小鼠cfos试剂盒使用方法

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小鼠血肌酐(S-Cr)ELISA检测试剂盒使用说明书

小鼠血肌酐(S-Cr)ELISA检测试剂盒使用说明书

小鼠血肌酐(S—Cr)ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠血肌酐(SCr)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。

往预先包被血肌酐(SCr)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的血肌酐(SCr)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避开任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存:假如样本收集后不适时检测,请按一次用量分装,冻存于20℃,避开反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃,使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白;依照说明书操作时样本已经稀释5倍,最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0S5)浓度依次为:0、7.5、15、30、60、120μmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

小鼠抗红细胞抗体elisa试剂盒样本处理及要求和操作步骤

小鼠抗红细胞抗体elisa试剂盒样本处理及要求和操作步骤

4.
请每次测定的同时做标准曲线,zui 好做复孔。如标本中待测物质含量
过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(乘以 n 乘以 5) 。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6. 底物请避光保存。 7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9. 本试剂不同批号组分不得混用。 tips:感谢大家的阅读,本文由我司收集整编。仅供参阅!
加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍) 孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒 后弃去, 如此重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震 荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD
(PH7.4) ,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实
验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

小鼠神经生长因子(NGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书【模板】

小鼠神经生长因子(NGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书【模板】

小鼠神经生长因子(NGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中神经生长因子(NGF)的含量。

试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围:请来电咨询保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠神经生长因子(NGF)水平。

用纯化的小鼠神经生长因子(NGF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入神经生长因子(NGF),再与HRP标记的神经生长因子(NGF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的神经生长因子(NGF)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠神经生长因子(NGF)浓度。

检测试剂盒使用方法

检测试剂盒使用方法

检测试剂盒使用方法检测试剂盒是一种用于检测特定物质的工具,广泛应用于医学、科研和生产领域。

正确的使用方法对于获得准确的检测结果至关重要。

本文将介绍检测试剂盒的使用方法,帮助您正确、高效地进行检测。

首先,使用前请仔细阅读使用说明书。

每种检测试剂盒都有相应的使用说明书,其中包含了使用方法、注意事项、存储条件等重要信息。

在使用前,请务必仔细阅读,并按照说明书上的步骤进行操作。

其次,准备好实验所需的材料和试剂。

在进行检测之前,需要准备好所有需要使用的材料和试剂,包括但不限于样品、标准溶液、试剂盒、吸管、移液器等。

确保所有材料都处于干净、完整的状态,以避免对实验结果造成影响。

接着,按照使用说明书上的步骤进行操作。

在进行检测时,按照使用说明书上的步骤进行操作,严格控制每个步骤的时间和操作方法。

在添加试剂、混合溶液、离心等操作时,需要注意操作的轻缓和均匀,避免产生气泡或悬浮物影响结果。

然后,注意实验环境的清洁和消毒。

在进行检测时,需要确保实验环境的清洁和消毒,避免外界因素对实验结果的影响。

使用无菌吸管、移液器等实验工具,避免交叉污染,保证实验结果的准确性。

最后,记录实验数据并进行结果分析。

在进行检测时,需要及时记录实验数据,包括但不限于各个步骤的操作时间、试剂的使用量、样品的浓度等信息。

在实验结束后,对实验数据进行分析,得出准确的检测结果,并根据结果进行相应的处理和解释。

总之,正确的使用方法对于检测试剂盒的准确性和可靠性至关重要。

在进行检测时,需要严格按照使用说明书上的步骤进行操作,注意实验环境的清洁和消毒,及时记录实验数据并进行结果分析。

希望本文能够帮助您更好地掌握检测试剂盒的使用方法,为您的实验工作提供帮助。

小鼠(Mouse)转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒说明书

小鼠(Mouse)转铁蛋白(TRF)ELISA试剂盒说明书

上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断小鼠(Mouse)转铁蛋白(TRF)ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。

往预先包被转铁蛋白(TRF)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的转铁蛋白(TRF)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成上海笃玛生物科技有限公司名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、0.5、1、2、4、8g/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

