重组猪α干扰素的酵母表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用

物 医药 技术有 限公 司 ， 生 牛血 清 购 自杭州 四季 青 新 生 物工 程材料 有 限公 司．
１３ 主要仪 器 ．
机体 免疫 等生 物学 活性 ． 组猪 ａ干扰 素 （ｅｏ ｉ 重 ｒｃｍｂ—
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Ｂｏ ｌ４ ５发酵罐 购 自美 国新 布 朗什 维 克科 学 ｉＦｏ １ 公 司 ，Ｈ 型精密数 显酸 度计 购 自意 大 利 ＨＡＮＮＡ， ｐ
层 析仪 （ ＡＫＴ ｐ ｒ ｉｒ 购 自美 国 通 用 电气 公 司 ， Ａ ｕ ｉｅ ） ｆ ３ １ 列 水 套 Ｃ ２ 养 箱 购 自 Ｔｈ ｒ ｃ ｎｉ ｃ １ ０系 Ｏ培 ｅｍｏ Ｓ ｉ ｔ ｉ ｅ ｆ
第一作 者 ： 张鲁滨 （ ９４）男 ， １ ８ ， 硕士研究生 ， 主要从事兽医微生物与免疫学研 究 基金项 目： 浙江省科技计划项 目（０ ０ ３ ０ ７ ． ２１Ｃ ２８）
收 稿 日期 ：０ ２０ ０ 修 回 日期 ：０ ２０ ７ ２ １ ３１ ； ２ １ ～５１
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中 图分 类 号 ： ５ ． ８ Ｓ８ ８ ２ 文献标志码 ： Ａ 文章 编 号 ： ０ ３４ １ （０ ２０ —０ １０ １ ０—３ ５ ２ １ ）４０ ０ ６
一
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通信 作者 ： 王一成 ， ， 男 研究员 ， 主要从事动物传染病防治技术研究． － ｉ ９ ７ １ ｉ Ｅ ｍａｌ ５ １ ＠ ：
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甘 肃 农 业 大 学 学 报
干扰 素 （ ｔｒｅｏ ，Ｆ 是 由受病 毒 侵 染 细 胞 ｉ ｅｆｒｎ ＩＮ） ｎ
所分 泌 的一种 细胞 因子 ， 有 抗病 毒 、 肿 瘤 、 节 具 抗 调
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取 单 个 菌 落 ， 种 于 ５ Ｂ 接 ｍＩ ＭＧＹ 中 ， ０ ℃ ３
公 司．
程表 达 的一种 干扰 素 ， 有 天 然猪 ａ干 扰 素抗 病 毒 具
的广谱性和高效性． ｅ ｖｅ １ 陈涛等ｌ 、 Ｌ ｆ ｒ 等［ 、 ｅ ］ ２ 曹瑞兵 ］
等口先 后 克 隆 出猪 ａ干扰 素 基 因 ， ］ 并在 大 肠 杆菌 中 成 功表达 ； 海 燕［ 葛 丽 等 ［ 刘 键 等 ［成 功利 用 谢 、 、 ６ ］
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１４ 毕 赤酵母 高效 表达 ｒ ｏＦ － ． Ｐ ｌＮ ￣ 毕 赤酵母 表达 ｒ ｏＦ ａ 照 王朝 文等 的方 Ｐ Ｉ Ｎ— 参
法 并稍 作修 改． 一８ 取 ０℃保存 的毕赤 酵母 ｒｏＦ — Ｐ ＩＮ
ａFra Baidu bibliotek
菌株 ， 线接种 于 Ｙ Ｄ平板 ， ０。 养 ２ｄ 再 挑 划 Ｐ ３ Ｃ培 ，
ｒｓ ｉ ｅ ｍｅ ｔｔｏ ｅ ｃｏ ｎ ｈ ｎ ｉｉｉｎ ｏ Ｐ ｌ ｉ ｎ ａ ｆｒ ｎ ａ ｉｎ ｒ ａ ｔ ｒ ａ ｄ ｔ ｅ ｉ ｈｂ ｔ ｆｒ ｏ ＦＮ— ｏ ｅ ｄ ｒ ｂｅ ｉｕ （ ＲＶ ） ｒ Ｄｉａｉｎ 钾 ｏ ｎ Ｐｓ ｕ ｏ ａ ｉｓｖｒ ｓ Ｐ ｅ ｌ ｔｏ ｃ
（． １甘肃农业 大学 动物医学院 ， 甘肃 兰州 ７ ０ ７ ；． ３ ０ ０ ２ 浙江省农业科学 院畜牧兽 医研究所 ， 浙江 ｇ ＃ ３ ０ ２ ） ｃ ｌ １０ １
