1 猪瘟诊断技术

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猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标猪瘟(又称非洲猪瘟)是一种由非洲猪瘟病毒引起的严重传染病,对猪的养殖业造成了巨大的威胁。

为了有效地控制猪瘟的传播和预防,各国不断加强对猪瘟的诊断技术研究和标准制定。

2000字篇幅有限,以下是一份关于猪瘟诊断技术国标的简要介绍。

一、猪瘟诊断技术国标概述猪瘟诊断技术国标是指对猪瘟病毒进行诊断和检测的技术标准,包括样品采集、实验室检测方法、结果判定等内容,目的是为了准确、快速地发现猪瘟病毒,有针对性地采取控制和预防措施。

二、猪瘟诊断技术国标的内容1. 标本采集标准猪瘟诊断技术国标应该包括猪瘟病毒检测所需标本的采集标准,例如血清、组织、粪便等标本的采集方法和保存条件,以确保样本质量和稳定性。

2. 实验室检测方法猪瘟诊断技术国标应包括常用的实验室检测方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)等,这些方法可以快速、高效地检测猪瘟病毒的存在。

3. 结果判定标准针对不同的检测方法,猪瘟诊断技术国标应该包括结果判定的标准,例如阳性、阴性结果的判定标准,以及对于不同程度的阳性结果的进一步确认和分析标准。

三、猪瘟诊断技术国标的重要性1. 保障猪瘟诊断的准确性和标准化猪瘟诊断技术国标的制定可以统一猪瘟检测的标准和流程,确保诊断结果的准确性和可比性,降低误诊率和漏诊率。

2. 为猪瘟病毒监测提供技术支持猪瘟诊断技术国标的推广应用可以为猪瘟病毒的监测提供必要的技术支持,及时掌握疫情动态,采取有效的防控措施。

3. 促进国际交流与合作猪瘟诊断技术国标的制定和推广可以促进国际间关于猪瘟防控技术的交流与合作,提高我国的猪瘟防控技术水平。

四、猪瘟诊断技术国标的展望猪瘟诊断技术国标的制定应该结合我国国情和疫情特点,同时借鉴国际上先进的经验和成果,不断完善和更新技术标准,适应猪瘟防控工作的需要。

猪瘟诊断技术国标是猪瘟防控工作的重要基础,其制定和推广将有助于提高我国猪瘟防控技术水平,有效控制猪瘟病毒的传播,保障猪产业的健康发展。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗猪瘟,又称非洲猪瘟,是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病,主要感染猪类动物。

该病毒属于病毒科学家所称的“疣状病毒”,主要在猪的皮肤和淋巴系统引起病变。

由于其高度传染性和致命性,猪瘟对养猪业造成了严重的经济损失。

猪瘟的诊断通常通过病毒分离和鉴定,以及猪瘟抗体检测来进行。

病毒分离和鉴定是通过从疑似病猪体内收集样本,如血液、组织、粪便等,然后通过相关实验室技术将病毒分离出来,并确定其类型和亚型。

猪瘟抗体检测是通过检测猪体内产生的抗体,判断猪是否感染了猪瘟病毒。

猪瘟的治疗主要是通过预防为主,目前尚无特效药物可用于治疗猪瘟。

预防猪瘟的有效方法包括:1. 疫苗接种:猪瘟疫苗是预防猪瘟的主要手段,通过接种疫苗可以提供免疫力,帮助猪体内抵抗病毒的入侵。

目前已经有多种猪瘟疫苗可供选择,养殖户可以根据情况选择合适的疫苗进行接种。

2. 定期消毒:猪瘟病毒容易通过病死猪体、粪便、尿液等途径传播,定期对养猪场进行彻底的清洁消毒工作是预防疾病传播的重要措施之一。

消毒时应选择有效的消毒剂,并按照标准的消毒程序进行。

3. 严格管理:养殖户应严格管理养猪场的生物安全,限制野猪进入养猪场,控制养猪场内外动物的接触,确保猪舍的通风、温度和湿度适宜,严禁随意引进猪只。

4. 早期发现和隔离:一旦发现疑似猪瘟病例,应立即隔离疑似感染的猪只,并报告当地卫生部门进行相关检测和处理。

养殖户也要密切关注猪只的健康情况,及时发现任何异常症状,并采取相应的措施。

猪瘟的诊断和治疗是一个综合的过程,其中诊断包括病毒分离鉴定和猪瘟抗体检测,治疗则主要是通过预防为主,采取疫苗接种、定期消毒、严格管理和早期发现隔离等措施,控制疾病的传播和影响,保障养猪业的健康发展。

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标
本标准规定了猪瘟的诊断技术要求,包括标准适用范围、标本采集和保存、诊断方法等方面。

本标准适用于猪瘟的诊断和防控。

1.标准适用范围
本标准适用于猪瘟的诊断和监测,包括临床诊断、实验室诊断和流行病学调查。

2.标本采集和保存
2.1标本采集
2.1.1采集对象:发病猪、可疑感染猪、疫情处置相关人员。

2.1.2采集部位:血液、组织器官、排泄物等。

2.1.3采集方法:根据需要选择合适的采集方法,如针刺、剪毛、刮取等。

2.2标本保存
2.2.1保存液:使用无菌容器保存,容器内应加入适量无菌生理盐水或70%酒精等消毒溶液。

2.2.2保存温度:低温冷藏(4℃左右)或冷冻(-20℃以下)。

2.2.3保存时间:尽快送检,不得超过72小时。

3.诊断方法
3.1临床诊断
3.1.1临床症状观察:观察发病猪的临床表现,如体温升高、食欲减退、便秘、腹泻等。

3.1.2病理变化观察:对死亡猪进行病理剖检,观察组织器官的病变情况。

3.2实验室诊断
3.2.1病毒分离培养:采集发病猪的组织器官,在细胞培养基上进行病毒分离培养,观察细胞病变情况。

3.2.2抗原检测:使用抗体检测试剂盒,对发病猪的血清进行抗原检测,观察抗体水平变化。

3.2.3核酸检测:采集发病猪的组织器官或血液样本,进行核酸检测,观察病毒基因序列变化。

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标猪瘟,又称非洲猪瘟,是一种由非洲猪瘟病毒引起的严重传染病,也是目前全球范围内猪类养殖业面临的重大危机之一。