检测试剂盒使用方法

检测试剂盒使用方法

检测试剂盒使用方法检测试剂盒是一种用于检测特定物质或物质浓度的实验工具。

它是一种简便、快速和准确的检测方法,广泛应用于生物学、医学、化学、环境科学等领域。

下面将介绍一般检测试剂盒的使用方法,以及常见问题的解决方法。

1. 准备工作首先,需要将实验所需的试剂和仪器准备齐全。

确保试剂的储存条件符合要求,并检查试剂是否过期。

查阅使用手册了解试剂的性质和储存条件,并按照要求储存和使用。

2. 样品处理根据实验要求,将需要检测的样品进行预处理。

通常,样品需要经过稀释、混合、离心、加热等处理步骤,以确保结果的准确性和可靠性。

同时,还需注意防止样品和试剂受到污染,避免影响检测结果。

3. 样品添加根据实验要求,将预处理好的样品加入到试剂中。

加样时应注意使用专用的加样器或移液器,避免样品的损失和交叉污染。

按照试剂盒使用手册的指导,加入正确的体积和比例,并注意控制试剂的滴液速度和方法。

4. 反应和孵育加入样品后,根据试剂盒的要求进行反应和孵育。

有些试剂盒需要在特定温度下进行孵育,有些则需要在避光条件下进行。

在反应过程中,需保持反应体系的稳定性,避免外界因素对结果产生干扰。

5. 测量和读数反应完成后,根据试剂盒的要求进行测量和读数。

常见的测量方法包括比色法、发光法、荧光法等。

使用专用的测量仪器时,应根据仪器的使用手册进行操作,保证测量结果的准确性。

6. 数据分析和结果解释获得测量结果后,需要进行数据分析和结果解释。

根据试剂盒的使用手册,参考正常参比范围或标准曲线,对实验获得的数值进行解读和判断。

分析结果时需关注误差范围和结果可靠性,并将结果与参考范围进行比对。

7. 结果记录和报告根据实验要求,将结果记录下来,并制作实验报告。

报告应包括实验目的、方法、结果、讨论和结论等内容,以便于其他研究者参考和复现实验。

同时,还需注意遵守实验室的相关规定和法律法规,确保实验过程的安全性和合法性。

常见问题及解决方法:1. 实验结果不准确可能的原因包括:使用过期的试剂、样品处理不当、操作失误等。

小鼠酶联免疫检测试剂盒,小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书

小鼠酶联免疫检测试剂盒,小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书

小鼠酶联免疫检测试剂盒,小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明书国内权威的科研试剂供应商,乔羽生物专业经营进口分装和原装、国产的Elisa试剂盒,品质保证,技术严格,无效果退款退货。

Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置标准品稀释液:1.5ml×1瓶酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆上海乔羽生物专业供应:使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本组织因子途径抑制物(G-CSF)含量。

试验原理:G-CSF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知G-CSF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将G-CSF和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中G-CSF的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48小鼠份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的抗G-CSF抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自备材料1.蒸馏水。

2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

小鼠总胆红素TB检测试剂盒说明书

小鼠总胆红素TB检测试剂盒说明书

小鼠总胆红素(TB)检测试剂盒说明书该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测血液,细胞、组织内的特异性CD40 抗原。

该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。

在所用的CD40 一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,最后加入HRP-SA,形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物,显微镜下观察成像。

小鼠总胆红素(TB)检测试剂盒试剂盒所含试剂:试剂A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(选用)试剂B 封闭缓冲液(封闭用)20 mL试剂C (原装进口分装)已稀释的即用型CD40 一抗(2.5ml)试剂D (原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG 1 支(浓度1.5 mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液20ml试剂E HRP-SA 复合物1 支(浓度1 μM,稀释比1:50~1:200)100 μL试剂F DAB 显色液5ml用户自备试剂:1.10mM TBS(pH7.2~7.4)三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH 值至7.2~7.4,最后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween 20(0.05%体积比)2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH 值至6.0,最后定容至1000mL或:0.5M EDTA 修复液(pH8.0)EDTA·2H2O 186.1g加蒸馏水700mL,用10mM NaOH 调pH 值至8.0,最后定容至1000Ml3. 缓冲甘油封固剂10 mL4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;2.脱蜡:切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;3.水化:切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85% 乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O 洗2×2min;4.抗原修复:根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第5 步封闭。

鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒使用方法

鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒使用方法

鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒使用方法鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒说明书产品特征:灵敏度高:能对低拷贝或多样性模板进行定量。

特异性强:采用热启动酶的激活机制,抑制非特异性扩增。

重复性好:扩增曲线重合度高,受干扰影响少。

扩增效率高:扩增曲线Ct值低,起峰快,效率高。

原理:所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

鼠疫耶尔森菌鼠疫杆菌PCR检测试剂盒需要自备的器材:1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、20 ℃冰箱、可调移液器(2 L、20L、200 L、1000 L)。

2.耗材:荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水处理的灭菌离心管、吸头(10 L、200 L、1000 L)、灭菌双蒸水。

具有下列特点:1.产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。

2. 引物经过优化,特异性强。

预期的 PCR 产物长度为 560 bp。

3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。

4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。

检测方法:1.Ⅰ法:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加wan全同步。

定量PCR扩增荧光曲线图PCR产物熔解曲线图2.TaqMan探针法:探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时,Taq酶的5’3’外切酶活性将探针酶切降解,产品仅用于科研使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成wan全同步。

CFSE说明书

CFSE说明书

CellTrace™ CFSE 细胞增殖试剂盒贮存条件:• ≤–20ºC 避免反复冻融,开盖前放置至室温。

• 干燥• 避光按要求保存,DMSO和固体CFSE6个月稳定,试剂溶液尽快使用。

分子量:557.47Ex/Em:492/517 nm检测:荧光显微镜FITC滤片检测或流式488nm激发光检测。

CFSE (carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester 羧基荧光素双乙酸盐,琥珀酰亚胺酯) 被动扩散进入细胞,其本身是无色无荧光的,被细胞内的酯酶分解后产生高强度的荧光,该荧光产物与胞内的氨基结合长时间留存于细胞内并可被乙醛固定。

未结合的试剂与副产物扩散至胞外基质中,被洗去。

传代或胚胎分裂分析,CFSE与赖氨酸侧链或其他氨基基团反应,共价偶联至细胞内和细胞表面的蛋白,细胞分裂时被平均分配至子代细胞,荧光强度降到母代细胞的一半。

适合用于胞内示踪,在细胞分裂或融合后分配至子代细胞中,并不会被转移至邻近的细胞。

在小鼠淋巴细胞迁移实验中,CFSE注射进入小鼠体内后,标记的淋巴细胞的检测可长达8周。

肝内注射荧光显微镜定位检测可长达20天。

试剂盒成分• CellTrace™ CFSE (Component A), 10瓶,每瓶50 μg• DMSO (Component B), 0.5 mL使用浓度:一般来说,长时间染色(超过三天)或快速分裂为5~10uM,活力分析等短时间分析为0.5~5uM。

