铁皮石斛多糖的初级结构分析
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（１．上 海 市 功 能 性 材 料 化 学 重 点 实验 室 ， 华东理工 大学 化学与分子工程学院 ，上海 ２００２３７；
２．澳 门科技 大学 中医药学 院，澳门 ９９９０７８； ３．上海市新药设计重点实验室 ，华东理工 大学 药学院 ，上海 ２００２３７）
摘要 从新鲜 的铁皮石斛 中分离得 到一种均 一的铁皮石斛多糖 （ＳＤＯＰ），分别采用高效凝胶 色谱法 （ＧＰＣ）法
１ 实验 部分
１．１ 试 剂 与仪 器 新鲜铁皮石斛 （产地为广东珠海斗 门镇 ）由澳门科技 大学姜志宏教授鉴定 ；１一苯基一３一甲基一５一吡唑
啉 酮 （ＰＭＰ，纯 度 ＞１９９．０％，阿拉 丁试 剂 公 司 ）；三 氟 乙酸 （ＴＦＡ，分 析 纯 ，上 海 凌 峰 化 学 试 剂 有 限公 司 ）；３．（三 甲基硅 基 ）氘代 丙 酸钠 （ＴＳＰ，分 析纯 ，氘 代 度 ９８％ ，美 国 Ｓｉｇｍａ公 司 ）；Ｏｄ一淀 粉 酶 （枯 草 杆 菌 ，４０００ Ｕ／ｇ，上海 源 叶生 物 科 技 有 限公 司 ）；甘 露 糖 酶 （５００ Ｕ／ｍｇ，北 京 鸿 润 宝顺 科 技 有 限公 司 ）； ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ阴离 子交 换柱 和 Ｓｅｐｈａｃｒｙ１．４００凝 胶 柱 （瑞 典 ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ—ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢ公 司 ）；透 析袋 （截 留分 子量 ３５００，上海 源 叶生物 科技 有 限公 司 ）；其 它试 剂均 为分 析纯 ．
和 １一苯 基一３一甲基 一５．吡唑啉酮 （ＰＭＰ）柱前衍生化法测定其重均分 子量 和单糖组 成 ，并通 过红外光 谱 、甲基化
分析和核磁 共振波谱对其初级结构进行 分析．结果 表明 ，ＳＤＯＰ的重 均分子量 为 １．６６ｘ １０。，含有 甘露 糖和葡
萄糖 （摩尔 比 ４．９：１．０）．通过 甲基化 和核 磁共 振波谱分 析结果推测 ，ＳＤＯＰ是 一种 以 １，４一链 接 为主 ，存在 少
量 １，２，４一，１，３，４一，１，４，６－分支结构和端基结构 的 Ｏ一乙酰化葡甘露 聚糖 ，Ｏ一乙酰基 主要连接 在糖环 的 ２号构分析 ；核磁共振
中 图分 类 号 ０６２９
文 献 标 志码 Ａ
铁皮 石斛 （Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆ ｉｃｉｎａｌｅ Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ Ｍｉｇｏ）为 多 年 生 附 生 草 本 植 物 ，药 用 历 史 悠 久 ，被列 为 “中华九大仙草”之首 ，通常 以茎入药 ，有补肾积精 、养 胃阴、益气力之功效．现代药理学研究显示 ，铁 皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用¨ Ｊ，在抗肿瘤 、抗氧化 、降低血糖以及 白内障的治疗等 方 面药 理作 用显 著 ．中药药 效 物质 研 究 是 中药 现 代 化 的关 键 内容 ，多 糖 类 成分 是 铁 皮 石 斛 等 中 药发 挥 免疫 活性 作用 的重 要 物质基 础 ’ ．虽然 ，近些 年关 于铁皮 石 斛多 糖 的报道 很 多 ，但 主要集 中在 粗 多糖 的活 性研 究 和单糖 组 成分 析 Ｊ，对 铁 皮石 斛 多 糖 的结 构 研 究 还 不够 深 入 ．目前 ，已经 发现 铁 皮 石斛 多 糖 主要 由甘露 糖 和葡 萄糖 组成 ’ ，并 含 有 丰富 的 Ｏ一乙酰基 ．
