关于核苷酸和核酸课件

1. 限制性内切酶的分类
➢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ ➢ 基因工程技术中常用Ⅱ型
2. II型限制性内切酶
➢ 不需要ATP参加； ➢ 不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。 ➢ 专门识别和切割特定的核苷酸序列，这
个序列一般含4—6 个核苷酸残基，并具 回文结构“落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边 岸柳垂” 。
Ⅱ类酶识别序列特点
二、DNA的酶法甲基化（methylation）
➢ 甲基供体： S—腺苷甲硫氨酸 ➢ 甲基受体：被修饰碱基（A、C多于G、T） ➢ 碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺
序或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行， 甲基化是可逆的。 ➢ 甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA和外 来DNA；调节基因表达；帮助DNA修复等。
第八节 核酸酶和DNA限制
性内切酶
Biblioteka Baidu 一、核酸酶（nuclease）
➢ 能水解核酸的酶为核酸酶 ➢ 核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）
核酸酶的分类
➢ 按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱 氧核糖核酸酶(DNase)
➢ 按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶 • 内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生
回文结构
palindrome
切口（kerf）：粘端，平端
3.限制性内切酶的种类（约1000多种）
命名naming
Hin dⅢ Haemophilus influenzae d株
流感嗜血杆菌d株的第三种酶
属系 株 序 第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写； 第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写； 第四个字母代表株（strain）； 用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。
4.限制性内切酶 在基因重组中的 应用
三、限制片段的长度和限制图
1. 限制片段的长度 ➢ 识别4个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的
平均长度：256（44） ➢ 识别6个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的
平均长度：4096（46）
2.制性内切酶图谱
限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某 一DNA分子或DNA片段上的排列，由于各酶 切点之间的距离是以碱基对（kbp → mbp）表 示的，所以可计算出二切点间的绝对距离，因 此限制图也称物理图。
关于核苷酸和核酸
目录
一、核酸的化学反应
1.脱氨基作用（脱氨，deamination）
5-甲基胞嘧啶
次黄嘌呤 黄嘌呤
2.脱氧核苷酸的水解 ——脱嘌呤
3.紫外线和一些化学因子、烷化剂对DNA的损伤
亚硝酸
烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）
紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体
4.与嵌合剂的反应
溴乙啶 丫啶橙 放线菌素D
质粒pBR322的限制图
目录
核酸链片段。 • 外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二
酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式： 3’-核酸酶和5’-核酸酶
核酸酶对其底物的作用具有特异性
二、限制性内切酶（restriction endonuclease）
限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门 识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类 酶在原核生物体内，用于“防御”外来DNA的 入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能 力的片段，而自身不受损害（甲基化作用） 。