羊口疮课件.ppt

一般的实验室诊断包括：免疫电镜观察、 病理组织学观察、病毒分离培养。
血清学方法如酶联免疫吸附试验、血清中 和试验、感染组织切片技术、PCR及限制 性片段长度多态性分析等。
PCR诊断
下载NCBI网站 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/GQ 328006.1)上羊口疮病毒的免疫囊膜蛋白 基因B2L的编码序列（GU320351），利 用Oligo6.0生物软件设计引物。 按照试剂盒操作说明从接毒细胞中提取病 毒DNA，以其为模板建立50μL PCR反应 体系，扩增病毒DNA。
在羊口疮病毒中已证实可发生基因重组现 象，这常常导致基因组片段特别是末端区 域的换位。
羊口疮病毒通过细胞传代能导致基因组的 重排，特别是基因组片段的删除。这些删 除区域是非必需区域，可以用外源基因取 代进行重组疫苗的研制和基因治疗。
流行病学
易感动物
主要感染小反刍兽如山羊和绵羊，偶尔感 染其它野生反刍动物如鹿、麝牛等，人也 可被感染。 临床上以羔羊和母羊最为易感。 波尔山羊更易发生持续感染并表现症状较 为严重。
取5µLPCR产物于 10g/L琼脂糖凝胶电泳 观察。
ELISA检测方法
采用具有良好反应性和免疫原性的羊口疮 B2L重组蛋白作为包被抗原，建立羊口疮 ELISA检测方法。 该方法具有敏感性高、特异性强、重复性 好以及低成本和操作简易等特点，适用于 大规模血清流行病学调查。
Βιβλιοθήκη Baidu
间接ELISA检测所需试剂： 兔抗羊IgG-HRP 显色液TMB 牛血清白蛋白（BSA）
间接ELISA方法具体操作程序： （1） 将重组B2L蛋白按比例稀释成一定浓度， 100µL/孔加入到酶标板中，4℃包被过夜。 （2） 取出酶标板甩出包被液，PBST冲洗3遍， 每次2mins，最后倒置纱布上拍干。 （3） 用3% 明胶或5% BSA进行封闭，湿盒中 37℃孵育1～2h，然后同（2）洗板3遍拍干。 （4） 用1% BSA稀释血清，100µL/孔加入到酶 标板中，37℃放置1～2h后，取出甩干洗板3遍 拍干。 （5） 用PBST稀释成工作浓度的兔抗羊IgGHRP，100µL/孔，37℃放置1h后，取出甩干洗 板，4~5遍拍干。
病原学
羊口疮病毒是双链DNA病毒，属于痘病毒 科副痘病毒属。 羊口疮病毒为该属的代表种。
基因组学
羊口疮病毒为线性双链DNA病毒，基因组 大约135Kbp，拥有共价闭合末端发卡结 构。 通过进化树分析，发现在所有痘病毒和副 痘病毒，基因组中心区域为高度保守的基 因，这些基因对病毒的复制和病毒形成是 必需的，而末端区域的基因主要决定病毒 的毒力和致病性。
感染羊口疮的临床变化
抗病毒机制和免疫逃避
在自然感染羊口疮病毒的人和绵羊，已证 实同时存在体液免疫和细胞免疫。最近研 究表明体液免疫和细胞免疫均在羊口疮病 毒清除中具有重要作用。
羊口疮病毒可通过CD95途径介导抗原递 呈细胞凋亡。
羊口疮病毒能够阻止病毒感染细胞发生凋 亡，这是副痘病毒产生免疫逃避的一种独 特的机制，在其它病毒上尚未发现同源基 因。
流行特点
呈地方性流行性； 易发生持续感染或引起并发症； 羊口疮病毒可感染人； 尚未发现病毒在人和人之间传播。
临床症状
羊口疮在临床上主要表现局部增生性病变， 常在山羊和绵羊的口唇皮肤、口腔粘膜以 及鼻孔周围出现菜花状增生。 在口腔及其它非典型部位出现的病变，将 使诊断变得困难，如绵羊口腔的溃疡性病 变易与口蹄疫相混淆。 羊口疮与山羊痘病毒感染有着相似的临床 症状，易于造成误诊。
同其它痘病毒一样，羊口疮病毒也编码一 系列抗炎性因子从而产生免疫逃避。
诊断方法
通过典型的临床症状就可以确诊动物的羊 口疮，对于人感染羊口疮也是如此，尤其 是与感染动物有接触史的病例。 近年来随着病毒宿主范围的不断扩大，其 临床症状与其它水泡性疾病如羊口蹄疫、 羊痘、蓝舌病以及葡萄球菌引起的皮肤炎 和嗜皮病非常相似，常常由于出现误诊。 所以对该病进行实验室诊断显得非常必要。
6） 显色：每孔加入100µL TMB，室温显 色5mins。 （7） 每孔加入50µL 2M H2SO4，终止显 色反应。
（8） 酶标仪上立即读取酶标板OD450nm 值，按下列公式计算P/N值：P/N值=阳性 对照孔OD450nm均值/阴性对照OD450nm 均值。
羊口疮
——兰州兽医研究所
闫丰超 李慧霞 王帅 叶强 唐华 魏蔚 李艳丽
小组成员
大纲
导言 病原学 基因组学 流行病学 临床症状 抗病毒机制和免疫逃避 诊断方法
导言
羊口疮，又叫羊接触传染性脓疱性皮 炎，是一种遍布世界的病毒性疾病，主要 感染小反刍兽如山羊和绵羊，偶尔感染其 它野生反刍动物如鹿。
羊口疮病毒具有免疫逃避能力，可在 有活力的免疫反应中复制，所以该病毒具 有重复感染同一宿主的能力。