摘要 ： 用 自动发酵罐高效分泌表 达 ｒｏＦ ， 硫酸 铵沉 淀 、 ｅｈ ｒｓ Ｆ阴离子 交换 层析 和 Ｓ ｐｒｅ 利 Ｐ ＩＮａ经 Ｑ Ｓ ｐ ａｏ ｅＦ ｕ ｅｄ ２ ０分子筛层析 纯化 重组猪 干扰 素 ， ０ 用纯化 的 ｒ ｏＦ ～ 进行 Ｐ Ｖ体＃ ＮＮｉ ． Ｐ ｌＮ ａ Ｒ ｂ ￣Ｎ 结果 表明 ： 随着表达 时间 的延 长， 发酵表达液 中 ｒ ｏＦ — Ｐ ｌ Ｎ 含量增 高 ， 中 ７ 其 ２ｈ表 达液 中 ｒ ｏＦ — Ｐ ｌ Ｎ 的含 量可 达 ０ ５ ｇ ｕ 约 占总 蛋 白量 的 ． ２ ／ Ｉ， ５． Ｏ ｏ活性 为 １ Ｏ ×１ Ｕ／ Ｉ ｒ ｏＦ — 纯 液 的浓度 为 ７ ０ ，／ｄ ， 度 为 ９． ， ７５ ％， ．０ ０ Ｐ ｌ Ｎ 提 ． ． ２／ ｔ 纯 ｇ ８ １ 活性 高 达 １０ ×１９ ．０ ０ Ｕ／ Ｉ 纯化 ｒ ｏＦ ａ的 Ｐ Ｖ抑制作用 和感染 阻断作用 的 比活均为 １４ Ｘ１ ｔ ， Ｐ Ｖ增殖抑制作用 的比活 ／ ｘ． Ｐ ＩＮ－ Ｒ ． ２ ０ ｕ／， 对 Ｒ ｇ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｔｈ ｅ ｏ ｂｎ ｎ ｏ ｃｎ ｎ ｅｆ ｒ ｎ ａ （ Ｐ ｌ ｓｒ ｃ ： ｅｒ ｃ ｍ ｉ ａ ｔｐ ｒ ｉｅｉ ｔｒｅ ｏ － ｒ ｏ ＦＮ— ）ｗａ ｆｉｉｎ ｌ ｘ ｒ ｓｅ ｖ Ｐｉｈ “ｐ ｓ０ ｄ ｓｅ ｆ ｅ ｔ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｂ ｃ ｉ ａ ｔ～ ｃ ｙ
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２１ ０ ２年 ８月
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大
学
学
报
第 ４７卷
双 月 刊
第 ４ １ 期 ～６
Ｊ ０ＵＲＮＡＩ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＩ ＵＲＡＩ ＵＮＩ ＲＳＴＹ ＶＥ Ｉ
重 组 猪 干 扰 素 的酵母 表 达 及 其 对 伪 狂犬 病 毒 的抑 制 作 用
张 鲁 滨 ， 一 成 吴 润 李 军 星 ， 秀 芳 徐 丽华 王 ， ， 袁 ，
ａ ｄ ｇ ｌ ｉ ｒ ｔ ｎ ｉ ｕ ｎ Ｔｈ ｅ ｕｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｏ ｅ ｒ ｔｄ ｒ ｏ ＦＮ— ｎ ｓ Ｄ ｒ ａ ａ ｔ ｎ ｅ ｌ ａ ｉ ｎ ｔ ｒ ． ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆｓ ｃ ｅｅ Ｐ Ｉ ｆｔ ｏ ｏ ａ ｉ ｕ ｅｎ ｔｎ
为 １４ １。Ｕ／ ｇ 表 明发 酵表 达 的 ｒ ｏＦ － 对 伪 狂 犬 病 毒 病 具 有 良好 的抑 制 活性 ， 进 一 步 开 展 重 组 猪 干 扰 ．２ ０ ｘ ｔ． ＊ Ｐ ｌＮ ａ 为
素临床试验提供依据 ． 关键词 ： ａ干扰素 ； 猪 巴斯 德毕赤 酵母 ； 酵母表达 ； 伪狂犬病毒 ； 制作用 抑
毕赤 酵母 表 达 了 ｒ ｏＦ 目前 ｒ ｏＦ ａ已成 为 Ｐ ＩＮ Ｐ ｌ Ｎ— 兽 用生物 制药 领域 的研 究 热点 ， 被广 泛 应 用 于抗 病 毒研 究 ｌ ］ ７． 伪 狂 犬 病 是 由 伪 狂 犬 病 毒 （ ｅｄ ｒ ｂｅ ｖ— Ｐｓｕ ｏ ａ ｉｓ ｉ ｒ ｓＰ Ｖ） ｕ ， Ｒ 引起 的传染病 ， 致母猪 发生 流产 、 产 ， 可 死 哺乳 仔猪 表现 发热 、 神经症 状 和极高 的死 亡率 ， 可造