1细菌学检验概论PPT课件
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培养基（culture medium） 是由人工方法配制而 成的，专供微生物生长 繁殖使用的混合营养物 制品。
05.12.2020
17
(一)培养基的组成成分
1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂
05.12.2020
鉴定细菌
与致病性有关
选择抗菌药物参考
革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌
05.12.2020
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2．抗酸染色（acid-fast stain） 方法：
1、石炭酸复红初染加热3~5min，水洗 2、3% ~ 5%盐酸酒精脱色30s，水洗 3、碱性美蓝复染30s，水洗。 原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，
方法：
1、结晶紫初染
1 min
2、卢戈氏碘液媒染
1 min
3、95％酒精脱色 30sec～1 min 4、稀释石炭酸复红复染 1ຫໍສະໝຸດ Baidumin 原理：
G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色 牢固
G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁脂质含 量高
G+含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、 碘结合成大分子复合物
意义：
4.鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量， 在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。
5.异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。
05.12.2020
13
（二）常用的染色方法
6.芽胞染色：
05.12.2020
7.墨汁染色: 一般用于新型隐 球菌检查
14
选择培养基 接种
第三节 细菌的分离培养和鉴定
选择培养方法
选择可疑菌落
选择鉴定方法
05.12.2020
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细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择
二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法
三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验
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一、培养基的种类和选择
2
第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则 1．早期采集 2．无菌操作 3．根据目的菌的特性用不同的方法采集 4．采集量适当 5．注意生物安全
05.12.2020
3
第一节 标本的采集和处理原则
二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2. 其他各种标本采集后最好在2h之内送到实验室 3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存 4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应
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（二）培养基种类---按成分和培养目的
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（differential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
05.12.2020
临床细菌学检验概述
Introduction on Clinic and Diagnostic Bacteriology
学系 病原
周天戟 教授
05.12.2020
1
本章内容
第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法
05.12.2020
05.12.2020
5
细菌感染的检验程序
直接涂片镜检 初步诊断
分离培养
形态学试验 生化试验 免疫学试验 动物试验
免疫学试验 分子生物学技术 其他检测技术
辅助诊断
药物敏感试验
明确诊断
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第二节 细菌的形态学检查
细菌形态学检查的意义
1.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 2.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊
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一、不染色标本
1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动 力及运动状况
2.常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显
的方向性位移
无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无
位置的改变
3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌， 制动试验阳性，可初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。
超过24h
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５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全 防护
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装 好，防止送检过程中倒翻或碰破流出
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须 按规定包装，由专人运送
８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送
断和治疗疾病有一定的参考意义 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的
初步识别和分类，用于细菌鉴定
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细菌的形态学检查法
•不染色标本的检查：初步观察、细菌动力 •单染色法：细菌形态 •复染色法：细菌形态、结构与鉴别
革兰染色法（Gram stain）
•抗酸染色法（acid-fast stain） 特殊染色法：负染色、鞭毛染色
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二、染色标本
（一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
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（二）常用的染色方法
1．革兰染色（gram stain）
其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合 成牢固的复合物，能抵抗脱色
意义：可将细菌分为两大类：
-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
（二）常用的染色方法
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（二）常用的染色方法
3．荧光染色
（1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临 床细菌鉴定中有很大的实用价值。
（2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌 及痢疾志贺菌等的检测。
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1．基础培养基
含有基础生长所需的基本 营养成分，最常用的是肉浸液， 俗称肉汤（broth），主要成 分含牛肉浸液和蛋白胨。
用于培养一般细菌
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2．营养培养基（nutrient medium）
最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等， 用于培养营养要求较高的病原性细菌
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(一)培养基的组成成分
1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂
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鉴定细菌
与致病性有关
选择抗菌药物参考
革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌
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2．抗酸染色（acid-fast stain） 方法：
1、石炭酸复红初染加热3~5min，水洗 2、3% ~ 5%盐酸酒精脱色30s，水洗 3、碱性美蓝复染30s，水洗。 原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，
方法：
1、结晶紫初染
1 min
2、卢戈氏碘液媒染
1 min
3、95％酒精脱色 30sec～1 min 4、稀释石炭酸复红复染 1ຫໍສະໝຸດ Baidumin 原理：
G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色 牢固
G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁脂质含 量高
G+含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、 碘结合成大分子复合物
意义：
4.鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量， 在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。
5.异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。
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（二）常用的染色方法
6.芽胞染色：
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7.墨汁染色: 一般用于新型隐 球菌检查
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选择培养基 接种
第三节 细菌的分离培养和鉴定
选择培养方法
选择可疑菌落
选择鉴定方法
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细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择
二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法
三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验
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一、培养基的种类和选择
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第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则 1．早期采集 2．无菌操作 3．根据目的菌的特性用不同的方法采集 4．采集量适当 5．注意生物安全
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第一节 标本的采集和处理原则
二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2. 其他各种标本采集后最好在2h之内送到实验室 3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存 4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应
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（二）培养基种类---按成分和培养目的
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（differential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
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临床细菌学检验概述
Introduction on Clinic and Diagnostic Bacteriology
学系 病原
周天戟 教授
05.12.2020
1
本章内容
第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法
05.12.2020
05.12.2020
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细菌感染的检验程序
直接涂片镜检 初步诊断
分离培养
形态学试验 生化试验 免疫学试验 动物试验
免疫学试验 分子生物学技术 其他检测技术
辅助诊断
药物敏感试验
明确诊断
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第二节 细菌的形态学检查
细菌形态学检查的意义
1.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 2.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊
05.12.2020
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一、不染色标本
1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动 力及运动状况
2.常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显
的方向性位移
无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无
位置的改变
3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌， 制动试验阳性，可初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。
超过24h
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５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全 防护
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装 好，防止送检过程中倒翻或碰破流出
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须 按规定包装，由专人运送
８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送
断和治疗疾病有一定的参考意义 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的
初步识别和分类，用于细菌鉴定
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细菌的形态学检查法
•不染色标本的检查：初步观察、细菌动力 •单染色法：细菌形态 •复染色法：细菌形态、结构与鉴别
革兰染色法（Gram stain）
•抗酸染色法（acid-fast stain） 特殊染色法：负染色、鞭毛染色
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二、染色标本
（一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
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（二）常用的染色方法
1．革兰染色（gram stain）
其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合 成牢固的复合物，能抵抗脱色
意义：可将细菌分为两大类：
-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
（二）常用的染色方法
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（二）常用的染色方法
3．荧光染色
（1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临 床细菌鉴定中有很大的实用价值。
（2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌 及痢疾志贺菌等的检测。
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1．基础培养基
含有基础生长所需的基本 营养成分，最常用的是肉浸液， 俗称肉汤（broth），主要成 分含牛肉浸液和蛋白胨。
用于培养一般细菌
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2．营养培养基（nutrient medium）
最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等， 用于培养营养要求较高的病原性细菌
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