针对猪瘟的诊断技术的国际标准对猪瘟的诊断技术在疫情的控制和防治中起着重要的作用。

为了规范猪瘟的诊断技术,保障猪类养殖业的健康发展,各国在不同国际组织下积极开展了猪瘟诊断技术的标准制定工作。

下面将对猪瘟诊断技术的国际标准进行详细介绍。

1. 诊断样本的采集和处理猪瘟病毒主要存在于病猪的血液、组织和分泌物中,因此对于猪瘟的诊断需要采集患病猪的相关样本。

国际标准中通常规定了猪瘟诊断样本的采集、保存和运输方法,以确保样本的完整性和可靠性。

还包括了对于患病猪的处理要求,防止交叉污染。

2. 实验室诊断技术实验室诊断技术是猪瘟诊断的核心部分,国际标准对于猪瘟的实验室诊断技术进行了详细的规定。

其中包括了对于猪瘟病毒的检测方法、鉴定方法和鉴别方法,以及对于实验室设备和试剂的要求。

国际标准还规定了猪瘟诊断的结果判定准则和结果报告格式,确保诊断结果的准确性和可比性。

3. 质量管理体系为了确保猪瘟诊断技术的可靠性和准确性,国际标准通常还包括了对于实验室质量管理体系的要求。

这些要求包括了实验室设施和设备的管理、人员素质和能力的要求、实验室操作规范等,以确保诊断结果的可信度和稳定性。

4. 样品的保护国家对诊断结果的保护是非常重要的,因为这关系到疫情的控制和防治。

因此在国际标准中对样品的保护也进行了详细的规定,主要包括了样品的运输、保存、处理等要求,以确保样品的完整性和可靠性。

国际标准对猪瘟诊断技术的规范化给猪瘟的诊断技术提供了规范和保障,有助于提高猪瘟的诊断水平,促进猪类养殖业的健康发展。

通过国际标准的制定和执行,能够加强各国之间在猪瘟疫情防控和技术交流的合作,有利于共同应对猪瘟疫情带来的挑战,保障全球猪类养殖业的可持续发展。

非洲猪瘟的监测与诊断技术

非洲猪瘟的监测与诊断技术

非洲猪瘟的监测与诊断技术非洲猪瘟(African Swine Fever, 简称ASF)是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病,对猪的养殖业造成了巨大的经济损失。

为了及时监测和准确诊断非洲猪瘟,科学家们开发出了一系列的监测与诊断技术。

本文将介绍非洲猪瘟的监测与诊断技术,并探讨其在防控非洲猪瘟中的作用。

一、病毒检测技术1. PCR技术聚合酶链反应(PCR)是一种常用的病毒检测技术,它通过特异性引物和酶的催化作用,扩增样本中的病毒核酸。

PCR技术能够快速、准确地检测非洲猪瘟病毒的存在,且对病毒精确度高,检测时间短,是非洲猪瘟监测中的重要工具。

2. ELISA技术酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的病毒抗体检测技术。

ELISA技术利用酶与病毒抗原或抗体结合的特异性反应,通过比色反应或荧光反应判断样品中是否存在非洲猪瘟病毒抗体。

ELISA技术具有简单、快速、灵敏度高的特点,在非洲猪瘟的早期监测和诊断中起到了重要的作用。

二、病理学检测技术1. 组织病理学检测组织病理学检测是通过对猪体组织进行病理学检查,确定是否存在非洲猪瘟的一种技术。

该技术可通过显微镜观察病变组织的形态学改变,如出血、水肿、坏死等,进一步确定非洲猪瘟的病情。

2. 免疫组织化学检测免疫组织化学检测是利用特异性抗体与组织中的抗原结合来检测非洲猪瘟病毒的存在。

该技术具有高度特异性和灵敏度,可以帮助鉴定非洲猪瘟的病毒类型和分布范围。

三、流行病学调查技术1. 临床症状观察通过对猪群的临床症状进行观察,可以初步判断是否存在非洲猪瘟的流行。

非洲猪瘟的临床症状包括发热、食欲减退、呕吐、腹泻、呼吸急促等。

准确观察和记录症状,能够帮助科学家对非洲猪瘟进行快速且准确的流行病学调查。

2. 血清学调查血清学调查通过对猪群的血清标本进行病毒抗体或病毒核酸的检测,了解猪群中非洲猪瘟的感染率和传播情况。

血清学调查是非洲猪瘟监测的重要手段之一,可以帮助科学家及时采取控制措施,防止病毒的扩散。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗
猪瘟,又称猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),是一种高度传染的猪类疾病,主要通过病毒和空气传播。

猪瘟的诊断主要通过临床观察、病毒分离和检测、抗体检测等方法进行。

1. 临床观察:猪瘟的临床症状主要表现为咳嗽、呼吸困难、发热、流鼻涕、倒地、
流产、新生猪仔死亡等。

典型的临床症状可作为初步诊断的依据。

2. 病毒分离和检测:通过采集病死猪或病猪的血液、组织等样本,进行病毒的分离
和检测。

常用的方法包括病毒培养、PCR(聚合酶链反应)等。

3. 抗体检测:通过采集猪的血清样本,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法进行
抗体检测,判断猪是否感染了猪瘟病毒。

猪瘟的治疗目前尚无特效药物,主要是通过提高免疫力和预防疫情的蔓延来控制病
情。

1. 免疫增强:给猪注射猪瘟疫苗可以提高猪的免疫力,减轻病情。

疫苗接种应该在
猪舍消毒后进行,采取弱毒苗接种的方法。

2. 病毒抑制剂:目前已有一些抗猪瘟病毒的药物在临床实践中使用,如金刚烷胺、
阿托伐他汀等。

不过,这些药物的疗效尚有争议,需要更多的研究来确定其治疗效果。

3. 防控措施:采取严格的生物安全措施,加强猪舍的消毒与隔离,控制病情的扩散。

注意病毒的传播途径,减少猪之间的接触,避免交叉感染。

猪瘟的诊断主要依靠临床观察和病毒检测,而治疗则主要通过疫苗接种、免疫增强和
生物安全措施来控制病情。

尚需进一步研究和探索更有效的治疗方法。

猪瘟诊断标准

猪瘟诊断标准

猪瘟诊断标准
猪瘟的诊断标准主要包括以下方面:
1. 临床特征:患有猪瘟的病猪体温明显升高,通常达到40.0~4
2.5℃,食欲不振,精神沉郁,伏卧喜睡,眼结膜发炎,出现呼吸道症状如气喘、咳嗽等,皮肤存在出血点或者出血斑,尤其是耳根、四肢内侧、腹部等部位,有些病猪还会出现神经症状。

