急性肾功能衰竭动物模型制作

四种急性肾衰竭模型的制作与体会

摘要:介绍四种常用急性肾衰竭模型的操作方法、致病机制、病理改变与临床

病程。肾动脉钳闭引起的肾脏缺血再灌注以及甘油、庆大霉素、氯化汞均可致

实验动物急性肾衰竭 病理学上可见典型的急性肾小管坏死。不同模型其病因

、 病理改变与临床病程不尽相同 实际工作中可根据不同需要选用不同的模型。关键词:急性肾衰竭;急性肾小管坏死;动物模型

急性肾衰竭(a c u t e r e n a l f a i l u r e A R F)是以肾功能在数小时到几天之内急

剧变化 导致肾脏排出氮质代谢废物的能力及维持体内水、电解质稳定功能丧

失为特征的急性肾脏病变。以往国内外许多学者都曾应用动物模型对A R F的病因、发病机制及病理生理等方面进行了研究。本文将就四种常见的引起急性肾

小管坏死致 A R F模型的操作方法、 致病机制、病理改变与临床病程作一比较。1材料和方法

1．1实验动物

S D大鼠 8～9周龄 体重 190～210g;C57B L P6小鼠 体重18～20g由中山

大学医学实验动物中心提供 均为清洁级(动物合格证号:)。

1．2药物与试剂

氯化汞、 甘油、 多聚甲醛(广州化学试剂厂)庆大霉素(广东三才医药集团

有限公司)苏木素、 伊红、 无色品红(美国 S i g m a公司)乙醇、 二甲苯(广

州化学试剂厂)。

1．3实验仪器设备

普通光学显微镜(O l y m p u s B H22日本)显微镜及图像分析处理系统(德国

Z E I S S公司)

1．4方法

1．4．1缺血再灌注致A R F模型:选用大鼠(n=10)麻醉后 打开腹腔找到左肾

肾门 简单分离血管周围结缔组织 用无创伤动脉夹夹闭肾门约 45m i n后 松

开血管夹 结扎右肾并切除 缝合切口。于术后12h、 24h、 72h分别杀检3、3、 4只大鼠。

1．4．2甘油致A R F模型:可选用大鼠或小鼠 本实验选用小鼠(n=8)禁水 16 h～24h后 以甘油(50%)10m L P k g体重分别在两侧后肢肌肉注射 之后实

验动物自由进食和饮水。于注射甘油后 3d、7d分别杀检3、 5只小鼠。1．4．3庆大霉素致A R F模型:选用大鼠(n=10)每天腹腔注射庆大霉素 160 m g P k g体重 连续 7d。于注射后8d、 14d分别杀检2、 3只大鼠。

1．4．4氯化汞致A R F模型:选用大鼠(n=11)一次性腹腔注射 H g C l21

m g P k g～2m g P k g本次实验采用剂量2m g P k g(012%)。于注射后 24h、

7d分别杀检3、 4只大鼠。

1．4．5标本采集:10%水合氯醛肌注麻醉 每只大鼠从下腔静脉取全血 2m L

左右 4℃静置 6～8h7000r P m i n离心 6m i n分离血清 取约 300μ L

用以检测血清肌酐(S c r)、尿素氮(B U N)-20℃冻存。取部分肾脏新鲜组织

以4%多聚甲醛固定 石蜡包埋 切片。

1．4．6肾组织学染色和肾脏病理损害的评估:石蜡包埋组织切片2μm厚 二甲

苯脱腊和梯队酒精水化后行 H E和 P A S染色。H E染色:苏木素 8m i n流水冲洗1 m i n蒸馏水浸1m i n加伊红 5m i n流水冲洗30s烤干 透明后用中性树胶封片。P A S染色:高碘酸20m i n流水冲洗1m i n蒸馏水浸1m i n加无色品红20

m i n流水冲洗5m i n苏木素套染30s烤干 透明后用中性树胶封片。肾小管损

伤定义为小管坏死、 萎缩、 扩张、刷状缘脱落、管型形成、 炎症细胞浸润和细胞浊肿。损伤按照 0到 5分分级评分:没有损伤:0分;损伤面积