疟原虫显微镜镜检技术
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用于检查疟原虫的血涂片有两种： 一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜。 一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。 薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上
面。
血膜的制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查 时可不考虑取血时机。
在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握 适宜的取血时机。间日疟在寒热发作时，外周 血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环 状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易 辩认，为诊断的有利时机；36~48小时，可检 出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时 内取血，初发患者退热后常查不到原虫。
血膜的制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针 采血，一人一针，避免血传疾病）。先用 75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻 动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干 后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右 手持消毒针迅速刺入耳垂下端1~2毫米， 不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向 挤压出血。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、 临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依 据流行病学史和临床表现即可做出诊断， 而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。 及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类， 以能针对虫种选择正确的治疗方案。
血片镜检
血片制作
血膜的制作（取血操作）
取血量及涂片法（涂片操作）
薄血膜 取洁净的载玻片2张，1张 平置在桌上，以左手拇指，食指夹 持载玻片两端（手指切勿接触玻片 表面），用另一张边缘平滑（最好 为磨口边缘）的载玻片做推片，用 推片一端边缘的中点从取血部分取 约1微升的血量（相当于1/4火柴 头大小），使血滴与平置的载玻片 接 触 ， 并 形 成 25~30 度 夹 角 ， 待 血液向两侧扩展约2厘米长度时， 均匀而迅速地轻轻向左推出（约 2.5厘米长），整个血膜成舌形。
通常是将厚、薄血膜涂在 一张载片上。方法是将载 片分为6等分，第1、2格 备贴标签及编号用；厚血 膜涂在第3格中央，薄血 膜涂在第4格前缘至第6格 中部。作为标本的血片每 张玻片涂厚、薄血膜各1 个；门诊和发热病人血片 每片1人，涂2个厚血膜1 个薄血膜，以防血膜脱落 而影响检查。
标准的疟疾厚薄血膜片位置
血片的染色
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用 2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本 上染色30分钟左右；或用中性蒸馏水1毫升， 加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标 本上，染色10~20分钟，然后用清水轻轻将 片上的染液冲洗干净，（切勿先倒掉染液 再用水冲洗）晾干镜检。
瑞氏染液的染色方法：
血片的染色
二、瑞式染液的配制
将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充 分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇 洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置 室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。
此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液 效果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应 急血片用。
先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几 滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水 滴。在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色 1～2分钟。然后再加5～8滴蒸馏水于薄血 膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后， 把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10 分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。
疟原虫显微镜镜检技术
东安县疾病预防控制中心 周永玲 2011.07.10
疟疾简介
疟疾是一种古老的传染病,俗 称“冷热病”、“打摆子”、 “发疟子”、“脾寒”、 “瘴气”等，是由疟原虫寄 生于人体引起的传染性寄生 虫病。
寄生人体的四种疟原虫
间日疟原虫 [Plasmodium vivax，P.v] 三日疟原虫[P．Malariae,P.m] 恶性疟原虫 [P．Falciparum,P.f] 卵形疟原虫[P．Ovale,P.o]
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉0.5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨， 边加边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫 升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水 甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至25毫升甲醇洗 净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置 于55~60℃水浴中2小时，或室温内3~5天，每 天用力摇动5分钟，即成原液。吉氏染液是目前较 优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久 不变。
血片的染色
吉氏染液血片染色方法 （推荐使用此方法）
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在 固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴 水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后 进行染色。
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒 入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫 升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟（如染 液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻 轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片 标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。
正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜 用推 片的一角， 从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头 小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向 外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚 血膜，血膜厚薄均匀， 过厚易于脱落，过薄达 不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
我国主要是间日疟常见，恶性疟次之， 三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。
镜检疟原虫方法简述
19世纪后期，显wk.baidu.com镜的出现使 人们不断发现了传染病的病因。 1880年法国军医拉韦朗第一次 见到并描述了人红细胞内的疟 原虫，至此才解开了困扰人们 数千年的疟疾的病因之谜。
镜检疟原虫方法简述