,荧光显微镜为25uM。

优化并使用尽可能低的浓度以保持细胞的正常生理状态。

不要使用含氨基的缓冲液或赖氨酸涂层的玻片,防止和CFSE发生反应。

试剂准备:用前制备CFSE的5mM贮存液,一瓶A溶于18ul DMSO(B)中。

流式分析:已用于检测B细胞和T细胞的分裂。

用前准备:样本制成单细胞悬液;含0.1%BSA的PBS;5mM的CFSE贮存液;细胞培养基;1.1重悬细胞于预温的PBS/0.1%BSA,浓度1×106/ml。

试剂盒使用方法

试剂盒使用方法

试剂盒使用方法在科学研究和实验室工作中,试剂盒是必不可少的工具之一。

它们通常包含了一系列必需的化学试剂和材料,用于特定的实验目的。

试剂盒的使用方法需要严格遵守,以确保实验结果的准确性和安全性。

下面将介绍试剂盒的使用方法及注意事项。

一、准备工作。

在使用试剂盒之前,首先需要做好准备工作。

这包括检查试剂盒的内容物是否完整,是否有过期的试剂,以及准备好其他可能需要用到的仪器和材料。

同时,还需要阅读试剂盒的使用说明书,了解每种试剂的性质、用途和操作方法。

二、实验操作。

1. 取出所需试剂,根据实验需要,取出试剂盒中所需的试剂和材料。

在取用试剂时,要注意避免交叉污染,使用专门的试剂枪或移液器,并确保每种试剂使用前都已标注清楚。

2. 操作台面清洁,在进行实验操作前,需要确保操作台面干净整洁。

可以使用70%的乙醇或其他消毒液对操作台面进行清洁,以防止外来污染对实验结果产生影响。

3. 操作步骤,根据试剂盒的说明书和实验设计,按照正确的操作步骤进行实验。

在操作过程中,要注意避免试剂的飞溅和接触皮肤、眼睛等部位,必要时要佩戴防护眼镜、手套等个人防护用具。

4. 试剂混合,在一些实验中,需要将多种试剂进行混合使用。

在混合试剂时,要注意按照正确的比例进行混合,并在混合后立即使用,避免试剂发生化学反应而影响实验结果。

5. 清洁工作,实验结束后,要及时清理实验台面和工具,将未使用完的试剂妥善保存。

对于有毒、腐蚀性的试剂,要按照规定的方法进行处理,避免对环境和人体造成危害。

三、注意事项。

1. 试剂盒存放,试剂盒应存放在干燥、阴凉、通风良好的地方,避免受潮、受热或受阳光直射。

另外,还要注意避免试剂与空气接触,以免发生化学反应而影响试剂的质量。

2. 使用期限,试剂盒中的试剂通常都有使用期限,过期的试剂可能会影响实验结果。

在使用试剂盒之前,要先检查试剂的使用期限,确保试剂的质量符合要求。

3. 个人防护,在使用试剂盒时,要注意个人防护,避免试剂的直接接触和吸入。

CFSE细胞增殖检测方法

CFSE细胞增殖检测方法
CFSE 细胞增殖检测试剂盒
产品组成:
产品编号
BB-4211-1
规格
500-5000 assays
试剂 A:CFSE 荧光探针
1瓶
试剂 B:CFSE 溶解液
1ml
试剂 C:CFSE 细胞SE须-20℃避光保存,注意防潮。
BB-4211-2 1000-10000 assays
和干燥剂一起用塑料袋密封,≦-20℃冷冻保存。 CFSE 工作液应现配现用,不能提前配制,因为 CFSE 吸水会分解,影响染色效果。 CFSE 配制成储存母液后宜在一个月内使用完毕,最长不宜超过 2 个月。CFSE 易被水解,在水溶
液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在 许可的时间范围内的。 CFSE 溶解液在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以 37 ℃水浴片刻至全部融解后使用。
2瓶 1ml*2 100ml
组份编号
42110A 42110B 42110C
储存条件: -20℃避光保存。
有效期: 六个月。
注意事项: ● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管 底,避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。 ● 需长时间保存可-20℃避光保存。 ● CFSE 标记细胞仅需 5-15 分钟即可完成。对于不同细胞,最佳标记时间需自行摸索。 正式实验前,建议先做几个孔摸索染色浓度和加入 CFSE 试剂后的培养时间。 ● 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

干细胞因子(SCF)检测试剂盒 SEA120Mu使用说明书

干细胞因子(SCF)检测试剂盒 SEA120Mu使用说明书

SEA120Mu96T干细胞因子(SCF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物:小鼠使用说明书仅供体外研究使用,不用于临床诊断!第12版(2016年05月修订)[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中SCF含量。

[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板(预包被)196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液(30×)1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L(或1×)磷酸缓冲盐(PBS),pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。

请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C,其余试剂请置于4o C保存备用。

2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,此外,请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好,并拉紧密封铝箔袋,置于-20o C保存。

注意:试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。

产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。

[标本的采集与保存]1、血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜,然后1,000×g离心20分钟,取上清即可,将上清置于-20o C或-80o C保存,避免反复冻融。

