金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达及其临床意义

金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达及其临床意义【摘要】目的探讨肺鳞癌、腺癌中金属硫蛋白在肺癌细胞系中的表达。

方法运用sp免疫组化方法检测检测肺癌细胞系的表达定位。

结果 mt在肺癌细胞系a549、be1表达，均为胞浆表达。

在hbe为胞核表达。

结论 mt在非小细胞肺癌转移起促进作用。

【关键词】金属硫蛋白；肺癌；转移
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.120 文章编号：1004-7484（2012）-08-2512-01
expression and clinical significance of metallothionein in lung cancer cell lines
liu jun，zhang yun-biao，zhang ting，shen xiao-xia，zhang jun-yi，jiang gui-yang
1.liaoning province shenyang city sujiatun district hospital pathology department，liaoning shenyang 110101；
2.liaoning province shenyang hunnan new district hospital，liaoning shenyang 110068；
3.department of ophthalmology the first affiliated hospital china medical university，liaoning shenyang 110001；
4.the fourth affiliated hospital of liaoning university of traditional chinese medicine department of hemodialysis，liaoning shenyang 110101；
5.department of pathology，chifeng university school of
medicine in inner mongolia，affiliated hospital pathology department，inner mongolia chifeng 024000；
6.department of pathology，china medical university，liaoning shenyang 110001
【abstract】objective lung squamous cell carcinoma，adenocarcinoma of metallothionein expression in lung cancer cell lines.methods sp immunohistochemical methods to detect expression and localization of the detection of lung cancer cell lines.results mt results in lung cancer cell line a549，be1 expression are cytoplasm.in hbe expression for the nucleus.conclusion mt role in non-small cell lung cancer and metastasis.
【key words】 metallothionein protein；lung cancer；transfer
金属硫蛋白（metallothionein，mt）参与许多病理过程，包括金属离子稳态和解毒、保护氧化损伤。

在人体多种肿瘤，如乳腺癌、肾癌等表达增加，但在某些肿瘤，如肝细胞癌（hcc）表达下调，结论不尽一致。

mt在肺癌细胞系中的表达目前研究报道较少。

我们应用免疫组化方法来检测mt在肺癌细胞系的表达，并简单探讨其发生机制。

1 材料与方法
1.1 标本来源肺癌细胞系，取自中国医科大学病理教研室，
三种分别为：肺腺癌细胞系a549、hbe、肺巨细胞癌细胞系be1。

1.2 试剂实验试剂兔抗人mt单克隆抗体（fl-61，sc-11377）购自（三塔公司），s-p试剂盒（kit-9701）购自（福州迈新生物技术开发有限公司）。

1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养肺腺癌细胞系a549用daam培养基培养、hbe、be1细胞系用含10%的胎牛血清的1640培养基培养后，于含
0.5%co2的37°c孵箱内培养，0.25%胰蛋白酶消化、传代。

1.3.2 肺癌细胞系的免疫化学染色（s-p）法选择生长状态好的细胞一瓶，待细胞贴壁生长且伸开伪足，形态恢复正常时倒掉培养基，制作细胞爬片。

加入固定液固定20分钟。

加入0.2%的triton-100打孔，37°c孵育15分，加入a液，室温孵育20分，加入b液，室温孵育20分，加稀释的一抗（1：100），4℃冰箱过夜，加入c液，室温孵育15分，pbs洗5′×3遍。

加入d液，室温孵育15分，pbs洗5′×3遍。

dab显色（棕褐色反应产物代表抗原定位），苏木素复染，中性树胶封片。

用pbs代替一抗作为阴性对照。

2 结果
mt在肺癌细胞系hbe、a549、be1的表达。

采用sp法进行免疫组织化学染色检测mt在肺癌细胞系a549、be1表达，均为胞浆表达。

在hbe为胞核表达。

3 讨论
mt是由位于染色体16q13上的10个功能性基因（mt—la、1b、le、lf、ig、lh、ix、2a、3a、4a）的异构体基因家族编码[1]。

mt分子可与自由基结合，具有多种重要的生理功能[2]，抗氧化损伤，防止机体衰老功能增强机体应激能力。

本次实验，我们首次用免疫细胞化学方法检测了hbe胞核表达，a549和be1细胞系，同样有癌细胞的胞浆表达。

从实验结果可得到，mt在非小细胞肺癌转移起促进作用，并且这种作用是在细胞浆上发挥的。

mt的表达可能是非小细胞肺癌发生的早期事件，在非小细胞肺癌发生演变中起促进作用。

参考文献
[1] west a k，stallings r，hildebrand c e，et al.human metallothionein genes：structure of the functional locus at 16q13.genomics，1990，8（3）：513-518.
[2] miles a t，hawksworth g m，beattie j h，et
a1.induction，regulation，degradation and biological significance of mammalian metallothionein[j].crit rev biochem mol biol，2000，35（1）：35-70.。