说明书
鲎内毒素内毒素（（endotoxin ）酶联免疫酶联免疫分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T0.03Eu/L – 0.8Eu/L使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定鲎血清、血浆及相关液体样本中内毒素（endotoxin ）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鲎内毒素（endotoxin ）水平。
用纯化的鲎内毒素（endotoxin ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒素（endotoxin ），再与HRP 标记的内毒素（endotoxin ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的内毒素（endotoxin ）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鲎内毒素（endotoxin ）浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（1.6Eu/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》
凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂英文名：（简称）汉语拼音：本品主要成份为因子、因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】．材料和设备选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
准备若干支ⅹ玻璃反应试管（若使用规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（±℃）。
．实验操作稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于试剂中，轻轻振摇至少至试剂完全溶解。
注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
检查操作取分装有鲎试剂溶液的×试管或复溶后的支规格的鲎试剂原安瓿支，其中支作供试品管，支作阴性对照管，支作阳性对照管，支作供试品阳性对照管。
每支供试品管加入供试品；阴性对照管加入检查用水；阳性对照管加入浓度为λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入含λ内毒素的供试品。
封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入±℃的恒温器中孵育±分钟，然后取出观察结果。
试管在孵育期间应避免任何的振动。
结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
【注意事项】.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。
. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在℃干烤至少，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
内毒素检测试管定量显色基质法缩写
内毒素检测试管定量显色基质法缩写鲎试验试剂盒(试管定量显色基质法)是利用人工合成的显色基质与鲎试剂发生显色反应，定量检测内毒素。
反应时间短至16分钟，满足快速检测的需要。
该显色基质鲎试剂不依赖凝血蛋白形成凝胶，抗干扰能力强。
配用偶氮染料灵敏度高，可避免有色样品的颜色对鲎试验的干扰。
在水浴锅中孵育，检测结果可用分光光度计或普通酶标仪读取。
它可以应用于背景颜色为浅黄色的样品，如血浆和血清样品。
配套鲎试验微生物快速检测系统ELx808IULALXH可实现鲎试验微量化，自动化及标准化。
一、标准曲线做不好？是何原因？每试剂盒可做两条标曲，分别为0.1--1.0EU/ml或者0.01--0.1EU/ml；现在以0.1--1.0EU/ml为例：相应内毒素吸光度值分别是0.1、0.25、0.5、1.0EU/ml左右；①仔细阅读说明书（特别是内毒素标准品说明书，如是血液样品，外加一份样本处理液说明书），确保操作步骤无误！②内毒素是否有充分振摇？纯手摇几下或者摇床摇匀效果均不佳，内毒素摇匀要用漩涡振荡器震荡。
③鲎试剂是否剧烈振摇？鲎试剂要在**钟内用完，所以先配置好内毒素工作标准品和样品，再溶解鲎试剂，鲎试剂榕溶解后轻轻混匀静置20秒。
④温育时间与温育温度是否有保证？培养箱温育效果不好，选择水浴。
控制温育时间就要求加快加样速度且避免污染（温育时，整个试管上盖上铝箔纸即可，无需封口膜封口以节约时间）二、样本如何检测？样本初次检测需要做预实验确定样本浓度范围，建议先做0.1-1.0EU/ml标准曲线来确定样本浓度，如果测出样本超过标曲上限则选择稀释样本，若超过样本下限，则选择另一条标曲即0.01--0.1EU/ml进行检测。