小鼠催产素试剂盒安全操作及保养规程

小鼠催产素试剂盒安全操作及保养规程

小鼠催产素试剂盒安全操作及保养规程小鼠催产素试剂盒是一种高灵敏度的实验试剂,常用于孕期催产、产后出血和治疗宫颈癌等领域。

正确认识和掌握小鼠催产素试剂盒的使用方法及注意事项,对于提高实验效率和减少实验风险具有重要意义。

本文将介绍小鼠催产素试剂盒的安全操作及保养规程,希望能对实验操作人员提供参考。

试剂盒安全操作规程1. 实验前准备在进行实验前,实验人员应仔细阅读小鼠催产素试剂盒的说明书,了解试剂的性质、用途和注意事项。

在实验过程中应佩戴实验室专用实验服,并戴上手套、护目镜等个人防护用品,以保证实验的安全性。

2. 试剂操作小鼠催产素试剂盒操作时应遵循以下步骤:1.准备好所需的实验试剂和设备,并进行消毒处理。

2.取出试剂盒,根据说明书的要求从冰箱中取出试剂,并迅速解冻。

3.解冻后,将所需试剂移至干净的试管或小型容器中。

4.根据说明书的要求添加所需样品及试剂,搅拌均匀。

5.加入显色剂,并按说明书提示进行显色和测量。

6.测量结果应记录并保存。

7.操作完成后,丢弃废弃物,并将使用过的试剂及设备归位。

3. 实验室安全设施实验室应配备相应的安全设施,包括通风设备、紫外线杀菌灯、消毒液等。

在实验过程中,加强通风换气,保持实验室干净整洁。

实验室周围应贴有警示标识,以提醒其他人员注意实验室内的实验操作。

4. 注意事项小鼠催产素试剂盒操作时,需要注意以下事项:1.避免直接接触试剂,切忌食用、吸烟等有可能污染试剂的行为。

2.注意试剂的保存温度及保存期限,严禁使用过期试剂。

3.在试剂操作过程中,严禁离开实验室。

如有紧急情况需要离开,应先关停仪器,归还试剂,并关闭门窗以免外来污染。

4.使用小鼠催产素试剂盒时,应尽量避免与其他试剂混用。

试剂盒保养规程小鼠催产素试剂盒的保养工作,直接影响着试剂的使用效果和寿命。

以下是小鼠催产素试剂盒的保养规程:1.试剂保存试剂应存放于常温下,避免受阳光直射。

严禁暴露于高温或低温环境中。

同时,试剂还要避免与其他试剂发生反应,应与其他试剂分开存放,以免受到污染和变质。

小鼠脾细胞分离+CFSE染色步骤

小鼠脾细胞分离+CFSE染色步骤

小鼠脾细胞分离+CFSE染色步骤小鼠脾脏淋巴细胞分离与CFSE染色步骤实验材料:小鼠1只、组织剪1把、镊子2把、75%酒精、小鼠固定板、1640培养液(10%FBS,1%双抗)、含0.1%FBS的PBS溶液(无菌)、PBS溶液(无菌)、ACK溶液(无菌)、移液管、枪头、组织研磨棒(无菌)、12孔细胞培养板、15mL离心管、300目尼龙网(无菌),细胞计数板,手术台布。

实验前准备工作:做好上述实验器具的灭菌工作;将手术台布裹在小鼠固定板上,喷75%酒精,组织剪和镊子用75%酒精浸泡后置于生物安全柜中紫外照射30min;实验步骤:1. 取一只6-8周小鼠颈椎脱臼处死后,将其全部浸泡于75%酒精中5min。

2. 取出小鼠将其固定于固定板上,用组织剪和镊子沿小鼠腹白线剪开腹腔,拨开小肠在腹腔左上方紧贴小肠部位取褐红色长条型脾脏,用组织剪剪开筋膜同时不要把脾脏剪破,将取下的脾脏用PBS冲洗两遍,剪去脾脏上连接的结缔组织。

3. 将脾脏转移入组织研磨棒中,向其中加入2mLPBS溶液后研磨三下,尽量不残留较大组织块;再用3ml PBS冲洗研磨棒后,将脾脏研磨液经300目尼龙网过滤至15mL离心管中,再用2ml PBS冲洗研磨器内壁,同样过滤至15mL离心管中,离心500g,5min。

