溶解性有机氮测定方法

溶解性有机氮测定方法

（1）待测滤液的制备

称取5.00g风干样准确到0.01g，置于50ml塑料瓶中，加入25ml 1mol/l的KCL溶液，加盖，以180 r/min 振荡1h，取出静置5-10min后将悬液的上部清液用干滤纸过滤，得待测滤液。（风干样少且较黑则可称取2.00-4.00g，只需保证KCL溶液浸提时水：土=5:1 即可）（2）溶解性全氮—碱性过硫酸钾氧化—紫外分光光度法

取上述待测滤液8ml于试管中，加入10mL氧化剂，在121-123度高压锅中氧化30min（或是在水浴中加热，温度升至100摄氏度保持90min）。氧化完后，小心取出，待冷却后使用紫外分光光度计，用石英比色皿测定出该溶液在220nm和275nm处的吸光度A220和A275，记录下来，同时做好空白对比。

制备氧化剂：将6g氢氧化钠和30g过硫酸钾溶于蒸馏水中并定容至1L。（注意应先将氢氧化钠制得溶液，等至室温后，与过硫酸钾混合后定容）

配制TDN标准曲线：

称取0.7214g硝酸钾溶于水，转入1L容量瓶中定容摇匀，制得浓度为100mg/L的氮标准储存液，稀释10倍至10mg/L。吸取10mg/L的硝态氮标准溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL (对应浓度分别为0 .00mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、0.12mg/L）于50ml的容量瓶中，各加入10mL氧化剂，与样品同样经高温高压氧化后定容，得氮的标准系列溶液。再分别测定标准系列溶液在220nm和275nm处的吸光度A220和A275。以A（A= A220-2A275）为纵坐标，氮浓度为横坐标绘制得标准曲线。（3）铵态氮—靛酚蓝比色法

取上述滤液4.00 ml（一般吸取土壤浸出液2-10ml）于50mL容量瓶中，用浸提剂KCL 溶液补充至10 ml，再加入苯酚溶液5.00 ml和次氯酸钠碱性溶液5.00mL，摇匀。在20 ℃左右的室温下放置1h显色后，加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm玻璃比色皿于625nm波长处进行比色，记录下吸光度。用空白实验溶液调节零点，空白需要加入与样品等量的苯酚溶液和次氯酸钠溶液及掩蔽剂。

注：掩蔽剂应在20 ℃左右的室温下放置1h显色后加入。过早加入会使得显色反应过慢，蓝色偏弱；加入过晚则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。

配制铵态氮标准曲线：

称取0.4717g烘干的硫酸铵定容至1L，制得100mg/L的铵态氮标准储存液，测定当天将储存液稀释至40倍即为铵氮标准液（2.5mg/L）。分别移取2.5mg.L-1铵态氮（NH4+-N）标

准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00于50mL容量瓶中（即分别配成0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg/L的铵态氮（NH4+-N）的标准系列溶液），各加入10.00mL氯化钾溶液，然后加入苯酚溶液5.00 ml和次氯酸钠碱性溶液5.00mL，摇匀。在20 ℃左右的室温下放置1h后，加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色皿于625nm波长处进行比色，记录吸光度。

使用试剂：

1) 1 mol/L KCL溶液：称取149.1 g氯化钾（分析纯）溶于水中，稀释至2L。

2) 苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

3) 次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸三钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g/L次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 ml溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

4) 掩蔽剂：将400g/L的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g/L的EDTA 二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10 mol/L氢氧化钠0.5mL。

（4）硝态氮—紫外分光光度法

取上述滤液4.00 ml于50 ml容量瓶，用重蒸水定容，得待测液。测定此待测液在220nm 和275nm处吸光度A220和A275。按照下式计算校正吸光度A：

A= A220 -2A275，建立A与硝态氮浓度之间的相关曲线。空白为去离子水。

绘制硝态氮标准曲线：

称取0.7214g硝酸钾配成溶液定容至1L，制得浓度为100mg/L的硝酸根标准溶液。将此液稀释20倍即为5.00mg/L硝酸盐(NO3—N)标准溶液。分别取5.00mg/L硝酸盐(NO3—N)标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL于50mL容量瓶定容摇匀，即分别配成0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.00mg/L的硝态氮（NH4+-N）的标准系列溶液。分别用石英比色皿在220nm和275nm处测定标曲吸光度。用公式：A= A220 -2A275求得校正吸光度，以此做标准曲线方程。空白为去离子水。（注:标曲根据土壤中硝态氮含量配制。）