原发性皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体基因重排分析

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Chin J Dermatol , D ec 1997, V ol 30, N o. 6
Hale Waihona Puke Baidu
samples fr o m 10 patients by T CR SBA . In S zar y syndro me( SS) and lymphomat oid papulosis ( Ly P) , T CR GR and T CR G R w ere detected in skin specimens o f tw o patient s w ith Ly P a nd blo od samples o f t wo pa tients w ith SS. G R w ere seen in one skin specimen of o ne patient w it h SS and o ne bloo d sample o f one patient w it h L y P detected by T CR PCR . Conclusio n: T CR P CR is a useful supplement to o ther m ethods fo r t he diag nosis o f early and suspect ed M F .
关键词 皮肤 T 细胞淋巴瘤 T 细胞受体基因重排
Analysis of T-cell Receptor Gene Rearrangement in Pr imary Cutaneous T-cell lymphomas W ang P in, Qiu Bing shen, Gao H ongy ang , et al. D ep artment of Der matology , N anj ing Railw ay M edical College, N anj ing, 210009
材料和方法
( 一) 病例: 经组织学、免疫组 织化学 诊断以及 长期 随 访( 1～ 30 年, 平均 5 年) 证实 的 44 例 P CT CL , 包括 M F 30 例、SS 2 例 和 P NCT CL 12 例, 根据 T N M 分期 分组, 即ⅠA: M F 7 例; ⅠB: M F 10 例; ⅡA : 12 例( M F 7 例, P NCT CL 5 例 ) ; ⅡB: 13 例 ( M F 6 例, P N CT CL 7 例) ; Ⅲ: SS 2 例。L yP 2 例( 其中 1 例先为 M F ) 。临床或 组织学上怀疑 M F 11 例。23 例 T 细胞淋巴增殖性皮肤 病包括急性苔藓样痘 疮样糠疹 4 例, 小斑块副银屑病 7 例, 皮 肤淋 巴样 增生 6 例 和光 化性 网状 细胞 增生 病 4 例。作为阴性对照, 检测良性皮肤反应性淋巴细胞浸润 8 例, 包括 6 例扁 平苔藓, 深 部和盘状红斑狼疮 各 1 例。 基本上采 取每例 1 个皮 肤活检标本 和经肝素抗 凝的外 周血 5～10ml, 也 检测了 1 例 M F ⅡA 的 1 个临床 上肿 大的浅 表淋巴结活检 标本。皮肤和 淋巴结标本 经速冻 后贮存 于液氮中。外周血单一 核细胞经 F ico ll-Hypaue 梯度离心制成并贮存于液氮中。
T CR G R / PCR : P CR 反 应 体系 为 25 l, 内 含引 物 T 10/ 20 和 C10/ 20 各 2 l( 50pmo l) , 模板 DN A 2～10 l ( 1 g) , T aq 聚合酶 3 l( 3U ) , 4 种 dN T P 5 l( 2mmo l/ L ) 标准缓冲液 5 l 和 0. 1mo l/ L 二氯 化镁 0. 5 l。扩增 35 个 循 环, 每 个 循 环 为 94℃下 30 秒 ( 预 变 性 600 秒) , 55℃下 45 秒和 72℃下 45 秒( 后延伸 500 秒) 。操作过 程 中须防止 DN A 的交叉污染 。取 10 l PCR 产物经 2% 琼脂糖凝胶电泳后溴乙锭染色 , 紫外线下观察。鲜明带 表示 GR 。PCR 引物由中国科学院上海细胞生物研究所 合成, 其序列为 T 10/ 20: 21mer 5′-T CT T CCA A CT T G GA A GG GA G A -3′, C10/ 20: 21mer 5′-CCCT CT AT T A CCT T G GA A A T G -3′。
中华皮肤科杂志 1997 年 12 月第 30 卷第 6 期
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·论 著·
原发性皮肤 T 细胞淋巴瘤的 T 细胞受体基因重排分析
王 平 邱丙森 高红阳 单易非 许良中
摘要 目的: 评价 So uthern 印迹分析( SBA ) 和聚合酶链反应( P CR ) 检 测原发性皮肤 T 细胞淋 巴瘤 ( PCT CL ) T 细胞受体( T CR ) 基因重排 ( GR ) 的意义。方法: 以 PCR 扩增 T CR 的结合Ⅴ ( 可变区) -J( 结 合区) 序列( T CR P CR ) 和 SBA 分析 T CR 链基因( T CR SBA ) 检测克隆性 GR 。结果: 蕈样肉芽 肿( M F ) : T CR PCR 和 T CR SBA 检测 6 例ⅡA 期和 7 例 ⅡB 期 皮损标本 的 GR 分别 为 5 例和 4 例以及 6 例 和 5 例, 外周血 分别有 4 例、2 例和 5 例、3 例示 G R; 而 7 例 ⅠA 期 和 10 例 ⅠB 期的 T CR GR 和 T CR G R 皮 肤组织为 4 例、1 例和 7 例、1 例, 外 周血为 3 例、阴性和 4 例、1 例。1 例 M F ⅡA 表现为皮病性淋巴 结病 患者的淋巴结中证实有 G R。疑诊 M F: 11 例患者的 皮损和外周血标本 经 T CR P CR 检测 5 例皮肤和 3 例外周血见 GR 。非蕈样肉芽肿、S zary 综合征的 P CT CL : P CR 和 SBA 显示 T CR G R 分别为皮肤组织 占 9 例/ 10 例和 6 例 / 8 例, 外周血占 9 例/ 10 例和 6 例/ 11 例。S zar y 综合征 和淋巴 瘤样丘 疹病: 2 例 S zar y 综合征外周血和其 中 1 例皮肤标本同时 见 T CR G R 和 T CR GR ; 2 例 淋巴瘤样丘 疹病的皮肤 标 本亦同时具两种 GR 。结论: T CR PCR 方法有助于诊断早期和可疑 M F 。
