【CN109596842A】一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹海默症检测中的应用【专利】
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(72)发明人 陈萃英 谈宗男 朱宏章 杨昕
(74)专利代理机构 南京北辰联和知识产权代理 有限公司 32350
代理人 王真
(51)Int .Cl . G01N 33/68(2006 .01)
( 54 )发明 名称 一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹
海默症检测中的应用 ( 57 )摘要
本发明提供了一种阿尔兹海默症检测试剂， 包括AD1 ：A与B按照体积1:1混合 ，其中A ：5 .0% SDS，pH为8 .3，B：2 .2U/µL的PNGaseF与3 .33%的 NP-40按体积比 1:20混合配制 ；AD2 ：混合同 体积 的20mM的APTS和1M的NaCNBH3 ；AD3 ：100mM的 NH4AC 、2mU/µ L唾液酸酶 和双氧水按照体 积5:1: 14混合 ；AD4 ：缓 冲液。本发明还提供了一种组合 物在阿尔兹海默症检测试剂中的应用，所述组合 物由NGA2F和NA2组成 ，所述组合物通过NGA2F/ NA2的比值来检测阿尔兹海默症。本发明采用灵 敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳 定性好和高通量的检测方法，与现有技术相比 ， 准确度达到87 .7%，明显优于现有的检测方法。
(10)申请公布号 CN 109596842 A (43)申请公布日 2019.04.09
权利要求书1页 说明书4页 附图2页
CN 109596842 A
CN 109596842 A
权 利 要 求 书
1/1 页
1 .一种阿尔兹海默症检测试剂，其特征在于：包括AD1：A与B按照体积1:1混合，其中A： 5 .0% SDS，pH为8 .3，B：2 .2U/µL的PNGaseF与3 .33%的NP-40按体积比1:20混合配制；AD2：混 合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；AD3：100mM的NH4AC、2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照 体积5:1:14混合；AD4：缓冲液。
3ຫໍສະໝຸດ Baidu
CN 109596842 A
说 明 书
2/4 页
度不高。脑脊液检测创伤较大、尚无其它血液检测及病理检测方法，本发明提供一种应用在 阿尔兹海默症检测中的阿尔兹海默症检测试剂。 [0008] 本发明采用的技术方案如下：
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910038773 .1
(22)申请日 2019 .01 .16
( 66 )本国优先权数据 201811633240 .X 2018 .12 .29 CN
(71)申请人 江苏先思达生物科技有限公司 地址 225312 江苏省泰州市中国医药城口 泰路东侧、新阳路北侧G26幢六层东侧 申请人 先思达（南京）生物科技有限公司 常州吉泰生物科技有限公司
发明内容 [0005] 糖蛋白的N-寡聚糖合成是通过上百种酶、转录因子、离子通道和蛋白之间复杂的 相互作用而形成。N-寡聚糖参与多种分子过程，如蛋白折叠，细胞粘附 ，分子迁移，信号转 导，调节受体活性等。因此N-寡聚糖的改变与疾病紧密相关。 [0006] 通 过 前 期 大 量 研 究 发 现 ，在 阿 尔 兹 海 默 症 患 者 血 清 中 ，N - 寡 聚 糖 anagalactosylated , core-a-1 ,6-fucosylated biantennary glycan (NGA2F) ， bigalactosylated ,biantennary glycan (NA2)相对含量与正常血清中相比 ，发生了明显 变化，因此可作为检测阿尔兹海默症的标志物。 [0007] 针对现有的阿尔兹海默症检测中，认知功能问卷检测及影像学检测特异性和准确
CN 109596842 A
说 明 书
1/4 页
一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹海默症检测中的 应用
技术领域 [0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔 兹海默症检测中的应用。
