地中海贫血单基因突变遗传病检测的新方式

姓名身份证号专业技术

职务

所在单位名称

项目中

的分工

签字

项目全面

负责

实验设计，荧光

能量转移设计

实验设计，

PCR扩增

PCR扩增

主要成员

(

不含申请者

)

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地中海贫血单基因突变遗传病检测的新方法二、立论依据

（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处）

对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义；

对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景。

地中海贫血是一种遗传性血液病，1925年意大利首次报道了此病，目前该病已散布全世界范围。它是一类由于常染色体遗传性缺陷，引起珠蛋白链合成障碍，使一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏，因而红细胞易被溶解破坏的溶血性贫血。如人体血液中，正常人的红细胞寿命为120天左右，而重型地中海贫血患者的红细胞寿命有些仅为一个多月，红细胞较早遭到破坏，使人体造血机能缺失。病人要维持生命必须进行长期输血。对家庭和社会造成了很大的压力。国内外对地中海贫血的治疗尚无有效的根治方法，只能规律性输血来维系生命。治愈重型地中海贫血的唯一办法就是造血干细胞移植。但由于在技术上还有待改进，加之昂贵的费用，致使这种方法仅停留在实验阶段。目前，为彻底防治地中海贫血病的发生，根本的出路在于预防。

我们知道，如果夫妇双方都携带有地中海贫血基因，由于没有贫血症状，往往不易被人们发现。但他们的子女就会有２５％的可能性是重型地中海贫血；如果只有一方携带地中海贫血基因，他们不会有重型地中海贫血小孩。所以，杜绝重型地中海贫血小孩的出生，成年人地中海贫血的检测格外重要，这也是提高我国人口素质的有效措施。

目前，在基因水平上对单碱基突变引起的地中海贫血病的检测有多种方法。如聚合酶链反应结合斑点杂交技术是目前最常用的地中海贫血基因诊断方法，该方法具有准确性高，重复性好等优点，但需要放射性同位素标记和繁琐的分子杂交技术，难以在临床推广应用。

近年，Efremov等报道了一种突变引物延伸扩增(MOEA)的新技术，无需放射性同位素标记。但这种方法实验周期长，操作繁琐，同样难以在临床上推广使用。所以迫切需要发展一种高效、简便的地中海贫血的检测方法。基于此，本项目利用分子探针技术，拟发展一种灵敏、高效简便的单基因突变地中海贫血疾病的检测方法。

参参考文献：

ErEfremov, D.G., Dimouxki, A.J. 1991. Mutant oligonucleotide extension amplification: a nonlabeling polymerase-chain-reaction-based assay for the detection of point mutations. Acta Haematol. 85: 66-70.

刘敬忠, 吴冠芸, 姜哲. 1991. 地中海贫血的快速产前基因诊断. 中国医学科学院学报. 13: 372-375.

Baysal, E. 1992. Theβamdδ-thalassemia repository. Hemoglobin. 16: 237-245.

Chiou, S.S., Liu T.C. 1993. Prenatal and molecular diagnosis ofβthalassemia major in Taiwan by naturally and amplified created restriction sites. Int J Hemat. 59: 1-7.

刘敬忠, 刘辉贤, 王海燕等. 1993. 简便易行的β地中海贫血基因诊断新技术. 中华医学杂志. 73: 432-433.

崔金环, 郑雪莲, 区丽群. 2003. 中重型β地中海贫血基因类型分析. 中国优生与遗传杂志. 11: 32-34.

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三、研究方案

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4．年度研究计划及预测进展

地中海贫血检测的多条探针的设计

探针的筛选

引物设计，致病基因的扩增

荧光信号的检测，单碱基突变的分析

项目工作的总结和论文的书写。

5. 预期研究成果

(1) 建立一种简便、快速检测单碱基突变引起的地中海贫血疾病的方法；

(2) 发表一篇核心期刊以上的文章。

6．结题与考核方式

提交结题报告并发表一篇核心期刊以上的文章。

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四、研究基础

1.与本项目有关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩

本项目中涉及的一个很重要的问题是分子探针的设计。申请者在这方面有一定的研究积累，

2．本项目组成员所属学科领域及学术研究方向，已具备学术团队的基础

本项目组成成员属于生命科学研究领域，研究小组成员在分子信标DNA探针、生物传感器、生物医学实时成像及单细胞单分子检测等研究方向取得了国内公认的成绩。

3．.已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径

本项目拟在中南大学生物科学与技术学院完成，实验设备和技术上可为本项目的顺利进行提供保障。目前尚缺乏疾病的样本。

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4申请者和项目组主要成员的学历和研究工作简历，近期已发表与本项目有关的主要论著目录*和获得学术奖励情况及在本项目中承担的任务

* 论文：作者·题目·刊名·年份·卷（期）·页码

专著：作者·书名·出版者·年份

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五、经费预算

支出科目

金额

（万元）

计算根据及理由

1. 合计 1.0

实验材料费0.60探针及引物的合成，试剂的购买

仪器设备费0.15样品测试费用

协作费0.20协作单位费用及差旅费

版面费0.05纸张，邮寄及论文版面收费

注: 预算支出科目按下列顺序填写: 1. 科研业务费 2. 实验材料费 3. 仪器设备费 4. 实验室改装费5. 协作费 6. 项目组织实施费。