目前用于疟疾诊断的实验室检测包括 病原学检查、免疫学检测和分子生物 学检测三类。镜检疟原虫由于具有操 作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种等 优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已 愈近一个世纪，仍是目前最常用的方 法，也是我国疟疾诊断标准确定的实 验室检查方法（WS259-2006）。
面。
血膜的制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查 时可不考虑取血时机。
在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握 适宜的取血时机。间日疟在寒热发作时，外周 血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环 状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易 辩认，为诊断的有利时机；36~48小时，可检 出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时 内取血，初发患者退热后常查不到原虫。
血膜的制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针 采血，一人一针，避免血传疾病）。先用 75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻 动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干 后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右 手持消毒针迅速刺入耳垂下端1~2毫米， 不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向 挤压出血。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、 临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依 据流行病学史和临床表现即可做出诊断， 而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。 及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类， 以能针对虫种选择正确的治疗方案。
血片镜检
血片制作
血膜的制作（取血操作）
取血量及涂片法（涂片操作）
薄血膜 取洁净的载玻片2张，1张 平置在桌上，以左手拇指，食指夹 持载玻片两端（手指切勿接触玻片 表面），用另一张边缘平滑（最好 为磨口边缘）的载玻片做推片，用 推片一端边缘的中点从取血部分取 约1微升的血量（相当于1/4火柴 头大小），使血滴与平置的载玻片 接 触 ， 并 形 成 25~30 度 夹 角 ， 待 血液向两侧扩展约2厘米长度时， 均匀而迅速地轻轻向左推出（约 2.5厘米长），整个血膜成舌形。
通常是将厚、薄血膜涂在 一张载片上。方法是将载 片分为6等分，第1、2格 备贴标签及编号用；厚血 膜涂在第3格中央，薄血 膜涂在第4格前缘至第6格 中部。作为标本的血片每 张玻片涂厚、薄血膜各1 个；门诊和发热病人血片 每片1人，涂2个厚血膜1 个薄血膜，以防血膜脱落 而影响检查。
标准的疟疾厚薄血膜片位置
血片的染色
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用 2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本 上染色30分钟左右；或用中性蒸馏水1毫升， 加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标 本上，染色10~20分钟，然后用清水轻轻将 片上的染液冲洗干净，（切勿先倒掉染液 再用水冲洗）晾干镜检。
瑞氏染液的染色方法：
血片的染色
二、瑞式染液的配制
将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充 分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇 洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置 室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。
此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液 效果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应 急血片用。
先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几 滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水 滴。在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色 1～2分钟。然后再加5～8滴蒸馏水于薄血 膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后， 把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10 分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。
疟原虫显微镜镜检技术
东安县疾病预防控制中心 周永玲 2011.07.10
疟疾简介
疟疾是一种古老的传染病,俗 称“冷热病”、“打摆子”、 “发疟子”、“脾寒”、 “瘴气”等，是由疟原虫寄 生于人体引起的传染性寄生 虫病。
寄生人体的四种疟原虫
间日疟原虫 [Plasmodium vivax，P.v] 三日疟原虫[P．Malariae,P.m] 恶性疟原虫 [P．Falciparum,P.f] 卵形疟原虫[P．Ovale,P.o]
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉0.5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨， 边加边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫 升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水 甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至25毫升甲醇洗 净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置 于55~60℃水浴中2小时，或室温内3~5天，每 天用力摇动5分钟，即成原液。吉氏染液是目前较 优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久 不变。
血片的染色
吉氏染液血片染色方法 （推荐使用此方法）
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在 固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴 水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后 进行染色。
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒 入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫 升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟（如染 液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻 轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片 标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。
正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜 用推 片的一角， 从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头 小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向 外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚 血膜，血膜厚薄均匀， 过厚易于脱落，过薄达 不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
我国主要是间日疟常见，恶性疟次之， 三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。
镜检疟原虫方法简述
19世纪后期，显wk.baidu.com镜的出现使 人们不断发现了传染病的病因。 1880年法国军医拉韦朗第一次 见到并描述了人红细胞内的疟 原虫，至此才解开了困扰人们 数千年的疟疾的病因之谜。
镜检疟原虫方法简述
目前用于疟疾诊断的实验室检测包括 病原学检查、免疫学检测和分子生物 学检测三类。镜检疟原虫由于具有操 作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种等 优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已 愈近一个世纪，仍是目前最常用的方 法，也是我国疟疾诊断标准确定的实 验室检查方法（WS259-2006）。