血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定-检验科生化室作业书

血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定
1.实验原理
VITROSLDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

本法测LDH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。

将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。

乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。

用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。

测定方式：速率法
波长：340nm
测试时间和温度：37℃约5分钟
反应过程：
LDH
丙酮酸+NADH+H+———————→乳酸+NAD
2.标本：
2.1病人准备：无特殊。

2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。

2.3标本采集与处理：
Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。

而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。

由于VitrosLDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对
比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。

样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3.标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。

4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。

6.试验材料：
6.1测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros7%BSA稀释液。

强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.1试剂组成：干片成分：
反应成份是NADH和丙酮酸钠。

其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。

干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.2试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。

因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。

去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。

说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。

6.1.3试剂稳定性与贮存
未开封的干片盒：存储在-18℃或低于该范围。

说明：为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时，未开封的试剂盒在2～8℃（36～46oF）下最多可以保存4周。

在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。

当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。

出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。

如果储藏正确，VitrosLDH干片可保质到包装盒上标明的有效期限。

参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。

6.1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。

6.1.5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。

6.2校准品：用Vitros化学定标物Kit3。

血清、血浆都用相同的定标液，不过各自的SAVs值不同。

有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

6.3质控品：使用Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别的AST测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低，还会因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源，稀释温度和复溶活化时间的不同而发生变化；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。

有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

7.仪器：美国强生厂家VITROS250全自动干式生化分析仪。

具体测试程序请参阅操作手册的介绍。

8.操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。

具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP。

具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。

何时进行定标：——在维护和保养时更换了仪器的重要部件。

——质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。

——管理条例上指定的时间，在美国，CLIA 要求至少每6个月定标一次。

9.检验结果的判断与分析
10.质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。

有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。

在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11.计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。

12.参考值范围
国际单位(U/L)
成人313-618
此参考范围是测试189位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义：乳酸脱氢酶是一种存在于人体细胞液中的酶，它在NADH的作用下催化丙酮酸还原成乳酸。

肿瘤，低氧性呼吸性心脏病，心肌梗塞，溶血性贫血，巨幼细胞性贫血，肝硬化，肾阻塞，外伤，肌肉受损，肌肉营养不良，休克和低血压都可造成LDH增高。

LDH在心肌梗塞发作后12小时内开始升高，2-5天后恢复正常。

14.操作性能
14.1线性范围：血清：100-2150U/L。

14.2精密度：在Vitros250生化仪上用质控液来测精密度。

结果反映了该方法的精密度。

当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。

*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。

**室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结
果进行统计计算。

14.3方法学比较：
用Vitros700仪器和Buhl方法参考方法分别测试相同血清样品，对比结果显示Vitros方法的准确度良好。

用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=1.01X+9.5（r=0.999，N=80，范围103-2085U/L）。

14.4灵敏度：本试剂的检测下限为血清为100U/L。

14.5特异性：经测试，以下物质对VitrosLDH干片法均无干扰（偏差<44U/L）。

扑热息痛5mg/Dl、乙酰乙酸30mg/dL、维生素C3mg/dL、胆红素30mg/dL、乙醇300mg/dL、龙胆酸0.5mg/dL、谷胱甘肽1mg/dL 等等。

14.6病人结果可报告范围：血清100-2150U/L。

15.超出范围结果处理：本法线性上限为血清2150U/L。

如果样品中LDH浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：用7%BSA稀释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中LDH的活性；如果样品中LDH的活性仍然超出系统的线性范围，加大稀释倍数，重新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。

16.病危报警值的处理无。

17.方法局限性
17.1本法线性上限为血清2150U/L。

如果样品中LDH浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：用7%BSA稀释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中LDH的活性；如果样品中LDH的活性仍然超出系统的线性范围，加大稀释倍数，重
新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。

17.2干扰物质：总蛋白>12g/dl(120g/L)的多发性骨髓瘤患者样品中免疫球蛋白占很大比例，会使LDH的测试结果偏高。

因此在测试前先要将该样品用等量的生理盐水稀释，再将结果乘以2，就得到原始样品中LDH的活性。

出现KE代码的结果可能是因为样品中胆红素，总蛋白或别的成份浓度太高引起的，此时真实的LDH活性可能是正常或略有偏高。

用等量的Vitros7%BSA稀释样品，如果是总蛋白太高，可以用生理盐水稀释，再将结果乘以就得到原始样品中LDH的活性。

出现TR或DP代码，通常是LDH活性太高。

在一份样品中加入两份7%BSA，再将结果乘以3，就得到原始样品中LDH的活性。

有些药物和患者的自身状况也会影响LDH的测试值。

18.补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUSAU1000生化分析仪测定病人标本。

19.参考文献
强生厂家提供的方法学手册
20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。