氨基丁酸测定方法

γ-氨基丁酸含量的测定
1. 原理：
将γ-氨基丁酸水溶液样品用微量进样器点在层析纸上，垂直置于盛有展开剂的密闭槽中，因毛细管的作用原理，溶剂沿层析纸向上移动，并带动样品中各组分向上移动，由于各组分性质不同，移动的距离也不同，从而使样品中的各组分相互分离开来，经过加温后展开剂中的茚三酮与氨基酸作用呈显紫红色斑点,显示出各斑点的位置，剪取与标准相同 Rf值的紫红色斑点，用洗脱剂溶出，在512nm处测定样品与各浓度标准的光密度,制作标准曲线,或通过曲线方程求出样品中的γ-氨基丁酸含量。

2.仪器与试剂：
2.1 仪器
紫外分光光度计
电热恒温干燥箱
层析缸
2.2 试剂
γ-氨基丁酸标准品: （7mg/ml）
层析纸：（新华1#）
展开剂: 正丁醇: 冰醋酸: 水(6:1:3内含0.5%茚三酮)
洗脱剂: 75%乙醇: CuSO4.5H2O = 38:2(V/W)
3.操作步骤
3.1 展开剂的处理：
按上述比例混合转移至分液漏斗振摇后静置分层,弃去水层,取上层有机相放置2天后使用。

3.2 样品的测定：
准确称取样品1.5克(精确到0.0001)加水溶解于50ml容量瓶中,超声波溶解10分
钟,加水至刻度备用。

测定时精密吸取4μl与制作标准曲线时同时点样。

3.3 标准曲线的制作：
精确吸取γ-氨基丁酸标准液2μl 4μl 6μl。

分别点样于层析纸距层析纸底部2厘米处，样品间距为2.5厘米，点样完毕后制成圆筒，先悬于层析缸中1小时，再放入层析缸中，以上行法在30℃恒温条件下展开至距层析纸上端2厘米处，取
出风干后置烘箱加热显色，分别剪取各标准斑点以及与标准斑点相同 Rf值的样品斑点，用5ml洗脱剂振摇溶出，以相同面积的层析纸作为空白，在512nm处测定样品与各标准的光密度,制作标准曲线,通过计算求出样品中的γ-氨基丁酸含量。

4.结果的计算
X = A×5/4×W
X: 样品中的γ-氨基丁酸含量 %
A: 曲线上求得的γ-氨基丁酸含量μg W：样品用量 g。