2. 剖检变化:主要表现在淋巴结、肾脏、脾脏和胆囊等器官的出血性梗死;胃肠道黏膜出现卡他性炎症,伴有出血;膀胱黏膜出现出血性炎症。

3. 实验室诊断:采集病猪的血液、淋巴结、脾脏、扁桃体等组织样品进行病毒分离和鉴定,或者采用血清学方法检测抗体。

此外,根据病猪的临床表现和剖检变化,可以初步诊断为猪瘟。

需要注意的是,猪瘟病毒是一种高度传染性的病毒,需要在采取诊断措施时严格隔离病猪,以防止病毒扩散。

同时,对于确诊的病猪应立即采取无害化处理措施,以防止疫情扩散和传播。

猪瘟的诊断与防治方法

猪瘟的诊断与防治方法

生物安全措施
加强猪场生物安全管理,定期 消毒猪舍、饲料和水源,防止
病毒传播。
隔离措施
发现疑似病例,及时隔离,防 止病毒扩散。
监测与报告
定期监测猪群健康状况,发现 异常及时报告,采取有效措施
控制疫情。
治疗策略
早期治疗
一旦发现猪瘟病例,尽 早进行治疗,以降低死
亡率。
对症治疗
根据猪只症状,采取相 应的治疗措施,如退烧 、消炎、补充营养等。
01
02
03
基因工程疫苗
利用基因工程技术,将猪 瘟病毒的基因片段插入到 载体中,制备出具有免疫 原性的基因工程疫苗。
免疫增强剂
研究新型免疫增强剂,提 高猪只对猪瘟病毒的免疫 力,降低感染风险。
抗病毒药物
研究新型抗病毒药物,有 效抑制猪瘟病毒的复制和 传播。
疫苗研究与开发
多联疫苗
01
研究开发多联疫苗,将猪瘟与其他猪病疫苗结合在一起,减少
猪瘟的诊断与防治方法
汇报人: 2024-01-11
目录
• 猪瘟概述 • 猪瘟的诊断方法 • 猪瘟的防治方法 • 猪瘟的案例研究 • 猪瘟的未来研究方向
01
猪瘟概述
定义与特点
定义
猪瘟是一种由猪瘟病毒引起的、具有 高度传染性的疫病,也被称为古典猪 瘟或典型猪瘟。
特点
该病以高热稽留、全身广泛性出血、 淋巴结肿大为特征,具有发病率高、 致死率高的特点,对养猪业危害极大 。
实时荧光定量PCR 技术
利用荧光标记探针,实时监测 PCR反应过程中DNA的复制情况 ,提高检测的灵敏度和特异性。
02
生物传感器技术
03
人工智能技术
利用生物传感器对猪瘟病毒的特 异性识别,实现快速、准确的检 测。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

抗生素:如青霉素、链霉 素等,用于治疗细菌感染
抗病毒药物:如病毒唑、 干扰素等,用于治疗病毒
感染
抗寄生虫药物:如阿苯达 唑、伊维菌素等,用于治
疗寄生虫感染
营养补充剂:如维生素、 矿物质等,用于补充营养,
提高免疫力
猪瘟病毒具有高度传染性, 治疗过程中应采取严格的 隔离措施,防止病毒扩散。
治疗猪瘟的药物应按照兽 医的指导使用,不得随意
和防控经验
加强疫情监测, 及时发现和报
告疫情
加强科研攻关, 研发新型疫苗
和治疗药物
猪瘟疫苗的研发 和推广
加强国际合作, 共同应对猪瘟疫 情
提高养殖场的生 物安全水平,减 少猪瘟传播风险
加强猪瘟监测和 预警系统,及时 采取防控措施
汇报人:
增减剂量或更换药物。
治疗过程中应密切观察猪 只的健康状况,及时调整
治疗方案。
治疗结束后,应对猪舍进 行全面消毒,防止病毒残
留。
疫苗种类:猪瘟疫苗、 猪瘟活疫苗、猪瘟灭活
疫苗等
接种方法:肌肉注射、 皮下注射、口服等
接种时间:根据猪的 年龄、健康状况和地
区疫情情况确定
注意事项:确保疫苗 质量、保存得当、接 种剂量准确、避免过
扑杀原则:早、 快、严、小
扑杀范围:病猪、 疑似病猪、接触 猪
无害化处理方法 :焚烧、深埋、 化制
扑杀后的消毒: 彻底消毒,防止 病毒传播
猪瘟导致生猪产 量下降,影响养 殖业的经济效益
猪瘟导致生猪价 格波动,影响养 殖业的市场稳定
猪瘟导致养殖业 投入增加,影响 养殖业的成本控 制
猪瘟导致养殖业 风险加大,影响 养殖业的可持续 发展
血清学检测:检 测猪瘟病毒抗体

非洲猪瘟诊断及综合防控技术

非洲猪瘟诊断及综合防控技术

非洲猪瘟诊断及综合防控技术非洲猪瘟(African Swine Fever,简称ASF)是一种由非洲猪瘟病毒引起的高度传染性疾病,主要感染猪科动物,对于猪类的养殖业来说是一种较大的威胁。

ASF病毒会引起猪体内多器官出血病变,严重者可导致死亡,目前尚无特效治疗方法和疫苗。

对于ASF的诊断和综合防控技术显得尤为重要。

一、非洲猪瘟的诊断技术1. 临床症状诊断非洲猪瘟的临床症状主要包括高热、食欲下降、精神萎靡、呼吸急促、皮肤发绀、鼓胀、皮肤停止出血等,对于有以上症状的猪只,可以初步怀疑为非洲猪瘟,但需要通过实验室检测来做出最终的诊断。

3. 免疫学诊断ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)是一种常见的免疫学检测方法,可以通过检测猪血清中的抗体水平来诊断非洲猪瘟的感染情况。

通过特定的抗体与抗原的结合反应来测定血清中抗体的水平,从而判断猪只是否已经感染过ASF病毒。

二、非洲猪瘟的综合防控技术1. 生物安全措施生物安全措施是预防非洲猪瘟传播的关键措施之一。

包括加强畜舍的通风换气,定期对畜舍进行消毒,严禁外来人员和车辆进入养猪场区域,采取严格的防疫检疫措施等,以防止病毒的传播。

2. 疫苗研发目前尚无特效的非洲猪瘟病毒疫苗,但科研人员正在不断尝试和研发相关疫苗。

疫苗的研发将为非洲猪瘟的防控提供更为有力的手段,可以大大降低该病在猪群中的传播和致死率。

3. 临床治疗对于发现感染非洲猪瘟的猪只,应立即隔离并进行严格的治疗。

经验表明,早期诊断和治疗是防控非洲猪瘟的关键,及时有效的临床治疗可以降低猪只的死亡率。

4. 健康监测定期对猪只进行健康监测是非洲猪瘟防控工作的一项重要内容。

监测包括猪只的生长情况、健康状况、食欲情况等,及时发现和处理异常情况,以防止疫情的扩散。

非洲猪瘟的诊断与综合防控技术是非常重要的。

通过临床症状诊断、分子生物学诊断和免疫学诊断等方法,可以及时准确地诊断非洲猪瘟的感染情况。

1 猪瘟诊断技术

1 猪瘟诊断技术

猪瘟诊断技术1 范围本标准规定了猪瘟(CSF)临床诊断、病理学诊断及实验室诊断方法的技术要求。

实验室诊断方法主要包括:兔体交互免疫试验、免疫酶染色试验、病毒分离与鉴定试验、直接免疫荧光抗体试验、荧光抗体病毒中和试验、猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和反转录聚合酶链式反应等诊断技术。