4. 弃上清后,加入2mL 常温ACK,轻微吹打,裂解红细胞1min 后加入等体积(2mL)PBS 终止裂解,轻微吹打细胞混匀后离心500g,5min。

CFSE染色开始:5. 弃上清,用4ml PBS(0.1%FBS)重新混匀细胞,反复吹打为单细胞悬液,再用300目尼龙网过滤。

取10μL细胞液于细胞计数板上计数,并将细胞浓度调至1.0×107/ml。

6. 提前将CFSE按照说明书配成5mM母液并2ul分装储存于-80冰箱备用,其工作浓度为0.5-25μM.7. 分出一部分细胞加入24孔板中,用于做CFSE空白对照8. 2μlCFSE + 6ml浓度1.0×107/ml的细胞,工作浓度约为1.67μM,37℃,10min,避光。

小鼠癌胚抗原(CEACD66)ELISA试剂盒使用说明书

小鼠癌胚抗原(CEACD66)ELISA试剂盒使用说明书

5、一次性试管6、吸水纸【小鼠癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒操作步骤】1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。

7、温育:重复4的操作。

8、洗板:重复5的操作。

9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液50μL,37℃避光显色15min。

10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。

最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【小鼠癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒样本要求】1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP )的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

【小鼠癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒注意事项】1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

赛默飞世尔 - CF1 小鼠胚胎成纤维细胞,辐照版 - 使用说明书

赛默飞世尔 - CF1 小鼠胚胎成纤维细胞,辐照版 - 使用说明书

CF1 Mouse Embryonic Fibroblasts, Irradiated Catalog Numbers A34180 and A34181Pub. No. MAN0016852 Rev.1.0WARNING! Read the Safety Data Sheets (SDSs) and follow the handling instructions. Wear appropriate protective eyewear, clothing, and gloves. Safety Data Sheets (SDSs) are available from /support.Product descriptionIrradiated CF1 Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs) are feeder cells that are ideal for supporting the culture of healthy undifferentiated human and mouse embryonic stem cells (ESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs). These widely-used MEF cells are isolated from outbred CF1 mice, expanded for up to three passages, mitotically inactivated by gamma irradiation, and rigorously tested to ensure safety and performance. These ready-to-use MEFs help save time and enable researchers to culture feeder-dependent ESCs and iPSCs with confidence.Contents and storageRequired materials not suppliedUnless otherwise indicated, all materials are available through . MLS: Fisher Scientific () or othermajor laboratory supplier.Culture conditionsMedia: DMEM, high glucose, GlutaMAX™ Supplement, pyruvate, supplemented with 10% Fetal Bovine Serum, embryonic stem cell-qualified.Culture type: AdherentRecommended substrate (optional): Attachment Factor, which is a sterile 1× solution containing 0.1 % gelatin.Temperature range: 36°C to 38°CIncubator atmosphere: Humidified atmosphere of 5% CO2 in air.Procedural guidelinesFollow the guidelines below to use inactivated mouse embryonic fibroblasts (MEFs) as feeder layers to culture mouse and human ESCs and iPSCs.•All solutions and equipment that come in contact with thecells must be sterile. Always use proper aseptic technique and work in a laminar flow hood.•MEFs should be plated ~24 hours in advance.•After thawing, transfer MEFs into pre-warmed medium.•Plate MEFs on culture vessels coated with Attachment Factor Protein (1X) solution.•For best results, use MEF dishes or plates the day afterseeding and culture with ESCs or iPSCs for up to 4 moredays.For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.Before you beginBefore starting experiments, make sure to have some frozen ESC or iPSC stocks on hand.Coat culture vessels with Attachment Factor1.Cover the whole surface of each culture vessel withAttachment Factor (AF) solution.2.Incubate the vessels for 30 minutes at 37°C or for 2 hours atroom ing sterile technique in a laminar flow culture hood,completely remove the AF solution from the culture vessel by aspiration.Note: It is not necessary to wash the culture surface before adding cells or medium.e the coated vessels immediately or store them at roomtemperature for up to 24 hours.Prepare MEF MediumPrepare 500 mL of MEF Medium by mixing the following components (pre-warmed in a 37°C, 5% CO 2 incubator):Thaw MEFs1.Remove the cryovial containing inactivated MEFs from theliquid nitrogen storage tank.2.Briefly roll the vial between hands to remove frost, and swirlit gently in a 37°C water bath.3.When only a small ice crystal remains in the vial, remove itfrom water bath. Spray the outside of the vial with 70%ethanol before placing it in the cell culture hood.4.Pipet the thawed cells gently into a 50-mL conical tube.5.Add 10 mL of pre-warmed MEF Medium dropwise to thecells while gently swirling the conical tube. Gently mix by pipetting up and down.Note: Adding the medium slowly helps the cells to avoid osmotic shock.6.Transfer entire cell suspension to a 15-mL conical tube andcentrifuge at 200 × g for 5 minutes.7.Aspirate the supernatant and resuspend the cell pellet in anappropriate volume of pre-warmed MEF e an appropriate volume of the cell suspension todetermine the viable cell number using your method of choice.Plate MEFs1.Aspirate the gelatin solution from the AF-coated culturevessels, as applicable.2.Add the appropriate amount of MEF Medium into eachculture vessel.3.Add the appropriate amount of MEF suspension into eachculture vessel.Note: The appropriate cell density should be optimized for the specific application. We recommend 3.0 × 104 MEFs/cm 2as a good starting point, but the typical range is 2.0 × 104 to 5.5 × 104 MEFs/cm 2.4.Move the culture vessels in several quick back-and-forth andside-to-side motions to disperse the cells across the surface of the vessels.2CF1 Mouse Embryonic Fibroblasts, Irradiated User Guide5.Incubate the cells in a 37°C incubator with a humidifiedatmosphere of 5% CO2.e the MEF culture vessels the day after plating.Expected resultsFigure 1 Irradiated CF1 Mouse Embryonic Fibroblasts Irradiated CF1 MEFs were cultured in DMEM supplemented with FBS. The image was taken with a 10x objective.Explanation of symbolsLimited product warrantyLife Technologies Corporation and/or its affiliate(s) warrant their products as set forth in the Life Technologies' General Terms and Conditions of Sale found on Life Technologies' website at /us/en/home/global/terms-and-conditions.html. If you have any questions, please contact Life Technologies at /support.Manufacturer's address: Made in USA by MTI-GlobalStem | 7335 Executive Way | Frederick, MD 21704 | USAThe information in this guide is subject to change without notice.DISCLAIMER: TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, LIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) WILL NOT BE LIABLE FOR SPECIAL, INCIDENTAL, INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE, OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING YOUR USE OF IT.Important Licensing Information: This product may be covered by one or more Limited Use Label Licenses. By use of this product, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.©2017 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified./support | /askaquestion10 March 2017。