确定选用标准曲线后样本还需要做干扰实验验证实验的可靠性，详见说明书或中国药典。
三、血样选择什么试剂盒？血浆样本一般为含氮化试剂的鲎变形细胞溶解物试剂盒(试管法)，抗干扰能力强。
提醒客户在进行实验前用样品处理溶液进行处理。
终点显色法试剂盒的临床应用
市场 部
生产 部
研发 部
品保 部
后勤保 证部
细胞离心设备
冷冻干燥器
工人正在操作封口机
生产区域洁净区走廊
3、公司核心竞争力及历年荣誉
公司取得的5项国家发明专利及15项实用新型专利： 1）抗干扰鲎试剂的制备工艺 （专利号：2003101057615） 2） 隧道式干热灭菌设备测试试用内毒素指示剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000276） 3）一种临床检测试剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（专利号：ZL 2012100760693) 5）一种除液体中热源的凝胶及其制备方法和应用 （专利号：ZL 2014104575879）
一、细菌内毒素检测试剂盒在 临床的应用
1.细菌內毒素概念： a.革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是细菌内毒素； b.大多数致病原细菌为革兰氏阴性细菌。本法能快 速检测血液中细菌内毒素在临床上具有重大意义； 2.检测的目标：人体血液中的细菌内毒素 3.检测的样品：人体的血清或血浆。其中血清为主要对象。
我司应用细菌内毒素特异性试剂盒可以简便、快速测定血液中的细菌内毒素 含量是否超过临床限值，其检测结果可以为临床诊断提供重要依据。
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）细菌性感染疾病 3）原因不明的发热
适用科室： ICU病房
急诊科
感染科
儿科
烧伤科、呼吸内科、血液内科、肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、 移植科、妇产科 6.临床血清内毒素限值：≤0.03Eu/mL 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
脂
4.临床检测内毒素的意义
检测试剂盒使用方法
检测试剂盒使用方法检测试剂盒是一种用于检测特定物质或物质浓度的实验工具。
它是一种简便、快速和准确的检测方法，广泛应用于生物学、医学、化学、环境科学等领域。
下面将介绍一般检测试剂盒的使用方法，以及常见问题的解决方法。
1. 准备工作首先，需要将实验所需的试剂和仪器准备齐全。
确保试剂的储存条件符合要求，并检查试剂是否过期。
查阅使用手册了解试剂的性质和储存条件，并按照要求储存和使用。
2. 样品处理根据实验要求，将需要检测的样品进行预处理。
通常，样品需要经过稀释、混合、离心、加热等处理步骤，以确保结果的准确性和可靠性。
同时，还需注意防止样品和试剂受到污染，避免影响检测结果。
3. 样品添加根据实验要求，将预处理好的样品加入到试剂中。
加样时应注意使用专用的加样器或移液器，避免样品的损失和交叉污染。
按照试剂盒使用手册的指导，加入正确的体积和比例，并注意控制试剂的滴液速度和方法。
4. 反应和孵育加入样品后，根据试剂盒的要求进行反应和孵育。
有些试剂盒需要在特定温度下进行孵育，有些则需要在避光条件下进行。
在反应过程中，需保持反应体系的稳定性，避免外界因素对结果产生干扰。
5. 测量和读数反应完成后，根据试剂盒的要求进行测量和读数。
常见的测量方法包括比色法、发光法、荧光法等。
使用专用的测量仪器时，应根据仪器的使用手册进行操作，保证测量结果的准确性。
6. 数据分析和结果解释获得测量结果后，需要进行数据分析和结果解释。
根据试剂盒的使用手册，参考正常参比范围或标准曲线，对实验获得的数值进行解读和判断。
分析结果时需关注误差范围和结果可靠性，并将结果与参考范围进行比对。
7. 结果记录和报告根据实验要求，将结果记录下来，并制作实验报告。
报告应包括实验目的、方法、结果、讨论和结论等内容，以便于其他研究者参考和复现实验。
同时，还需注意遵守实验室的相关规定和法律法规，确保实验过程的安全性和合法性。
常见问题及解决方法：1. 实验结果不准确可能的原因包括：使用过期的试剂、样品处理不当、操作失误等。
[精华]鲎试剂试验方法
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
鲎试剂_精品文档
鲎试剂摘要：本文档介绍了鲎试剂的基本概念、用途、制备方法、相关研究进展及其在生物医学领域的应用。
鲎试剂是一种重要的化学试剂，因其在生物医学研究中的广泛应用而备受关注。
在本文中，我们将详细探讨鲎试剂的制备方法和相关合成技术，并介绍其在生物医学研究中的应用前景。
1. 引言鲎试剂是一类重要的化学试剂，广泛应用于生物医学研究领域。