本标准适用于猪瘟的诊断。

兔体交互免疫试验,免疫酶染色试验,直接免疫荧光抗体试验,反转录聚合酶链式反应和病毒分离与鉴定试验等五种方法主要用于猪瘟病毒和抗原的诊断,以发现带毒猪和自然感染猪;猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和荧光抗体病毒中和试验主要用于猪瘟抗体的监测和免疫效果评估,其中,单抗酶联免疫吸附试验主要用于猪瘟抗体的鉴别诊断,可区别诊断猪瘟自然感染猪,免疫猪,强、弱毒抗体阳性猪及猪瘟抗体阴性猪。

2 临床及病理学诊断2.1 临床及病理学诊断的作用感染CSF的猪临床症状和解剖后肉眼所见的病理变化,因病毒株致病力、感染时间和宿主等因不同而有很大差异,同时田间还存在着无临床症状的猪瘟病毒持续性感染和多种病原混合感染的现象,因此,猪瘟的临床诊断和病理学诊断只能作为综合诊断定性的依据之一,不能作为确诊的根据,特别是那些隐性感染的带毒猪,一般不表现临床症状及肉眼可见的病理变化,所以,猪瘟的确诊应依赖于对CSF病毒及抗原的实验室诊断,才能形成最终的结论。

2.2 临床诊断猪群中被检猪出现下列临床症状时,可作为综合诊断定性的依椐之一:a)体温在40.5℃以上或间歇性的发热;b)精神萎靡、倦怠,畏寒,食欲不振、厌食、甚至废食,呕吐,步态不稳;c)交替便秘与腹泻,产生带粘液和血丝的粪球,结膜充血、出血或有不正常分泌物;d)鼻盘、嘴唇、耳尖、下颌、四肢、腹下及腹股沟等处出现紫红色斑点或斑块;e)公猪包皮积尿或其他疑似CSF的症状;f)怀孕母猪有流产、死胎、木乃伊等现象或所产仔猪有衰弱、震颤、痉挛、发育不良等现象。

出现上述症状时,猪群作为可疑CSF对待,应全群隔离饲养,并作进一步诊断。

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标猪瘟,又称猪疫、疟热等,是一种由猪瘟病毒引起的急性、急性高传染性疾病,主要通过直接接触、飞沫传播和病毒污染物传播,对猪群健康和养猪业产生了极大的危害。

猪瘟既影响猪的生长发育,又引起大量猪的死亡,对于猪场的经济利益造成了极大的损失。

猪瘟的早期诊断和有效防治显得尤为重要,将有助于降低猪瘟对养猪业的危害和影响。

为了规范和标准化猪瘟的诊断技术,提高猪瘟的诊断水平和准确度,促进猪瘟的早期发现和有效防治,制定了《猪瘟诊断技术国标》,本国标适用于养殖场猪瘟的临床诊断、实验室检测以及疫情监测。

一、范围本国标规定了猪瘟诊断技术的相关术语和定义、诊断技术的要求和方法、技术实施、检测结果判定等内容。

二、术语和定义1. 猪瘟病毒:引起猪瘟的病原体,是一种单链RNA病毒。

2. 猪瘟抗体:猪体内产生的抗猪瘟病毒的特异性免疫球蛋白。

3. 临床试验:通过观察猪在自然状态下出现的病症和异常行为等情况,进行初步判断猪是否感染了猪瘟。

三、诊断技术的要求和方法1. 诊断技术的要求:(1)准确性:诊断技术应具有高度的准确性,能够对感染猪瘟的猪进行准确鉴定。

(2)快速性:诊断过程应迅速,以便及时采取应对措施。

(3)简便性:诊断技术应尽量简化操作步骤,提高操作的便利性。

(4)经济性:诊断技术应具有较低的成本,以降低检测的经济负担。

2. 诊断技术的方法:(1)临床观察法:通过观察被怀疑感染猪的临床表现,如发热、咳嗽、呕吐等,作为诊断的第一步。

(2)实验室检测:通过采集猪体液、组织等样本进行猪瘟病毒核酸检测、病毒抗原检测、猪瘟抗体检测等方法。

四、技术实施1. 临床试验:(1)确诊试验:对被怀疑感染猪进行详细的临床观察,并采集相关样本进行实验室检测。

(2)排除试验:对疑似猪瘟病例进行详细观察,并采集相关样本进行实验室检测,最终排除猪瘟感染的可能性。

2. 实验室检测:(1)样本采集:应选择体温升高、鼻涕多、呼吸困难等临床症状较为明显的猪进行样本采集,包括血液、鼻咽拭子、腮腺淋巴结组织等。

猪瘟的一次性诊断与处理

猪瘟的一次性诊断与处理

猪瘟的一次性诊断与处理猪瘟,又称非洲猪瘟,是一种由非洲猪瘟病毒引起的急性高度传染性疾病。

这种疾病的爆发对猪的养殖业造成了极大的影响,因此及时的诊断和处理非常重要。

本文将介绍一种一次性诊断和处理猪瘟的方法,以帮助饲养者在疾病爆发时迅速作出反应,控制和治理猪瘟。

一、诊断1. 临床表现猪瘟病猪早期症状为发热、食欲不振、呕吐、腹泻、呼吸困难等,严重者可出现体温急剧升高、严重呼吸困难、皮肤和粘膜出现紫斑、出血等症状。

当猪出现上述症状时,应立即进行猪瘟的一次性诊断。

2. 病原学检测通过实验室检测,可以迅速检测到猪瘟病毒的存在。

病原学检测是一次性诊断猪瘟的重要手段,能够为猪瘟的早期发现提供依据。

3. 流行病学调查了解病猪的存栏情况、饲养方式、交通动物情况、防疫措施等,可以帮助诊断猪瘟的病因,确定猪病毒的来源,有利于制定更有针对性的治疗和防控措施。

二、处理1. 隔离猪瘟是一种高度传染性疾病,因此在发现病猪后,应立即进行隔离,防止病毒的传播。

将病猪从健康猪隔离开来,并严格控制所有人员和物品的出入,确保隔离区内的卫生环境。

2. 消毒对隔离区进行全面彻底的消毒,包括猪舍、饲料、饮水设施、工具等。

常用的消毒剂包括氯仿、烧碱、高锰酸钾等,在使用消毒剂时应严格按照说明书的用量和方法进行操作,确保病毒被有效地灭活。

3. 处理病猪对于确诊为猪瘟的病猪,应根据实际情况进行处理。

通常情况下,建议将病猪进行安乐死,避免病毒进一步传播。

处理病猪的过程中,要严格遵守相关法规和卫生标准,确保过程卫生,并且注意防止病毒的进一步传播。

4. 接种疫苗猪瘟疫苗是防治猪瘟的有效手段,对于未感染猪群可以考虑进行疫苗接种,提高猪群的免疫能力,避免疫情的蔓延和再次发生。

5. 强化防控措施除了对已感染猪群进行处理外,还需要对周围的猪群和环境进行强化的防控措施。

包括提高猪群的免疫力、增强畜舍的卫生管理、加强人员和物品的消毒、严格控制猪只和其他动物的交通等。

6. 彻底清场在猪瘟爆发后,需要对整个养殖场进行全面的清场,包括彻底清洗和消毒猪舍、土地和设施等。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗猪瘟,是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、高度致死性的疾病,主要传播途径为接触被感染的猪或接触污染的物品。