背景技术 [0002] 阿尔兹海默症就是俗称的老年痴呆，是一种大脑的退行性改变，主要表现为进行 性记忆和认知功能障碍。目前公认的阿尔兹海默症主要的病理改变是脑内β淀粉样斑块的 形成和tau蛋白介导的神经纤维缠结。阿兹海默症发病率随年龄显著增高。一般发生在65岁 以后，起病不易察觉，发展缓慢，最早期往往是以逐渐加重的健忘开始，常常是阿兹海默病 的先兆。主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症 状 ，严重影响社交 、职业与生活功能。阿 尔茨海默 病是老年人的 脑部疾病 ，患者的 脑细胞会 急速退化，但并不是正常的衰老过程。 [0003] 根据国际阿兹海默症协会2015年报告，每年新发痴呆病例990万，到2050年，全球 患有痴呆的人数将从目前的4600万人增加至1 .315亿人，68%的增长将发生在低中收入国 家。目前，痴呆是继心血管病、脑血管病和恶性肿瘤之后，老年人健康的“第四大杀手”；是在 癌症和心脏病后排名第三的花费最大的疾病。阿兹海默症已成为严重危害老年人群健康和 影响我国可持续发展的主要疾病之一，如何对其开展有效的早期诊断和治疗是应对老龄化 社会的一个重大挑战。 [0004] 2018年4月《，2018中国痴呆与认知障碍诊治指南》正式发表，指南的第二部分对阿 尔茨海默病的诊断提出了建议： 临床AD诊断可依据1984年NINCDS-ADRDA或2011版NIA-AA
提出的AD诊断标准进行诊断。 有条件进行AD分子影像检查和脑脊液检测时，可依据2011
版NIA-AA或2014版IWG-2诊断标准进行AD诊断。 应提高对不典型AD的诊断意识。由此可 见，阿尔兹海默症的诊断仍然十分复杂，临床上大多使用检测认知功能的问卷测验、脑脊液 化验以及结合影像学进行诊断。抽取脑脊液有较大创伤性，目前市场上无通过血液检查，就 可以辅助诊断阿尔兹海默症的的试剂。
2 .根据权利要求1所述的阿尔兹海默症检测试剂，其特征在于：所述AD1的体积为4µL， AD2的体积为2µL，AD3体积为2µL，AD4体积为200µL。
3 .一种组合物在阿尔兹海默症检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NA2组成，所 述组合物通过NGA2F/NA2的比值来检测阿尔兹海默症。
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(74)专利代理机构 南京北辰联和知识产权代理 有限公司 32350
代理人 王真
(51)Int .Cl . G01N 33/68(2006 .01)
( 54 )发明 名称 一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹
海默症检测中的应用 ( 57 )摘要
本发明提供了一种阿尔兹海默症检测试剂， 包括AD1 ：A与B按照体积1:1混合 ，其中A ：5 .0% SDS，pH为8 .3，B：2 .2U/µL的PNGaseF与3 .33%的 NP-40按体积比 1:20混合配制 ；AD2 ：混合同 体积 的20mM的APTS和1M的NaCNBH3 ；AD3 ：100mM的 NH4AC 、2mU/µ L唾液酸酶 和双氧水按照体 积5:1: 14混合 ；AD4 ：缓 冲液。本发明还提供了一种组合 物在阿尔兹海默症检测试剂中的应用，所述组合 物由NGA2F和NA2组成 ，所述组合物通过NGA2F/ NA2的比值来检测阿尔兹海默症。本发明采用灵 敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳 定性好和高通量的检测方法，与现有技术相比 ， 准确度达到87 .7%，明显优于现有的检测方法。
(10)申请公布号 CN 109596842 A (43)申请公布日 2019.04.09
权利要求书1页 说明书4页 附图2页
CN 109596842 A
CN 109596842 A
权 利 要 求 书
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1 .一种阿尔兹海默症检测试剂，其特征在于：包括AD1：A与B按照体积1:1混合，其中A： 5 .0% SDS，pH为8 .3，B：2 .2U/µL的PNGaseF与3 .33%的NP-40按体积比1:20混合配制；AD2：混 合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；AD3：100mM的NH4AC、2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照 体积5:1:14混合；AD4：缓冲液。
3ຫໍສະໝຸດ Baidu
CN 109596842 A
说 明 书