收稿 日期 ：２０１７—０７－１４．网络出版 日期 ：２０１８－０４—１８． 基金项 目：澳 门科技大学 中药质量研究 国家重点实验室开放课题 （批准号 ：ＭＵＳＴ—ＳＫＬ一２０１６—０６）资助． 联 系人简介 ：胡 坪 ，女 ，博 士，教授 ，博 士生导师 ，主要从事药物分析方 面的研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｕｐｉｎｇ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ＣＹＩ
本 文 以新鲜 的铁 皮 石斛 为研究 对 象 ，采 用高 效 液相 色谱 、红 外 光谱 、甲基 化分 析 和 核 磁共 振 波 谱 等方 法 对从 铁皮 石 斛 中提纯 得到 的 均一铁 皮 石斛 多 糖 （ＳＤＯＰ）的初 级结 构 及 特 征 进行 了分 析 ，为提 高 铁 皮石 斛质 量标 准 及研究 其 多糖 的构效关 系 奠定 了基 础 ．
王月荣 ，女 ，博 士，讲师 ，主要从事中药分析方面的研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｕｅｒｏｎｇ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ＣＨ
高云霄等 ：铁皮石斛 多糖 的初级 结构分析
９３５
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００型高 效 液 相 色 谱 仪 （美 国 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司 ），配 备 ＡＵｔｅｃｈ ３３００型 蒸 发 光 散 射 检 测 器 （ＥＬＳＤ，上海埃 纹斯 科 贸有 限公 司 ）；ＥＬＥＯＳ Ｓｙｓｔｅｍ凝 胶色 谱仪 （ＧＰＣ，美 国 Ｗｙａｔｔ公 司 ），配备 十八 角 度激 光检测 器 （Ｌｓ）；ＲＥ．５２Ｃ型旋 转 蒸发 仪 （巩义 市 英 峪予 华 仪 器 有 限公 司 ）；Ｎｉｃｏｌｅｔ ３８０型 智 能傅 里 叶变 换红外 光谱 仪 （美 国 Ｔｈｅｒｍｏ公 司 ）；Ｓｈｏｄｅｘ ＯＨｐａｋ ＳＢ一８０２．５ ＨＱ色 谱柱 （日本 昭和公 司 ，８．０ ｍｍＸ ３００ ｍｍ）；ＴＳＫ Ｇ一４０００ＰＷ ｘ『ｌ凝 胶 色谱柱 （日本 ＴＯＳＯＨ 公 司 ，７．５ ｍｉｎＸ３００ ｍｍ）；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ￣ＯＤＳ一３色谱 柱 （４．６ ｍｉｎＸ２５０ ｍｍ，５ ｐ，ｍ）和 Ｇｃ Ｍｓ．ＱＰ ２０１０ Ｐｌｕｓ气相色谱一质谱 联用仪 （ＧＣ—Ｍｓ）（日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公 司 ）；Ｉｎｔｅｒ Ｃａｐ５ＭＳ／Ｓｉｌ色谱 柱 （３０ ｍｘ０．２５ ｍｍｘ０．２５ ｍ，日本 ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ公 司 ）；４００ ＭＲ型核磁 共振 波谱 仪 （美 国 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司 ）． １．２ 实验 过程 １．２．１ ＳＤＯＰ的制备 参 考 文献 ［１３，１４］方法 进行 实验 ．称 取 新鲜 的铁皮 石斛 药材 约 １００ ｇ，切 成小 段 ， 用石油醚 回流脱脂 ，药渣用 １ Ｌ去离子水于 ８０℃提取 ２ ｈ，倾 出上层清液 ，药渣反复提取 ３次 ，合并上 层 清液 ，减 压浓缩 ．向浸 膏 中加 入无 水 乙醇 至 乙醇体 积 分数 达 ５０％，冷 藏过 夜 ，收集 沉 淀 ，冷 冻 干燥 ， 得铁 皮石 斛粗 多糖 （ＤＯＰ）．
Ｖ０１＿３９ ２０１８年 ５月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳ１Ｔ［ＥＳ