猪瘟的传播速度快,致死率高,给养殖业造成了严重的危害,因此关于猪瘟的诊断和治疗显得尤为重要。

本文将介绍猪瘟疾病的诊断和治疗方法,帮助养殖户更好地应对猪瘟疫情。

一、猪瘟的诊断1. 临床症状猪瘟的临床症状主要表现为高烧、食欲不振、精神萎靡、呼吸急促、结膜出血等。

患病猪出现严重的腹泻和呕吐,体温急剧升高,呼吸困难,严重时甚至出现神经症状。

当养殖户发现猪出现以上症状时,应该及时报告当地畜牧部门,并请兽医进行确诊。

2. 实验室检测为了更准确地诊断猪瘟,可以进行实验室检测,主要包括病毒分离、核酸检测和抗体检测。

通过这些检测可以确定猪是否感染了非洲猪瘟病毒,有助于制定后续的防控措施和治疗方案。

3. 病理学检查在猪瘟疫情暴发后,可以通过病理学检查来对病死猪进行解剖和组织标本检测,以确定病变情况和病毒感染情况。

这对于了解疫情的传播路径和病情严重程度非常重要,有助于后续的疫情防控工作。

二、猪瘟的治疗1. 免疫预防目前猪瘟的治疗主要是以免疫预防为主。

猪瘟病毒对高温和消毒剂较为敏感,因此要做好猪圈的消毒工作,避免交叉感染。

可以通过注射疫苗,提高猪的抗体水平,增强免疫力,降低猪瘟的传播风险。

2. 对症治疗对于已经感染猪瘟的猪,可采取一些对症治疗措施,如使用抗生素治疗继发感染,保持猪舍通风干燥,给予充足的饮水和营养。

同时可以添加一些促进免疫的生物制剂,帮助猪快速康复。

3. 隔离和扑杀在猪瘟暴发的养殖场,要采取严格的隔离措施,将患病猪隔离开来,防止疫情继续传播。

对于确诊为猪瘟的猪要及时扑杀,避免疫情扩散。

三、猪瘟的防控措施1. 严格管控进出场猪瘟的传播主要通过直接接触或间接接触感染病毒,因此要加强对猪的流通管控,减少猪群之间的接触机会,避免病毒的传播。

2. 保持场所清洁定期做好猪舍的清洁消毒工作,保持猪圈的通风干燥,避免细菌病毒在猪圈内滋生和传播。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗猪瘟是一种由猪瘟病毒引起的猪的传染病,也被称为非洲猪瘟。

它主要通过空气传播,但也可通过直接接触病毒或食用被感染的猪肉传播。

以下是关于猪瘟的诊断与治疗的详细信息。

诊断:1. 临床症状:猪瘟的主要症状包括发热、消化道症状(如呕吐、腹泻)、呼吸道症状(如咳嗽、打喷嚏)、皮肤病变(如瘀点、瘀斑)和神经系统症状(如抽搐、肢体瘫痪)等。

2. 病毒检测:可以通过采集病死猪的组织样本(如淋巴组织、肺组织)进行病毒检测。

常用的检测方法有PCR(聚合酶链反应)和ELISA(酶联免疫吸附试验)。

3. 血清学检测:可以通过检测猪血清中的病毒抗体来确定猪是否感染了猪瘟病毒。

常用的检测方法包括ELISA和中和试验。

治疗:目前尚无特效药物可以治愈猪瘟,因此主要采取以下措施来控制疾病的传播和减轻猪的症状。

1. 隔离和屠宰:将病猪与健康猪分开,防止疾病的传播。

对受感染的猪进行屠宰和正确处理。

2. 疫苗接种:疫苗是防治猪瘟的主要手段之一。

目前有一种活疫苗和多种灭活疫苗可供预防使用。

疫苗可以提高猪的免疫力,减轻病毒对猪的损害。

3. 卫生和消毒:保持猪舍的清洁和卫生,定期消毒猪舍和设备,减少病毒在环境中的存活。

4. 早期干预:一旦发现猪瘟的症状,应立即报告,并采取相应的措施进行控制。

早期干预可防止病毒进一步传播。

总结:猪瘟是一种严重的猪的传染病,对猪的养殖业造成了巨大的经济损失。

及早诊断和采取有效的控制措施非常重要,包括隔离和屠宰病猪、疫苗接种、卫生和消毒以及早期干预等。

通过综合的疫病防控策略,可以减轻猪瘟对养殖业的影响。

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标

猪瘟诊断技术国标猪瘟,又称非洲猪瘟,是一种严重的猪类传染性疾病,对养猪业造成了严重的威胁。

为了有效地控制猪瘟的传播和蔓延,诊断技术的规范化和标准化非常重要。

国际上一些国家和地区已经制定了相应的猪瘟诊断技术国标,为了提升我国养猪业的技术水平和防控能力,本文将围绕猪瘟诊断技术国标展开讨论。

本文将从猪瘟诊断技术概述、国际标准概况、我国相关现状和建议等方面进行分析,并结合实际情况提出相应的建议。

一、猪瘟诊断技术概述猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种高度致死性的传染病,主要引起猪的全身性炎症和出血性疾病。

患病的猪表现出食欲下降、发热、呼吸急促、皮肤发红和出血点等症状,严重时可以导致大规模死亡。

目前,猪瘟已经在我国多个省份出现,给养猪业造成了极大的经济损失。

猪瘟的早期诊断和迅速控制是极为重要的。

猪瘟的诊断技术主要包括实验室检测和临床诊断两大方面。

实验室检测主要包括病毒分离、抗体检测、核酸检测等方法。

临床诊断主要是通过临床症状和病变的观察来进行初步判断。

猪瘟的诊断技术国标应该包括这两大方面的内容,从而为猪瘟的早期检测和诊断提供规范和标准。

二、国际标准概况在国际上,一些国家和地区已经制定了相应的猪瘟诊断技术国标。

这些国标主要包括了病毒分离、抗体检测、核酸检测等方面的技术要求和规范。

这些国标主要通过制定检测方法和技术标准、设备规格、实验操作流程、质量控制等方面的规定,为猪瘟的诊断提供了科学的依据和指导。

国际标准的制定对于我国养猪业的发展具有重要的参考意义。

我国可以借鉴国际标准的制定思路和经验,结合国内的实际情况,制定适合我国养猪业特点的猪瘟诊断技术国标,提升我国的诊断技术水平,加强猪瘟的防控能力。

三、我国相关现状目前,我国在猪瘟诊断技术国标方面存在一些不足。

一方面,我国在病毒分离、抗体检测、核酸检测等方面的方法和技术标准相对滞后,存在一定的规范和标准化不足。

我国在猪瘟的临床诊断方面也存在一些问题,例如一些乡村兽医缺乏相关的诊断技能,导致猪瘟的早期确定和控制存在一定的困难。

非洲猪瘟的诊断技术与实验室检测

非洲猪瘟的诊断技术与实验室检测

非洲猪瘟的诊断技术与实验室检测非洲猪瘟(African Swine Fever,简称ASF)是一种高度传染性疾病,主要感染猪类动物,可造成严重经济损失和动物福利问题。

