最新HPLC法测定北苍术中苍术素的含量1

H P L C法测定北苍术中
苍术素的含量1
HPLC法测定北苍术中苍术素的含量
摘要：苍术具有燥湿健脾，祛风湿的功效。

主治湿阻中焦，风寒湿痹，脚膝
肿痛，痿软无力，雀目夜盲。

采用高效液相色谱法测定了北苍术挥发油中苍术素含量。

该实验采用岛津LC-8A高岛效色谱仪，以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,其中甲醇的流速为0.8mL/m in,水的流速为0.2mL/m in。

实验结果如下：北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。

该方法操作简单,结果准确,重现性好,无需再作处理，无环境污染，可用于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。

关键词: 高效液相色谱法含量测定北苍术苍术素挥发油
目录
致谢 (8)
致谢 (8)
引言：中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lan-cea(Thunb. ) DC.或北苍术Atractylodes chinen-sis(DC. ) Koidz.的干燥根茎,始载于《神农本草经》,具有燥湿健脾、祛风湿、明目之功效,临床仍用于湿滞中焦证、风湿痹证及外感风寒挟湿之表证，为中医常用药材之一。

与苍术燥湿健脾功效相关的药理作用为调整胃肠运动功能，抗溃疡（苍术有较强的抗溃疡作用。

实验发现，北苍术对幽门结扎型溃疡、幽门结扎-阿司匹林溃疡、应激性溃疡有较强的抑制作用，能显著抑制溃疡、动物的胃
液量、总酸度、总消化能力及胃黏膜损害。

研究认为，苍术抗溃疡作用机理主要有两个方面：①抑制胃酸分泌：北苍术挥发油中的苍术醇能抑制甾体激素的释放，减轻甾体激素对胃酸分泌的刺激。

②增强胃黏膜保护作用：北苍术可使胃黏膜组织血流量增加，从苍术中提取的氨基己糖具有促进胃黏膜修复作用。

），保肝，抑菌等作用。

而降血糖，抗缺氧，中枢抑制，抗肿瘤，促进骨骼钙化及对心血管系统的影响等作用，则是其药理作用的现代研究进展。

苍术的主要化学成分如下：苍术根茎含挥发油，挥发油中主含苍术素（atractylodin）、β-桉油醇（β-eudesmol）、茅术醇（hinesol）、羟基苍术酮（hydroxy-atractylon）等。

其余主含β-桉叶醇和苍术呋喃烃，还含β-芹子烯，左旋的α甜没药萜醇（α-bisabolol），茅术醇，榄香醇，苍术酮，芹子二烯酮等。

又含聚乙炔化合物：苍术呋喃烃醇（atractyoldinol)，乙酰基苍术呋喃烃醇（acetylα-tractylodinol）。

苍术素的结构式：
苍术素的性状为brown powder，分子式为 C13H10O，分子量为
182.2179。

其药理作用为保肝，抗缺氧，降血糖，抗炎抗肿瘤，抗菌抗病毒，抗心律失常，对消化道的作用及对神经系统的作用等。

《中国药典》至今仅有其对照药材(苍术素)的鉴别,尚无其含量测定标准。

苍术的主要有效成分为聚乙炔类成分,即主要为苍术素。

本文以苍术素为指标,
采用高效液相色谱法(HPLC)建立了北苍术中挥发油的有效成分苍术素的含量测定方法,为苍术的质量标准研究提供了依据与方法。

1.实验内容
1.1仪器及试剂
仪器：DW-2型调温电热器（规格5000ml，功率1000w），回流冷凝管（直型），挥发油提取器，5000ml圆底烧瓶，变压器，15ml容量瓶，胶头滴管，2ml移液管，试剂瓶，超声波清洗器，一次性针管，微孔滤膜，电子天平，Shimadzu LC-8A 制备型高效液相色谱仪。

OH），乙酸乙酯(Et0Ach)，水，苍术素对照试剂：北苍术，甲醇（CH
3
品。

1.2色谱条件的选择
色谱条件的选择:选择了甲醇-水常见的流动相系统,结果表明在这个系统中色谱峰的峰形较好,基线平稳,故选择甲醇-水系统为流动相。

当采用体积分数为50%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰太慢，时间太长;当采用体积分数为80%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰时间为10min左右，时间较合理，此时色谱峰的峰形较好,基线平稳，因此最终优化的色谱条件如下：进样体积:20μ
L;流动相:水(A)-甲醇(B)溶液,其中泵A（水）的流速为0.2ml/min、泵B（甲醇）的流速为0.8ml/min。

1.3高效液相色谱法（HPLC）的原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

1.4北苍术中挥发油的提取
称取500.8g北苍术，将其放入5000ml圆底烧瓶内，并加水至圆底烧瓶
1/2处，然后将其放置于DW-2型调温电热器内，在圆底烧瓶口装上挥发油提取器，接着在提取器口上套上回流冷凝管，接上水，打开电源，开始加热。

