胶体金诊断试剂在临床诊断中的应用

• 有关优生优育的五项微生物感染的检测， 目前国外已有相应的胶体金诊断制剂，但 均未获得FDA的正式生产批文，此类微生 物感染检测试剂检测线喷涂的为相应的微 生物抗原或重组抗原，可检测人血清பைடு நூலகம்存 在的IgG或IgM类抗体。
小分子化合物胶体金检测试剂
• 低分子量化合物（药品、毒品、及环境中化学污 染物）检测用胶体金试剂的研制不能采用上述的 1000 方法，因为用这些分子量不到1000的化合物免疫 动物后大多只能得到单一位点的抗体，即便是能 得到数株，之间也会存在较大的交叉反应而不能 同时使用。采用免疫学的方法检测这些化合物只 能使用竞争实验，竞争实验用NC膜多采用层析速 度稍慢型的，胶体金结合物与NC膜之间应加合适 的样品垫。
• 以上介绍的为双抗体夹心法测抗原，如果 检测线上喷涂的为抗原，也可以测定抗体， 如HIV I/II、HCV、梅毒抗体胶体金层析试 纸等，检测人血清中的抗体时，质控线喷 涂的为可与标金用抗体反应的单克隆抗体 或多克隆抗体。如标金用的为鼠抗人IgG、 IgM单克隆抗体，质控线克用羊抗鼠多克隆 抗体。
• 目前利用双抗体夹心法开发成功的胶体金 快速诊断试剂有HCG、LH、AFP、CEA、 PSA、HBsAg、血红素（大便潜血）、β2 微球蛋白等检测试剂，这些试剂均已用于 临床检测，特别是HCG、LH、血红素、β2 微球蛋白等试剂，检验样品为尿液或粪便 悬液，较以血清为试样的试剂应用的更为 广泛。
阳性
阴性
失效
胶体金层析试剂
• 胶体金免疫层析技术已得到越来越广泛的应用， 其原理与胶体金渗滤法基本一致，只是将原来的 渗滤改为了层析。就是此项今日看来微不足道的 改动，带动了定性诊断试剂的革命。许多原来必 须用仪器判定的实验，采用此项技术后变的十分 简便。胶体金层析技术适用于定性诊断或检测， 也可做半定量测定。用胶体金层析试剂做精确的 定量测定目前仍有一定的困难，即便是相应的分 析仪器对显色条带能作出精确的定量分析，采用 胶体金试纸法定量还是有相当大的误差。因此试 剂的研制者最好不要将胶体金层析试剂定位为定 量检测试剂。
胶体金诊断试剂的临床应用
• 过去的10年中，各国的诊断制剂研制人员 应用胶体金技术开发出了许多种使用方便 的体外诊断试剂，最早面市的早早孕 （HCG）检测试剂在国内外均得到了极为 广泛的应用，HCG诊断试纸条已为千百万 育龄妇女带来了极大的方便。目前，该种 HCG检测试剂可以方便的从药品零售店获 得，其简便的操作令使用者不经任何培训 即可操作并能准确的判定结果。
• 下图为胶体金层析试剂的图示，与渗滤法试剂相同的是， NC膜上亦预先包被有检测抗体（或抗原）的检测线，另 外还喷有一条质控线。现以检测HbsAg的试纸条为例说明 其工作原理。NC膜上的检测线喷涂的为抗HbsAg单克隆 抗体，质控线喷涂的为羊抗鼠IgG抗体，用BSA封闭NC膜。 将N膜粘贴在塑料垫片的中央。将浸有另一种抗HbsAg单 克隆抗体胶体金结合物的玻璃纤维膜粘贴在NC膜的下端， 上面再覆一层样品垫。在NC膜的另一端粘上吸水纸，这 样试纸条就组装完成了。
• 将胶体金颗粒表面标记上化合物抗体，NC膜上的 检测线喷涂的为含化合物的载体蛋白质，质控线 喷涂的为二抗。试样中的化合物首先与胶体金颗 粒表面的抗体反应，如果试样中化合物的量超过 了某一限值，胶体金表面的抗体位点将不再有剩 余，当胶体金颗粒层析经过检测线时，胶体金颗 粒将不会停留在该线所在的位置，继续上行时与 控制线上喷涂的二抗反应，呈现出胶体金的红色。 如果试样中不含相应的化合物，胶体金表面的抗 体将与检测线上的化合物反应呈现出红色，质控 线也呈现红色。目前已开发出检测尿样中毒品的 多种胶体金检测试剂，如吗啡、海洛因等。
• HBsAg与结合在胶体金表面上的单克隆抗 体结合，在流经NC膜的时，检测线上的单 克隆抗体与结合有胶体金颗粒的HbsAg反 应，并停留在检测线的位置，未结合 HbsAg的胶体金颗粒继续向前流动，流至 质控线位置时与胶体金表面的单克隆抗体 与羊抗鼠IgG反应后停留在质控线的位置， 而多余的胶体金抗体结合物及待检样品将 继续流向吸水纸。
塑料板
NC膜
滤纸
吸水纸
图1、胶体金渗滤试剂组装
• 从图1可以看出，塑料板的中央有一圆形的小孔， 小孔的下面贴有孔径0.45µm的硝酸纤维素膜，将 小孔封闭在NC膜圆孔上，预先点状包被抗原（或 抗体），另外还需质控点（可与金标抗体反应的 二抗），用BSA封闭NC膜。当待检血清（或其它 样品）样品加到NC膜的上面之后，样品将渗透 NC膜进入吸水纸，如果待检样品中有相应的抗体 （或抗原），就会被锚定在膜上；接下来加入标 记胶体金的抗体，在下行渗透的过程中，与已锚 定在膜上的待检物质反应而将胶体金滞留下来， 呈现出红色的斑点。阳性、阴性结果判定如下。
胶体金渗滤试剂
• 胶体金渗滤法诊断制剂前些年国外研究的较多， 但终因其操作复杂未能推广使用。国内前几年也 曾经掀起一股研究胶体金渗滤制剂的开发热，但 均停留在实验室阶段，到目前为止，无任何厂家 向国家药品监督管理局新药审评中心申请生产此 类试剂，对诊断试剂生产厂家来说，该种渗滤法 诊断试剂未能被接受的另一个主要的原因是，规 模化生产有较大的困难，对产品质量难于精确的 控制，在产品质量就是企业生命的今天，很少有 企业生产此种对企业形象不利的试剂。图1为胶体 金渗滤法试剂的组装模式图。
• 目前市场上有数十种利用胶体金技术的产 品可以购得，涉及恶性肿瘤、病毒性感染、 细菌性感染的诊断及毒品和环境污染物的 快速检测。涉及胶体金技术的专利美国有 100多件，国内的也有数件，如果仔细的分 析这些技术，我们不难发现有些专利并无 太大的使用价值，他们多数为新型实验材 料面市以前的专利，因此也就很少有人问 津。胶体金诊断制剂目前应用较多的为胶 体金免疫层析技术，而另外一种胶体金渗 滤法，目前使用的较少。