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠c-fos试剂盒使用方法检测范围:96T20pg/ml-480pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。

用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-fos,再与HRP标记的c-fos抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。

试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒使用说明

小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒使用说明

小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒使用说明货号:P8550规格:200mL/kit保存:18℃-25℃保存,有效期两年。

小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒易感染细菌,需无菌条件下操作。

无菌条件下操作,启封后常温保存。

如4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

试剂盒内容:试剂A200mL试剂F(赠品)200mL样本稀释液(赠品)200mL清洗液(赠品)200mL红细胞裂解液(赠品)100mL说明书1份操作步骤:1.首先制备骨髓单细胞悬液。

2.取一支15mL离心管,小心加入试剂A。

3.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面之上,400-550g,离心20-30min(注:如改变血液样本及分离液用量,需相应调整离心力及离心时间,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果。

)4.离心后,离心管中将出现两层环状乳白色细胞层,上层为单个核细胞,下层细胞为中性粒细胞。

5.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层,如有红细胞混杂则加入适量的红细胞裂解液,将红细胞裂解,即得目的细胞。

6.将获得的细胞层移至另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL清洗液,混匀细胞。

7.250g,离心10min。

8.弃上清。

9.用5mL清洗液重悬所得细胞。

10.250g,离心10min。

11.重复8、9、10,弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。

注意事项:1.全程过程样本、试剂及实验环境均需要在20℃±2℃的条件下进行。

为获得最佳的实验结果,最好在取血后2h内进行实验。

2.本实验最好不使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理后的玻璃制品,因为静电作用会导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。

3.分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本量时,分离效果更佳。

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小鼠c-fos试剂盒使用方法
检测范围:96T
20pg/ml-480pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。

用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-fos,再与HRP标记的c-fos抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。

试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶
2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(960pg/ml)0.5ml×1瓶
3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份
5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张
6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。

480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

测定应在加终止
液后15分钟以内进行。

操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月。

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