Ｎｏ．５
９３４～９４０
ｄｏｉ：１０．７５０３／ｅｉｃｕ２０１７０４６４
铁 皮 石 斛 多糖 的初 级 结构 分 析
高云霄 ，胡 小龙 ，王 月荣 ，姜志宏 ，章 弘扬 ， 张 敏 ，胡 坪
２．澳 门科技 大学 中医药学 院，澳门 ９９９０７８； ３．上海市新药设计重点实验室 ，华东理工 大学 药学院 ，上海 ２００２３７）
摘要 从新鲜 的铁皮石斛 中分离得 到一种均 一的铁皮石斛多糖 （ＳＤＯＰ），分别采用高效凝胶 色谱法 （ＧＰＣ）法
１ 实验 部分
１．１ 试 剂 与仪 器 新鲜铁皮石斛 （产地为广东珠海斗 门镇 ）由澳门科技 大学姜志宏教授鉴定 ；１一苯基一３一甲基一５一吡唑
啉 酮 （ＰＭＰ，纯 度 ＞１９９．０％，阿拉 丁试 剂 公 司 ）；三 氟 乙酸 （ＴＦＡ，分 析 纯 ，上 海 凌 峰 化 学 试 剂 有 限公 司 ）；３．（三 甲基硅 基 ）氘代 丙 酸钠 （ＴＳＰ，分 析纯 ，氘 代 度 ９８％ ，美 国 Ｓｉｇｍａ公 司 ）；Ｏｄ一淀 粉 酶 （枯 草 杆 菌 ，４０００ Ｕ／ｇ，上海 源 叶生 物 科 技 有 限公 司 ）；甘 露 糖 酶 （５００ Ｕ／ｍｇ，北 京 鸿 润 宝顺 科 技 有 限公 司 ）； ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ阴离 子交 换柱 和 Ｓｅｐｈａｃｒｙ１．４００凝 胶 柱 （瑞 典 ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ—ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢ公 司 ）；透 析袋 （截 留分 子量 ３５００，上海 源 叶生物 科技 有 限公 司 ）；其 它试 剂均 为分 析纯 ．
和 １一苯 基一３一甲基 一５．吡唑啉酮 （ＰＭＰ）柱前衍生化法测定其重均分 子量 和单糖组 成 ，并通 过红外光 谱 、甲基化
分析和核磁 共振波谱对其初级结构进行 分析．结果 表明 ，ＳＤＯＰ的重 均分子量 为 １．６６ｘ １０。，含有 甘露 糖和葡
萄糖 （摩尔 比 ４．９：１．０）．通过 甲基化 和核 磁共 振波谱分 析结果推测 ，ＳＤＯＰ是 一种 以 １，４一链 接 为主 ，存在 少
量 １，２，４一，１，３，４一，１，４，６－分支结构和端基结构 的 Ｏ一乙酰化葡甘露 聚糖 ，Ｏ一乙酰基 主要连接 在糖环 的 ２号构分析 ；核磁共振
中 图分 类 号 ０６２９
文 献 标 志码 Ａ
铁皮 石斛 （Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆ ｉｃｉｎａｌｅ Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ Ｍｉｇｏ）为 多 年 生 附 生 草 本 植 物 ，药 用 历 史 悠 久 ，被列 为 “中华九大仙草”之首 ，通常 以茎入药 ，有补肾积精 、养 胃阴、益气力之功效．现代药理学研究显示 ，铁 皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用¨ Ｊ，在抗肿瘤 、抗氧化 、降低血糖以及 白内障的治疗等 方 面药 理作 用显 著 ．中药药 效 物质 研 究 是 中药 现 代 化 的关 键 内容 ，多 糖 类 成分 是 铁 皮 石 斛 等 中 药发 挥 免疫 活性 作用 的重 要 物质基 础 ’ ．虽然 ，近些 年关 于铁皮 石 斛多 糖 的报道 很 多 ，但 主要集 中在 粗 多糖 的活 性研 究 和单糖 组 成分 析 Ｊ，对 铁 皮石 斛 多 糖 的结 构 研 究 还 不够 深 入 ．目前 ，已经 发现 铁 皮 石斛 多 糖 主要 由甘露 糖 和葡 萄糖 组成 ’ ，并 含 有 丰富 的 Ｏ一乙酰基 ．
