最新HPLC法测定北苍术中苍术素的含量1

H P L C法测定北苍术中

苍术素的含量1

HPLC法测定北苍术中苍术素的含量

摘要：苍术具有燥湿健脾，祛风湿的功效。主治湿阻中焦，风寒湿痹，脚膝

肿痛，痿软无力，雀目夜盲。采用高效液相色谱法测定了北苍术挥发油中苍术素含量。该实验采用岛津LC-8A高岛效色谱仪，以甲醇-水溶液为流动相进行梯度洗脱,其中甲醇的流速为0.8mL/m in,水的流速为0.2mL/m in。实验结果如下：北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。该方法操作简单,结果准确,重现性好,无需再作处理，无环境污染，可用于北苍术挥发油中苍术素含量的测定,具有很高的实用价值。

关键词: 高效液相色谱法含量测定北苍术苍术素挥发油

目录

致谢 (8)

致谢 (8)

引言：中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lan-cea(Thunb. ) DC.或北苍术Atractylodes chinen-sis(DC. ) Koidz.的干燥根茎,始载于《神农本草经》,具有燥湿健脾、祛风湿、明目之功效,临床仍用于湿滞中焦证、风湿痹证及外感风寒挟湿之表证，为中医常用药材之一。

与苍术燥湿健脾功效相关的药理作用为调整胃肠运动功能，抗溃疡（苍术有较强的抗溃疡作用。实验发现，北苍术对幽门结扎型溃疡、幽门结扎-阿司匹林溃疡、应激性溃疡有较强的抑制作用，能显著抑制溃疡、动物的胃

液量、总酸度、总消化能力及胃黏膜损害。研究认为，苍术抗溃疡作用机理主要有两个方面：①抑制胃酸分泌：北苍术挥发油中的苍术醇能抑制甾体激素的释放，减轻甾体激素对胃酸分泌的刺激。②增强胃黏膜保护作用：北苍术可使胃黏膜组织血流量增加，从苍术中提取的氨基己糖具有促进胃黏膜修复作用。），保肝，抑菌等作用。而降血糖，抗缺氧，中枢抑制，抗肿瘤，促进骨骼钙化及对心血管系统的影响等作用，则是其药理作用的现代研究进展。

苍术的主要化学成分如下：苍术根茎含挥发油，挥发油中主含苍术素（atractylodin）、β-桉油醇（β-eudesmol）、茅术醇（hinesol）、羟基苍术酮（hydroxy-atractylon）等。其余主含β-桉叶醇和苍术呋喃烃，还含β-芹子烯，左旋的α甜没药萜醇（α-bisabolol），茅术醇，榄香醇，苍术酮，芹子二烯酮等。又含聚乙炔化合物：苍术呋喃烃醇（atractyoldinol)，乙酰基苍术呋喃烃醇（acetylα-tractylodinol）。

苍术素的结构式：

苍术素的性状为brown powder，分子式为 C13H10O，分子量为

182.2179。其药理作用为保肝，抗缺氧，降血糖，抗炎抗肿瘤，抗菌抗病毒，抗心律失常，对消化道的作用及对神经系统的作用等。

《中国药典》至今仅有其对照药材(苍术素)的鉴别,尚无其含量测定标准。苍术的主要有效成分为聚乙炔类成分,即主要为苍术素。本文以苍术素为指标,

采用高效液相色谱法(HPLC)建立了北苍术中挥发油的有效成分苍术素的含量测定方法,为苍术的质量标准研究提供了依据与方法。

1.实验内容

1.1仪器及试剂

仪器：DW-2型调温电热器（规格5000ml，功率1000w），回流冷凝管（直型），挥发油提取器，5000ml圆底烧瓶，变压器，15ml容量瓶，胶头滴管，2ml移液管，试剂瓶，超声波清洗器，一次性针管，微孔滤膜，电子天平，Shimadzu LC-8A 制备型高效液相色谱仪。

OH），乙酸乙酯(Et0Ach)，水，苍术素对照试剂：北苍术，甲醇（CH

3

品。

1.2色谱条件的选择

色谱条件的选择:选择了甲醇-水常见的流动相系统,结果表明在这个系统中色谱峰的峰形较好,基线平稳,故选择甲醇-水系统为流动相。当采用体积分数为50%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰太慢，时间太长;当采用体积分数为80%的甲醇-水溶液等度洗脱时,苍术素出峰时间为10min左右，时间较合理，此时色谱峰的峰形较好,基线平稳，因此最终优化的色谱条件如下：进样体积:20μ

L;流动相:水(A)-甲醇(B)溶液,其中泵A（水）的流速为0.2ml/min、泵B（甲醇）的流速为0.8ml/min。

1.3高效液相色谱法（HPLC）的原理

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

1.4北苍术中挥发油的提取

称取500.8g北苍术，将其放入5000ml圆底烧瓶内，并加水至圆底烧瓶

1/2处，然后将其放置于DW-2型调温电热器内，在圆底烧瓶口装上挥发油提取器，接着在提取器口上套上回流冷凝管，接上水，打开电源，开始加热。加热两个小时左右开始沸腾，等待提取器中挥发油的出现，并提取1ml左右的挥发油。

1.5标准曲线的绘制

首先称取苍术素纯品5.0mg，放入1号15ml容量瓶中，接着取10ml乙酸乙酯放入1号瓶内，然后用超声波加速溶解10min，取出待冷却后，加甲醇至刻度线，摇匀。接着用移液管从1号容量瓶中移取12.5ml的溶液置于2号容量瓶

中，再向2号中加甲醇至刻度线，依次类推，完成3号、4号、5号、6号容量瓶溶液的配制，则六瓶溶液浓度依次递减。然后按浓度由小到大的顺序依次进样，即分别精密吸取0.0000172mol/L，0.0000343mol/L，

0.0000687mol/L，0.000137mol/L，0.000275mol/L，0.000549mol/L各20μL，每个浓度进样两次，测两次峰面积，最后平均同一浓度下的两次峰面积，结果见表一。接着以平均后的峰面积为纵坐标，苍术素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图（1），得方程方程y=6397683284.6435x+78880.1304，相关系数

R2=0.9942，R=0.9971。

1.6苍术素的含量测定

将溶于甲醇的挥发油（挥发油为0.0497g）转移至15ml的容量瓶中，加甲醇至刻度线，可再加2ml乙酸乙酯助溶。摇匀，然后用移液管从中取出1ml，移至小试剂瓶中，再加1ml甲醇稀释，摇匀，用微型滤膜过滤。接着取20μL该溶液，注入高效液相色谱仪中，在10min处开始出峰，见图（2）。重复操作一次，最后平均两个峰面积。将该峰面积代入标准曲线方程，最后计算挥发油中苍术素的含量，即北苍术挥发油中苍术素的含量为6.28%。

2.结果

2.1标准曲线

表2-1