脂肪酸的β-氧化

1/15M PH7.6磷酸缓冲液： 1/15M Na2HPO4 86.8ml+1/15M NaH2PO4 13.2ml
五、操作步骤

肝糜制备：取肝用0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去表面
水分。称肝组织5g置研钵中，加少量的0.9%NaCl研成细 浆。再加0.9%NaCl到总体积10ml。

取2个50ml锥形瓶，各加入3ml 1/15M磷酸盐缓冲液 （pH7.6）。其中一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥 形瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入2ml肝糜。混匀于 43℃恒温水浴内保温1.5小时。
实验七 脂肪酸的β-氧化
一、实验目的
了解脂肪酸的β
-氧化作用
通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成
丙酮的量，掌握测定β -氧化作用的方法 及其原理
二、实验原理
在肝脏中，脂肪酸经β 氧化作用生成乙酰辅
酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙
酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β -羟丁
酸。乙酰乙酸、β -羟丁酸和丙酮总称为酮体。 酮体为机体代谢的中间产物。 酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况

沉淀蛋白：取出锥形瓶，各加入3ml 15%三氯乙酸，混匀， 静置15min。对照瓶内追加2ml正丁酸，混匀。分别过滤，
滤液收集在2支试管中。

酮体测定：吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中，
各加3ml 0.1M碘液和3ml 10%NaOH。摇匀，静置10min。加
入6ml 10%盐酸中和。
NaOI+NaI+2HCl I2+2Na2S2O3
I2+2NaCl+H2O Na2S4O6+NaI
根据滴定对照与滴定样品所消耗的 硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由 丁酸氧化生成丙酮的量。
三、实验器材


5ml微量滴定管
恒温水浴
吸管
剪刀 50ml 锥形瓶 漏斗 试管及试管架
四、试剂与材料

用0.01M标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，
加入3滴0.1%淀粉作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。 记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数。
5、结果计算
肝脏的丙酮含量（mmol/g）
=（A—B）* CNa2S2O3 * 1/6 *5
A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M） 1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量
下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，
血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。
本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮 在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：
2NaOH+I2 NaOI + NaI + H2O CH3COCH3+3NaOI CHI3+CH3COONa+2NaOH
碘仿
剩余的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定：


鲜猪肝：0.5g/ml
0.5%淀粉溶液


0.9%氯化钠溶液
0.5M丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml
0.5M氢氧化钠溶液中

15%三氯乙酸溶液

10%氢氧化钠 10%盐酸 0.2M碘液：25.4gI2+50gKI定容到Байду номын сангаас000ml 用标准0.05M硫代硫酸钠标定

标准0.01M硫代硫酸钠： 将已标定的0.05M硫代硫酸钠稀释成0.01M