植物叶片中GSH含量测定

植物叶片中GSH含量测定

一、实验目的

掌握TDBN（巯基试剂显色法）测定GSH含量的原理和步骤。

二、实验原理

还原型谷胱甘肽（GSH）是植物细胞内一种重要的抗氧化剂，直接或间接地参与了许多植物生理活动如硫的代谢和转运。它含有活性巯基，极易被氧化。GSH能与TDBN反应产生GSSG，GSSG呈黄色，在波长412nm处有最大光吸收。因此利用标准曲线法可测定样品中GSH的含量。

三、实验仪器

天平、冷冻离心机、恒温水浴锅、分光光度计、研钵、移液枪等。

四、实验试剂

10µg/mL GSH标准溶液；5%偏磷酸；0.2mol/LpH7.0磷酸钾缓冲液；TDBN试剂

五、实验材料

小麦叶片

六、实验方法

1、样品测定

取两份0.2g叶片，一份为对照，另一份在0℃处理4min。两份叶片剪碎后均加入少量5%偏磷酸，冰浴研磨后分别转移到两支试管中，再加5%偏磷酸定容到6mL，各取3mL在离心管中，平衡后在4℃，10000rpm下离心8min。各取离心后上清2mL，加入4mL磷酸缓冲液和0.4mLTDBN试剂，摇匀后，30℃显色5min。最后测定它们在412nm下的吸光值。

2、标准曲线制作

含量为横坐标，吸光值A为纵坐标，得到标准曲线及其对应的回归方程。

七、实验结果及计算

1、GSH含量（µg/g FW）=(C x·Vt)/(Vs·W)

C x：根据标准曲线计算的2mL提取液中的GSH含量（µg）；

Vt：样品提取液总体积（6mL）；Vs：测定用提取液体积（2mL）；

W：样品鲜重（0.2g）。

2、实验结果：

（1）标准曲线结果

得到标准曲线及回归方程如下图：

（2）样品测定结果计算