鲎是一种海洋生物，其体内含有丰富的活性物质，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等多种生物活性，因此被广泛应用于药物研发和生物医学研究中。
2. 鲎试剂的制备方法2.1. 鲎采集与提取鲎是一种海洋底栖无脊椎动物，生长在海洋深处，常见于大洋的中、深层海域。
采集鲎主要有两种方法，一种是利用潜水艇、潜水器等工具直接采集；另一种是利用钓网、拖网等渔具进行捕捞。
采集到的鲎需要迅速进行冷冻保存，以保持其生物活性。
提取鲎试剂主要有两种方法，一种是通过高温高压提取，将鲎样品加入适量的溶剂中，在高温高压的条件下进行提取。
另一种是通过酸碱提取，将鲎样品进行酸碱处理，使其中的目标物质转化为带电离子，再通过溶剂分离。
2.2. 鲎试剂的纯化与分离提取得到的鲎试剂需要进行纯化和分离，以获得纯度较高的鲎试剂。
常用的纯化和分离方法包括反渗透、离心分离、柱层析等。
这些方法可以有效地去除杂质，提高鲎试剂的纯度。
2.3. 鲎试剂的结构鉴定经过纯化和分离后的鲎试剂需要进行结构鉴定，以确定其化学成分和结构。
常用的结构鉴定方法包括质谱分析、核磁共振等。
这些方法可以帮助研究者了解鲎试剂的化学性质，并为进一步研究和应用提供依据。
3. 鲎试剂的应用前景3.1. 鲎试剂在药物研发中的应用由于鲎试剂具有多种生物活性，因此被广泛用于药物研发领域。
鲎试剂可以作为药物候选物，通过对其进行结构优化和改造，开发出具有较高药效的新药。
同时，鲎试剂也可以作为药物控释系统的载体，实现药物的控制释放。
3.2. 鲎试剂在生物医学研究中的应用鲎试剂在生物医学研究中有着广泛的应用。
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显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法，含偶氮化试剂)
货号：T7571
保存：阴凉处，最佳2-8℃，避光贮存。
产品内容：
细菌内毒素工作品，5支
鲎试剂， 1.7ml/支，5支
显色基质，1.7ml/支，5支
偶氮化试剂1，10ml/支，5支
偶氮化试剂2，10ml/支，5支
偶氮化试剂3，10ml/支，5支
HCl(反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶
细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，3瓶
用途：
显色基质鲎试剂(Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate，CE TAL)用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。
原理：
鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。
在一定时间内，pNA 的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax=545nm），避免了供试
品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
检测限：
按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml两个区间(反应时间T1和T2见出厂检验报告)。
用法：
1.材料和设备
1.1试剂
鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2、偶氮化试剂3、HC l (反应终止剂)、细菌内毒素检查用水。
1.2器材
无热原试管、无热原吸头、旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架、恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。
注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。
2.供试品的贮存与预处理
备注：若供试品为血液类，请参照我厂配套血液相关处理试剂使用说明书。
2.1供试品的pH值应在6-8之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化
钠或0.1N盐酸调节。
2.2若供试品中可能存在鲎实验的干扰物质，处理参见【供试品的干扰试验】。
2.3若供试品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素
检测），需选用特异性鲎试剂（我公司提供）。
2.4若供试品为一些抗菌素如头孢类抗菌素和磺胺制剂会对偶氮染色剂产生偶联反应
而干扰偶氮化显色，需要选用不含偶氮化试剂的试剂盒（我公司提供）。
2.5若供试品的本底吸光度值大于0.5，必须对供试品进行稀释后再检测。
2.6若供试品颜色较深(例如溶血)，或在酸性条件下颜色加深(例如一些组织培养介质)，
必须设置供试品空白管以扣除供试品自身的颜色本底。