Key words Cut aneo us T -cell lymphoma T -cell r ecept or gene rea rr angement
原发性皮肤 T 细胞淋巴瘤( P CT CL ) 系指 原发于皮肤的以 T 淋巴细胞瘤性增生为特征 的一组疾病, 其临床表现、组织学、免疫表型和 预后差异很大[ 1] 。PCT CL 病谱广泛, 除最常见 的蕈样肉芽肿( MF ) 和 S zary 综合征( SS ) 外, 非 M F、SS 之 PCT CL ( P NCT CL ) 也不少见。另 外, P CT CL 还与其它 T 细胞淋巴增殖性 皮肤 病( LP D) 关系密切[ 3,4] 。Weiss 等首先将 T 细胞 受 体( T CR) 基因重排( GR) 的分子分析应用于 皮肤淋巴增殖性疾病, 证实 T CR GR 检测对于 PCT CL 的诊断有协助作用[2] 。本研究评价聚合 酶链 反应( P CR) 和 Southern 印迹分析 ( SBA ) 检测皮肤淋巴细胞浸润中克隆性 T CR GR。
Abstract O bject s: T o evaluate the sig nificance o f T -cell receptor ( T CR ) gene r earr angm ent ( G R) in primar y cut aneous T -cell lymphoma s ( P CT CL ) by detection of So ut her n blo t analy sis ( SBA ) and po ly merase chain r eact ion ( P CR ) . M et hods: Clonal G R w er e simultaneously studied by the amplification of junctional V ( var iable) -J( joining ) sequences o f the r ear rang ed T CR g enes by P CR( T CR P CR) a nd the a nalysis o f T CR -chain genes by SBA ( T CR SBA ) . R esults: In myco sis fungo ides( M F ) , G R o f skin specimens by T CR PCR and T CR SBA w er e detected in 5 and 4 o f 6 patients with M F ⅡA , 6 and 5 of 7 pa tients with M FⅡB respect ively . Clo nal GR wer e also seen in 4 and 1 o f 7 cases, 7 and 1 o f 10 cases in M F ⅠA and M F ⅠB r espectively. G R of blo od samples by P CR and SBA wer e pr esent in 4 and 2 of 6 patients w ith M F ⅡA , 5 and 3 of 7 patients w ith M FⅡB. G R w as confir med by T CR P CR and T CR SBA in one lymph node sho wing dermat opathic ly mphadenopathy o f one case w ith M F ⅡA . In 11 patient s of clinically suspected M F , GR w ere present in skin specimens o f 5 cases and bloo d sample of 3 cases by T CR PCR. In no n-myco sis fung oides and S zary syndr om e PCT CL , G R w ere fo und in 9 skin specimens fr om 10 patients det ected by T CR P CR and 6 skin specim ens fr om 8 patient s detected by T CR SBA . G R w ere also seen in 6 bloo d samples fr om 11 patients detected by T CR P CR and 9 bloo d
公司上海分公司) 完全消化。被消化的 DN A 经 0. 8% 琼 脂糖凝 胶电泳后转 移至硝酸 纤维素膜上, 再与 经32P 标 记的 T CR 探针( 0. 77kb 的 P st Ⅰ酶切片段, 与 T CR 双 恒定 区杂交。上海肿 瘤研究所 顾建人教授 惠赠。) 杂交 24 小 时, 将滤 膜在 2×SSC 和 0. 5% SDS 以及 1×SSC 和 0. 1% SDS 反复冲洗后, 在- 70℃下暴露于具 有 KO 双密度隔板的 K o dak A R 与 X 线胶片 48 小时。
作者单位: 200040 上海医科大学皮肤病学研究所皮肤病 理研究室[ 王 平( 现 在南京 铁道医 学院附 属医院 皮肤 科) 、邱丙森] , 生 物物理教 研室( 高红 阳、单易非 ) ; 肿瘤 医院病理科( 许良中)
本文 缩称: SBA : S out hern 印 迹分析, PCR: 聚合 酶链 反 应, PCT CL: 原发性皮 肤 T 细 胞淋巴瘤, T CR: T 细 胞受 体, G R: 基 因重排, M F: 蕈样肉芽 肿, SS: S zary 综 合征, PN CT CL: 非 M F、SS 的 PCT CL, L yP: 淋巴瘤样丘疹病
( 二) 方法: 所有皮肤、淋巴结 和外周 血样品同 时经 T CR P CR 和 T CR SBA 检测 G R。
DN A 抽提: 按标准步骤制备高分子量 DN A 。 T CR G R/ SBA : 每个样品 中 10mg DN A 分别 经限 制性内切酶 BamHⅠ、EcoR Ⅰ和 HindⅢ( 中美生物技术