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度不高。脑脊液检测创伤较大、尚无其它血液检测及病理检测方法，本发明提供一种应用在 阿尔兹海默症检测中的阿尔兹海默症检测试剂。 [0008] 本发明采用的技术方案如下：
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910038773 .1
(22)申请日 2019 .01 .16
( 66 )本国优先权数据 201811633240 .X 2018 .12 .29 CN
(71)申请人 江苏先思达生物科技有限公司 地址 225312 江苏省泰州市中国医药城口 泰路东侧、新阳路北侧G26幢六层东侧 申请人 先思达（南京）生物科技有限公司 常州吉泰生物科技有限公司
发明内容 [0005] 糖蛋白的N-寡聚糖合成是通过上百种酶、转录因子、离子通道和蛋白之间复杂的 相互作用而形成。N-寡聚糖参与多种分子过程，如蛋白折叠，细胞粘附 ，分子迁移，信号转 导，调节受体活性等。因此N-寡聚糖的改变与疾病紧密相关。 [0006] 通 过 前 期 大 量 研 究 发 现 ，在 阿 尔 兹 海 默 症 患 者 血 清 中 ，N - 寡 聚 糖 anagalactosylated , core-a-1 ,6-fucosylated biantennary glycan (NGA2F) ， bigalactosylated ,biantennary glycan (NA2)相对含量与正常血清中相比 ，发生了明显 变化，因此可作为检测阿尔兹海默症的标志物。 [0007] 针对现有的阿尔兹海默症检测中，认知功能问卷检测及影像学检测特异性和准确
CN 109596842 A
说 明 书
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一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔兹海默症检测中的 应用
技术领域 [0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种阿尔兹海默症检测试剂及其在阿尔 兹海默症检测中的应用。
背景技术 [0002] 阿尔兹海默症就是俗称的老年痴呆，是一种大脑的退行性改变，主要表现为进行 性记忆和认知功能障碍。目前公认的阿尔兹海默症主要的病理改变是脑内β淀粉样斑块的 形成和tau蛋白介导的神经纤维缠结。阿兹海默症发病率随年龄显著增高。一般发生在65岁 以后，起病不易察觉，发展缓慢，最早期往往是以逐渐加重的健忘开始，常常是阿兹海默病 的先兆。主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症 状 ，严重影响社交 、职业与生活功能。阿 尔茨海默 病是老年人的 脑部疾病 ，患者的 脑细胞会 急速退化，但并不是正常的衰老过程。 [0003] 根据国际阿兹海默症协会2015年报告，每年新发痴呆病例990万，到2050年，全球 患有痴呆的人数将从目前的4600万人增加至1 .315亿人，68%的增长将发生在低中收入国 家。目前，痴呆是继心血管病、脑血管病和恶性肿瘤之后，老年人健康的“第四大杀手”；是在 癌症和心脏病后排名第三的花费最大的疾病。阿兹海默症已成为严重危害老年人群健康和 影响我国可持续发展的主要疾病之一，如何对其开展有效的早期诊断和治疗是应对老龄化 社会的一个重大挑战。 [0004] 2018年4月《，2018中国痴呆与认知障碍诊治指南》正式发表，指南的第二部分对阿 尔茨海默病的诊断提出了建议： 临床AD诊断可依据1984年NINCDS-ADRDA或2011版NIA-AA
提出的AD诊断标准进行诊断。 有条件进行AD分子影像检查和脑脊液检测时，可依据2011
版NIA-AA或2014版IWG-2诊断标准进行AD诊断。 应提高对不典型AD的诊断意识。由此可 见，阿尔兹海默症的诊断仍然十分复杂，临床上大多使用检测认知功能的问卷测验、脑脊液 化验以及结合影像学进行诊断。抽取脑脊液有较大创伤性，目前市场上无通过血液检查，就 可以辅助诊断阿尔兹海默症的的试剂。
2 .根据权利要求1所述的阿尔兹海默症检测试剂，其特征在于：所述AD1的体积为4µL， AD2的体积为2µL，AD3体积为2µL，AD4体积为200µL。
3 .一种组合物在阿尔兹海默症检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NA2组成，所 述组合物通过NGA2F/NA2的比值来检测阿尔兹海默症。
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