供试品空白管不加入鲎试剂，以等体积鲎试剂的溶剂(该处为细菌内毒素检查用水)代替。
其余操作同供试品管。
3.实验操作
3.1细菌内毒素标准溶液配制
标准曲线所采用的内毒素浓度可以为0.01，0.025，0.05，0.1EU/ml或0.1，0.25，0.5，1.0EU/ml。
稀释方法如下（以0.1，0.25，0.5， 1.0EU/ml为例）：取细菌内毒素工作品1支，按细菌内毒素工作品使用说明书稀释为10EU/ml的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/ml 的内毒素溶液，以1.0EU/ml的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1，0.25，0.5，1.0EU/ml 的浓度梯度。
配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。
表1内毒素标准溶液配制
内毒素浓度(EU/ml)10.50.250.1
加细菌内毒素检查用水(ml)00.50.750.9
加1EU/ml内毒素溶液(ml)10.50.250.1
3.2阴性对照为细菌内毒素检查用水。
鲎试剂：按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解，注意不要用旋涡混匀仪激烈振摇。
溶解的鲎试剂应在10分钟内用完。
显色基质：按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻振摇使显色基质完全溶解。
显色基质溶液可在无污染的条件下于4ºC贮存8小时以内。
偶氮化试剂1：按标示量加反应终止剂盐酸于偶氮化试剂1中，
偶氮化试剂2：按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2中，
偶氮化试剂3：按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3中，偶氮化试剂溶液可于4ºC贮存1周。
3.3实验操作
取无热原试管，加入100μl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液，或供试品。
再加入100μl鲎试剂溶液，混匀，37ºC温育T1分钟。
温育结束，加入100μl显色基质溶液，混匀，37ºC温育T2分钟。
温育结束，加入500μl偶氮化试剂1溶液，混匀，加入500μl偶氮化试剂2溶液，混匀加入500μl偶氮化试剂3溶液，混匀，静置5分钟，于545nm波长处读取吸光度值。
（见表2）
表2实验操作
阴性对照内毒素标准供试品
加细菌内毒素检查用水(μl)100
加内毒素标准溶液(μl)100
加供试品(μl)100
加鲎试剂(μl)100100100
混匀，37ºC温育T1分钟
加显色基质溶液(μl)100100100
混匀，37ºC温育T2分钟
加偶氮化试剂1溶液(μl)500500500
混匀，加偶氮化试剂2溶液(μl)500500500
混匀，加偶氮化试剂3溶液(μl)500500500
混匀，静置5分钟，于λ545nm读取吸光度值
(上述T1及T2见该批鲎试剂的出厂检验报告)
4.数据处理
建立标准曲线：Y=b X+a，其中Y为545nm处吸光度值，X为内毒素的浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。
当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：
1.标准曲线的相关系数r≥0.980，
2.标准曲线最低点的Y值大于阴性对照的Y值，
3.供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。
供试品的干扰试验：
供试品的干扰试验详见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰试验”。
当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须进行干扰试验，步骤如下：
1.选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度（设为λm），作为供试品干扰试验
中添加的内毒素浓度，配制含λm内毒素的供试品阳性对照，测量出该溶液的内毒素浓度，称为Cs；
2.测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度，称为Ct；
3.计算该试验条件下的回收率R＝（Cs–Ct）/λm×100%
4.当R在50%～200%之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。
5.当R在50%～200%之外，需对供试品进行系列稀释(稀释倍数不得超过最大有效稀
释倍数MVD)或进行其它处理消除干扰，每一稀释溶液都重复步骤1-3，直到内毒素的回
收率R在50%～200%之间。
选择回收率R最接近100%的稀释倍数进行内毒素检测。