加热两个小时左右开始沸腾，等待提取器中挥发油的出现，并提取1ml左右的挥发油。

1.5标准曲线的绘制
首先称取苍术素纯品5.0mg，放入1号15ml容量瓶中，接着取10ml乙酸乙酯放入1号瓶内，然后用超声波加速溶解10min，取出待冷却后，加甲醇至刻度线，摇匀。

接着用移液管从1号容量瓶中移取12.5ml的溶液置于2号容量瓶
中，再向2号中加甲醇至刻度线，依次类推，完成3号、4号、5号、6号容量瓶溶液的配制，则六瓶溶液浓度依次递减。

然后按浓度由小到大的顺序依次进样，即分别精密吸取0.0000172mol/L，0.0000343mol/L，
0.0000687mol/L，0.000137mol/L，0.000275mol/L，0.000549mol/L各20μL，每个浓度进样两次，测两次峰面积，最后平均同一浓度下的两次峰面积，结果见表一。

接着以平均后的峰面积为纵坐标，苍术素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图（1），得方程方程y=6397683284.6435x+78880.1304，相关系数
R2=0.9942，R=0.9971。

1.6苍术素的含量测定
将溶于甲醇的挥发油（挥发油为0.0497g）转移至15ml的容量瓶中，加甲醇至刻度线，可再加2ml乙酸乙酯助溶。

摇匀，然后用移液管从中取出1ml，移至小试剂瓶中，再加1ml甲醇稀释，摇匀，用微型滤膜过滤。

接着取20μL该溶液，注入高效液相色谱仪中，在10min处开始出峰，见图（2）。

重复操作一次，最后平均两个峰面积。

将该峰面积代入标准曲线方程，最后计算挥发油中苍术素的含量，即北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。

2.结果
2.1标准曲线
表2-1
浓度（mol/L
）0.000549 0.000275 0.000137 0.000068
7
0.000034
3
0.000017
2
平均峰面
积(mAU) 3607625.
7
1722134.
8
1113581.1
5
579613.1 245391.7 122109.5
图（1）苍术素标准曲线2.2 高效液相色谱图
图（2）苍术素样品溶液高效液相色谱图
图（3）苍术素标准品溶液高效液相色谱图
2.3苍术素的含量
北苍术挥发油中苍术素的平均峰面积为2111301.2，将该数据代入方程
y=6397683284.6435x+78880.1304，得其中苍术素浓度为3.177 10-4 mol/L，再经进一步计算，最终得北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。

2.讨论
采用本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法（HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。

实验结果：北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。

高效液相色谱以经典的液相色谱为基础，是以高压下的液体为流动相的色谱过程。

通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。

所用的固定相为大于100um 的吸附剂（硅胶、氧化铝等）。

这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大，传质扩散慢，因而柱效低，分离能力差，只能进行简单混合物的分离。

而高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、传质快、柱效高。

当然我们在操作高效液相色谱仪时，失误也是有的，例如进样是对的，却不出峰、或者出峰有偏差。

但经过讨论和总结，明白了要确保高效液相色谱仪出峰，就要在注射样品溶液后快速、平稳地从LOAD 状态转换到INJECT 状态,以保证进样量的准确。

苍术素在消化道系统、抗炎、利胆及黄嘌呤氧化酶(XO)阻碍等方面均显示良好的活性,其活性与苍术药材本身的功效接近;另外,该类成分主要存在于苍术中,且含量较高。

因此以苍术素为指标,建立其含量测定方法更为合理。

3.结论
本文建立的苍术素含量的测定方法,即运用高效液相色谱法（HPLC)，此方法简单、可靠、易于操作、重现性好、无需再作处理、无环境污染，对于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。

建议有关部门将本方法作为苍术质量标准中含量测定的检测方法。

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致谢
非常感谢张老师在毕业设计阶段给自己的指导，从最初的定题，到资料的收集，到写作、修改，到论文定稿，他给了我耐心的指导和无私的帮助。

为了指导我们的毕业论文，他放弃了自己的休息时间，他的这种无私奉献的敬业精神令人钦佩，在此我向他表示我诚挚的谢意。

同时，感谢所有的任课老师和所有的同学在这三年来给自己的指导和帮助，是他们教会了我专业知识，教会了我如何学习，教会了我如何做人。

正是由于他们，我才能在各方面取得显著的进步，在此向他们表示我由衷的谢意，并祝所有的老师培养出越来越多的优秀人才，桃李满天下！
通过这一阶段努力，我的毕业论文《HPLC法测定北苍术中苍术素的含量》终于完成了，这意味着大学生活即将结束。

在大学阶段，我在学习上和思想上都受益匪浅，这除了自身的努力外，与各位老师、同学和朋友的关心、支持和鼓励是分不开的。

写作毕业论文是再一次系统学习的过程，毕业论文的完成，同样也意味着新的学习生活的开始。

我将铭记我曾是扬州环境资源职业技术学院的学子，在今后的工作中我会继续将环资的优良传统发扬光大。

感谢各位专家的批评指导。