收稿 日期 ：２０１７—０７－１４．网络出版 日期 ：２０１８－０４—１８． 基金项 目：澳 门科技大学 中药质量研究 国家重点实验室开放课题 （批准号 ：ＭＵＳＴ—ＳＫＬ一２０１６—０６）资助． 联 系人简介 ：胡 坪 ，女 ，博 士，教授 ，博 士生导师 ，主要从事药物分析方 面的研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｕｐｉｎｇ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ＣＹＩ
本 文 以新鲜 的铁 皮 石斛 为研究 对 象 ，采 用高 效 液相 色谱 、红 外 光谱 、甲基 化分 析 和 核 磁共 振 波 谱 等方 法 对从 铁皮 石 斛 中提纯 得到 的 均一铁 皮 石斛 多 糖 （ＳＤＯＰ）的初 级结 构 及 特 征 进行 了分 析 ，为提 高 铁 皮石 斛质 量标 准 及研究 其 多糖 的构效关 系 奠定 了基 础 ．
王月荣 ，女 ，博 士，讲师 ，主要从事中药分析方面的研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｙｕｅｒｏｎｇ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ＣＨ
高云霄等 ：铁皮石斛 多糖 的初级 结构分析
９３５
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００型高 效 液 相 色 谱 仪 （美 国 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司 ），配 备 ＡＵｔｅｃｈ ３３００型 蒸 发 光 散 射 检 测 器 （ＥＬＳＤ，上海埃 纹斯 科 贸有 限公 司 ）；ＥＬＥＯＳ Ｓｙｓｔｅｍ凝 胶色 谱仪 （ＧＰＣ，美 国 Ｗｙａｔｔ公 司 ），配备 十八 角 度激 光检测 器 （Ｌｓ）；ＲＥ．５２Ｃ型旋 转 蒸发 仪 （巩义 市 英 峪予 华 仪 器 有 限公 司 ）；Ｎｉｃｏｌｅｔ ３８０型 智 能傅 里 叶变 换红外 光谱 仪 （美 国 Ｔｈｅｒｍｏ公 司 ）；Ｓｈｏｄｅｘ ＯＨｐａｋ ＳＢ一８０２．５ ＨＱ色 谱柱 （日本 昭和公 司 ，８．０ ｍｍＸ ３００ ｍｍ）；ＴＳＫ Ｇ一４０００ＰＷ ｘ『ｌ凝 胶 色谱柱 （日本 ＴＯＳＯＨ 公 司 ，７．５ ｍｉｎＸ３００ ｍｍ）；Ｉｎｅｒｔｓｉｌ￣ＯＤＳ一３色谱 柱 （４．６ ｍｉｎＸ２５０ ｍｍ，５ ｐ，ｍ）和 Ｇｃ Ｍｓ．ＱＰ ２０１０ Ｐｌｕｓ气相色谱一质谱 联用仪 （ＧＣ—Ｍｓ）（日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公 司 ）；Ｉｎｔｅｒ Ｃａｐ５ＭＳ／Ｓｉｌ色谱 柱 （３０ ｍｘ０．２５ ｍｍｘ０．２５ ｍ，日本 ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ公 司 ）；４００ ＭＲ型核磁 共振 波谱 仪 （美 国 Ａｇｉｌｅｎｔ公 司 ）． １．２ 实验 过程 １．２．１ ＳＤＯＰ的制备 参 考 文献 ［１３，１４］方法 进行 实验 ．称 取 新鲜 的铁皮 石斛 药材 约 １００ ｇ，切 成小 段 ， 用石油醚 回流脱脂 ，药渣用 １ Ｌ去离子水于 ８０℃提取 ２ ｈ，倾 出上层清液 ，药渣反复提取 ３次 ，合并上 层 清液 ，减 压浓缩 ．向浸 膏 中加 入无 水 乙醇 至 乙醇体 积 分数 达 ５０％，冷 藏过 夜 ，收集 沉 淀 ，冷 冻 干燥 ， 得铁 皮石 斛粗 多糖 （ＤＯＰ）．
Ｖ０１＿３９ ２０１８年 ５月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳ１Ｔ［ＥＳ
Ｎｏ．５
９３４～９４０
ｄｏｉ：１０．７５０３／ｅｉｃｕ２０１７０４６４
铁 皮 石 斛 多糖 的初 级 结构 分 析
高云霄 ，胡 小龙 ，王 月荣 ，姜志宏 ，章 弘扬 ， 张 敏 ，胡 坪