针对ASF的及时诊断对于疾病的控制和防范至关重要。

本文将介绍一些主要的诊断技术和实验室检测方法,以助于了解和应对非洲猪瘟的挑战。

一、血清学检测血清学检测是非洲猪瘟最常用的诊断方法之一。

该方法通过采集猪血样本,检测体内的抗体水平来判断是否感染ASF病毒。

目前常用的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IIFA)和凝集试验等。

这些方法可以快速、高效地检测出ASF病毒特异性抗体,为疫情的监控和控制提供有力支持。

二、分子生物学检测分子生物学检测是一种高灵敏度的诊断方法,可以直接检测病原体的核酸或基因序列,从而确定是否感染ASF病毒。

PCR(聚合酶链反应)是最常用的分子生物学检测技术之一。

通过提取猪样本中的DNA或RNA,并使用特定的引物和酶,可以扩增和检测ASF病毒的基因片段。

PCR方法能够快速、准确地诊断ASF,并且具有高度的特异性和敏感性。

三、病理学检测病理学检测是通过对受感染动物的组织和器官进行观察和分析,来确定是否患有ASF病毒感染的一种方法。

通常,通过剖检猪尸体,观察内脏器官的变化和病灶,如充血、出血、溃疡等,可以初步判断是否受到ASF的侵袭。

此外,还可以进一步采集组织样本,进行组织学检测和免疫组化染色,以确认ASF病毒的存在和传播。

四、实验室设备与技术为了进行非洲猪瘟的实验室检测,需要一系列的专业设备和技术。

常见的实验室设备包括PCR仪、酶联免疫吸附试验仪、显微镜和组织切片机等。

此外,还需要具备高水平的实验室操作技术,如样本采集、核酸提取、PCR反应体系的建立和结果解读等。

确保实验室设备的质量和操作技术的熟练程度,对于准确诊断ASF病毒的存在至关重要。

总结:非洲猪瘟的诊断技术与实验室检测是研究和防控ASF的重要组成部分。

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗

猪瘟的诊断与治疗
猪瘟,又称非洲猪瘟,是一种由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的严重疾病。

该病毒只会
感染猪类,不会传给人类。

猪瘟具有高度致死率和传染性,可以对猪群造成严重经济损失。

及早诊断和有效治疗对于控制和预防猪瘟的传播至关重要。

猪瘟的诊断可以通过临床症状观察、实验室检测和病毒分离等方法进行。

常见的临床
症状包括高热、食欲减退、呕吐、腹泻、皮肤发绀和呼吸困难等。

这些症状在感染初期可
能类似于其他猪病,因此不能完全依赖临床症状进行诊断。

实验室检测包括猪瘟抗体检测、病毒核酸检测和病理组织学检查等。

病毒分离是确认诊断的关键步骤,可以通过将病毒分
离于受感染猪的组织样本中,然后使用细胞培养或实验动物感染来验证是否为猪瘟病毒。

目前,尚无特效药物可以治疗猪瘟。

防疫和控制措施是目前预防和减轻猪瘟传播的主
要方法。

疫苗是预防猪瘟最有效的手段之一。

已经开发了多种类型的猪瘟疫苗,包括灭活
疫苗、亚单位疫苗和重组疫苗等。

这些疫苗可以刺激猪产生免疫反应,以提高其对猪瘟的
抵抗力。

除了疫苗接种外,还需要采取其他预防措施来防止猪瘟的传播。

这包括加强养殖场和
交通工具的卫生管理、定期消毒场地和设备、采取隔离措施等。

及时发现和报告疑似或确
诊病例也是非常重要的,以避免疫情扩散。

猪瘟的诊断和治疗是一项复杂的任务。

及早的诊断和有效的治疗是控制和预防疫情蔓
延的关键。

通过加强卫生管理、疫苗接种和其他预防措施,可以最大程度地减少猪瘟对养
殖业的影响。

非洲猪瘟诊断及综合防控技术

非洲猪瘟诊断及综合防控技术

非洲猪瘟诊断及综合防控技术非洲猪瘟是一种高度传染性、致死性的病毒性疾病,对于养猪业和经济都有着严重的影响。

因此,非洲猪瘟的防控措施至关重要。

本文将介绍非洲猪瘟的诊断方法和综合防控技术。

一、非洲猪瘟的诊断方法1. 临床症状诊断非洲猪瘟病猪表现为食欲下降、发热、咳嗽、呼吸急促、鼻涕流出、眼结膜充血、皮下转移物出现,甚至有的病猪有充血的皮肤、腹泻等症状。

疑似病猪应隔离,并及时向兽医请教。

2. 实验室检查诊断(1)血清学检查:采集病猪血清样本,使用ELISA或PCR等血清学检测方法,检测血清中非洲猪瘟抗体水平。

该方法适用于阶段较晚的非洲猪瘟感染病例。

(2)病理学检查:取下猪的心、肺、肝、脾、淋巴结等组织样本,用PCR、免疫荧光细胞染色法、电子显微镜等器具检测,检测样本中是否存在非洲猪瘟病毒抗原,对于早期诊断具有重要意义。

(3)病毒分离法:从分离培养物中检测到病原体可以作为非洲猪瘟病的确诊标准。

病毒分离需在合适的环境和介质下进行,通常会选用猪肾细胞或SF9细胞。

1. 人员防疫措施(1)养殖场工作人员应做好防护服的穿戴,每次进入圈舍前要做好消毒处理;(2)病死猪体处理应严格按照当地疫病防控管理规定进行,防止疫情蔓延。

(1)疫区要及时进行隔离,并对接触过疫猪的人员实施隔离;(2)禁止单位和个人外出到疫区进行养殖活动,减少病毒传播的可能。

(1)圈舍内环境要保持清洁,每周做一次消毒;(2)加强圈舍内防疫宣传教育,提高防范意识;(3)确保引进猪只来源安全,加强入场检疫。

(1)严格管控饲养密度,减少猪只间的接触机会;(2)发现疑似非洲猪瘟病例,立即隔离患猪,做好病情报告并及时请疾病防控机构介入;(3)加强猪只运输管理,确保运输途中不受感染。

综合防控可以有效避免非洲猪瘟病毒传染,解决疫情对养猪业的危害,提高猪只活存率及养猪经济效益。

猪瘟诊断技术标准

猪瘟诊断技术标准

猪瘟诊断技术标准
猪瘟(非洲猪瘟)是一种严重的猪类传染病,为了及早发现和控制疫情,需要使用特定的诊断技术。

以下是一般用于猪瘟诊断的主要技术标准:
1. PCR(聚合酶链反应)检测:PCR是一种高灵敏度的分子生物学技术,可检测病毒的核酸(DNA或RNA)。

通过针对猪瘟病毒基因组的特定区域进行PCR扩增,可以确认是否存在病毒感染。

2. ELISA(酶联免疫吸附试验):ELISA是一种常用的免疫学技术,用于检测特定病原体的抗体。

通过检测猪血清中的猪瘟病毒特异性抗体,可以确定猪是否曾经感染猪瘟病毒。

3. 病理学检查:猪瘟病毒感染会引起明显的病理变化,如内脏器官的出血、淋巴组织的萎缩等。

通过对病死猪或临床病例的病理学检查,可以观察到病变特征,进一步确认猪瘟的诊断。

4. 实时荧光定量PCR:该技术是一种PCR技术的改进,结合了PCR扩增和荧光探针检测,可以快速准确地检测猪瘟病毒的存在和数量。

5. 病毒分离:通过将样品(如血液、组织)接种到猪瘟病毒敏感的细胞系中,观察是否能够分离出病毒,从而确认感染。

需要注意的是,猪瘟诊断的技术标准可能因国家或地区而有所不同。

因此,在具体的诊断过程中,应当参考当地相关机构或疾病控制部门发布的最新技术指南和标准,确保诊断结果的准确性和可靠性。

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猪瘟诊断技术1 范围本标准规定了猪瘟(CSF)临床诊断、病理学诊断及实验室诊断方法的技术要求。

实验室诊断方法主要包括:兔体交互免疫试验、免疫酶染色试验、病毒分离与鉴定试验、直接免疫荧光抗体试验、荧光抗体病毒中和试验、猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和反转录聚合酶链式反应等诊断技术。

本标准适用于猪瘟的诊断。

兔体交互免疫试验,免疫酶染色试验,直接免疫荧光抗体试验,反转录聚合酶链式反应和病毒分离与鉴定试验等五种方法主要用于猪瘟病毒和抗原的诊断,以发现带毒猪和自然感染猪;猪瘟单抗酶联免疫吸附试验和荧光抗体病毒中和试验主要用于猪瘟抗体的监测和免疫效果评估,其中,单抗酶联免疫吸附试验主要用于猪瘟抗体的鉴别诊断,可区别诊断猪瘟自然感染猪,免疫猪,强、弱毒抗体阳性猪及猪瘟抗体阴性猪。

2 临床及病理学诊断2.1 临床及病理学诊断的作用感染CSF的猪临床症状和解剖后肉眼所见的病理变化,因病毒株致病力、感染时间和宿主等因不同而有很大差异,同时田间还存在着无临床症状的猪瘟病毒持续性感染和多种病原混合感染的现象,因此,猪瘟的临床诊断和病理学诊断只能作为综合诊断定性的依据之一,不能作为确诊的根据,特别是那些隐性感染的带毒猪,一般不表现临床症状及肉眼可见的病理变化,所以,猪瘟的确诊应依赖于对CSF病毒及抗原的实验室诊断,才能形成最终的结论。

2.2 临床诊断猪群中被检猪出现下列临床症状时,可作为综合诊断定性的依椐之一:a)体温在40.5℃以上或间歇性的发热;b)精神萎靡、倦怠,畏寒,食欲不振、厌食、甚至废食,呕吐,步态不稳;c)交替便秘与腹泻,产生带粘液和血丝的粪球,结膜充血、出血或有不正常分泌物;d)鼻盘、嘴唇、耳尖、下颌、四肢、腹下及腹股沟等处出现紫红色斑点或斑块;e)公猪包皮积尿或其他疑似CSF的症状;f)怀孕母猪有流产、死胎、木乃伊等现象或所产仔猪有衰弱、震颤、痉挛、发育不良等现象。

出现上述症状时,猪群作为可疑CSF对待,应全群隔离饲养,并作进一步诊断。

2.3 病理学诊断对临床检出的可疑患猪可抽样进行病理学诊断,下述肉眼可见的病变可作为综合诊断的依据之一:a)肾皮质色泽变淡,有不同大小的点状出血;b)淋巴结外观充血、切面周边出血,呈红白相间的“大理石样”;c)脾脏不肿大,表面有点状出血或边缘出现突起的楔状梗死区;d)心脏、喉头、大肠、小肠、胆囊及膀胱有点状出血;e)全身出血性变化、多呈片状或点状;f)回盲瓣、回肠、结肠形成“钮扣状”溃疡(慢性猪瘟)。

3 病原学诊断3.1 兔体交互免疫试验3.1.1 样品处理将病猪的淋巴结、牌脏和肾磨碎后用无热原性的生理盐水作1∶10稀释。

3.1.2 接种家兔将上述处理的样品肌肉注射三只健康家兔,每只5mL,另设三只不注射病料而仅注射生理盐水的对照兔,24h后,每隔6h测体温一次,连续测温5d。

3.1.3 接种兔毒接种样品5d后对所有家兔注射用无热原性的生理盐水稀释成1mL含有100个兔体最小感染量的猪瘟兔化弱毒(淋巴/脾脏毒),每只1ml,同时增设两只仅注射猪瘟兔化弱毒的对照兔。

24h后,每隔6h测体温一次,连续测96h,注射生理盐水和仅注射猪瘟兔化弱毒的两组对照兔分别2/3和2/2出现定型热或轻型热,试验成立。

3.1.4 判定标准猪瘟强毒不引起家兔体温反应,但能使其产生免疫力,从而能抵抗猪瘟兔化弱毒的攻击。

因此,可以利用猪瘟兔化弱毒攻击后是否出现体温反应作指标,以判定第一次接种的病料中是否含有猪瘟病毒。

试验组的试验结果判定见表1。

表1 兔体交互免疫试验结果判定3.2 免疫酶染色试验3.2.1 样品的采集解剖检查时采病猪扁桃体、脾、肾、淋巴结作压印片或冰冻切片,同时设正常组织对照标本,标本自然干燥后,在2%戊二醛和甲醛等量混合液中固定10min,干燥后,置冰箱内待检。

3.2.2 操作程序3.2.2.1 将标本浸入0.01%过氧化氢或0.01%叠氮钠的Tris-HCl缓冲液中,室温下作用30min。

3.2.2.2用pH7.4的0.02mol/L磷酸缓冲盐水漂洗5次,每次3min,风干。

3.2.2.3 将标本置于湿盒内,滴加1∶10酶标记抗体,覆盖标本面上,置37℃作用45min。

2.2.2.4用pH7.4的0.02mol/L磷酸缓冲盐水-1%吐温缓冲液漂洗5次,每次2min~3mim。

2.2.2.5将标本放入DAB(4-二甲氨基偶氣苯)Tis-HCl液内,置37℃作用3min。

3.2.2.6用pH7.4的0.02mol/L磷酸缓冲盐水冲洗5次,每次2min~3min,再用无水酒精、二甲苯脱水,封片检查。

3.2.2.7用普通生物显微镜检查判定结果,如细胞浆染成深褐色为阳性;黄色或无色为阴性,正常对照标本应为阴性。

猪瘟兔化弱毒接种的猪组织细胞浆呈微褐色,与强毒株感染有明显区别。

3.3 病毒分离与鉴定试验3.3.1将2g扁桃体或脾脏或肾脏剪成小块,加上灭菌砂在乳钵中研成匀浆,用Hank’s液或MEM配成20%悬液,加青霉素(使最终浓度为500U/mL)和链霉素(使最终浓度为500μg/mL),室温下放置1h,以3000r/min离心15min取用上清液。

3.3.2将PK15单层细胞用胰酶消化分散后,以800r/min离心10min,用不含牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的5%胎牛血清的MEM配成每毫升含2X106个细胞的悬液。

3.3.3九份细胞悬液(3.3.2)加一份病料悬液(3.3.1)接种于带有细胞飞片的转瓶或微量细胞培养板。

另设不加病料的对照若干瓶(孔),于接种后1d、2d、3d,分别从两个接种瓶(孔)和一个对照瓶(孔)中取出细胞片用Hank’s液或MEM洗涤两次,每次5min,用冷无水丙酮固定10min。

3.3.4按3.2或3.4.5~3.4.7进行免疫酶染色或荧光抗体染色、镜检并判定结果。

3.4 直接免疫荧光抗体试验3.4.1 采样群体检疫中,待检可疑猪不少于三例,其中至少两例为早期患猪,活体取扁桃体或剖杀后摘取扁桃体。

后期病猪剖杀后采扁桃体、淋巴结、脾脏和肾胜。

个体检疫时,可活体取扁桃体或剖杀可疑猪采扁桃体、淋巴结、脾脏。

所采组织样品应新鲜且为猪瘟疫苗免疫21d 之后。

3.4.2 送检采样后应尽快冷藏送检,如当日不能送出,应冻结保存,避免组织腐败、自溶,影响结果。

3.4.3制片将样品组织块修切出1cm×1cm的小块。

不经任何同定处理,直接冻贴于冰冻切片机的冰冻切片托上(组织块太小时,如活体采取的扁桃体,可用冰冻切片机专用的包埋剂或化学浆糊包埋),进行切片,切片厚度要求5μm~7μm。

将切片展贴于0.8mm~1.0mm厚的洁净载玻片上,也可将样片组织直接作压片或涂片,同时设正常对照片。

3.4.4 固定将切片、压印片或涂片置无水丙酮中固定15min。

取出立即放入0.01mol/L,pH7.2的磷酸缓冲盐水中,轻轻漂洗3次。

取出,自然干燥后,尽快进行荧光抗体染色。

3.4.5 荧光抗体染色将猪瘟荧光抗体滴加于样品表面,放置湿盒内于37℃作用30min。

取出后浸入磷酸缓冲盐水中充分漂洗,再用带有0.5mol/L,pH9.0~pH9.3碳酸盐缓冲甘油的盖玻片(0.17mm 厚)封固样品片表面。

染色后应尽快镜检,4℃保存不应超过72h。

必要时可低温保存待检,但也不应超过一周。

3.4.6 镜检将染色、封固后的样品片置于激发光为蓝紫光或紫外光的荧光显微镜下观察。

3.4.7 判定标准于荧光显微镜视野中,见扁桃体隐窝上皮细胞或肾曲小管上皮细胞浆内呈现明亮的黄绿色荧光,或脾、淋巴结胞浆内有黄绿色荧光判为猪瘟病毒感染阳性。

正常对照片细胞内应无黄绿色荧光。

3.5 猪瘟病毒反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)3.5.1 材料与样品准备3.5.1.1 材料准备本试验所用试剂需用无RNA酶污染的容器分装;各种离心管和带滤芯吸头需无RNA酶污染;剪刀、镊子和研钵器应经干烤灭菌。

3.5.1.2 样品制备按1∶5(质量浓度)比例,取待检组织和MEM液于研钵中充分研磨制成匀浆液,4℃,以1000g离心15min,取上清液转入无RNA酶污染的离心管中,备用;全血采用脱纤抗凝备用;细胞培养物冻融3次备用;其他样品酌情处理。

制备的样品在2℃~8℃保存不应超过24h,长期保存应小分装后置-70℃以下,避免反复冻融。

同时设阴、阳性样品对照。

3.5.2 RNA提取3.5.2.1移取750μL Trizol至1.5ml Eppendorf管,加入200μL血液(培养液或组织处理上清),漩涡振荡20s,室温下作用5min。

加入200μL三氯甲烷,旋涡振荡15s,室温下作用10min。

3.5.2.2以12000r/min(11750g),4℃离心15min。

3.5.2.3轻轻吸取上清转至新的1.5ml Eppendorf管(注意不要吸到中间蛋白质)约550μL~600μL,加入等量预冷的异丙醇,颠倒数次混匀,-20℃条件下静置至少10min。

3.5.2.4以12000r/min(11750g),4℃离心15min。

3.5.2.5 轻轻倒掉上清,顺势将管口残液在吸水纸上醮干(注意各管不要用吸水纸同一点),向管中轻轻加入1mL预冷的75℃乙醇。

轻轻颠倒数次,将乙醇倒掉,将管口残液在吸水纸上醮干(注意各管不要用吸水纸同一点),盖上盖后,以5000r/min,4℃离心2min。

3.5.2.6用洁净无酶吸头将管底乙醇吸干,注意不要吸走沉淀(RNA少的情况下可能看不见沉淀)。

在安全柜成超净台中将残留的乙醇吹干,约5min,直至无乙醇味为止。

时间不要太长,以免RNA溶解困难。

2.5.2.7 用下列比例配制溶液溶解RNA:4μL0.1mol/L MDTTlμL RNA酶抑制剂(RNase inhibitor)15μL无酶水共计20μL,按此比例一次性配好,混匀。

按每个样品20μL~50μL配制。

吸取20μL~50μLRNA溶解液溶液加至Eppendorf管底,55℃~60℃水浴助溶10min。

RNA溶液在-80℃保存。

短期也可在-20℃保存。

3.5.3 cDNA合成3.5.3.1吸取5μL上述RNA溶液至PCR管中。

3.5.3.2 加入1μL 50pmoL/L的下游引物,68℃作用5min,冰水浴中降温(或在PCR仪中采用程序:68℃反应5min,置于4℃结束反应)。

3.5.3.3加入下列试剂:1μL 5×第一链缓冲液(first strand bffer)0.5μL 0.1mol/L DTT0.5μL dNTP(10mmol/L)0.25μL RNA酶抑制剂(RNase inhibitor)0.5μL 反转录酶(superscript Ⅲ)PCR仪中50℃反应60min,75℃温育10min,置于4℃结束反应。

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