花青素的测定

方法1:原花色素的测定方法（分光光度法）

本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子与松树皮提取物）中原花色素含量的测定。

1. 方法提要

原花色素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体，属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁，单体，双体等）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。

2. 仪器

分光光度计。

3. 试剂

所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。

（2）提纯的原花色素或儿茶素。

（3）4%香草醛甲醇液。

（4）标准使用液：将提纯的原花色素溶于蒸馏水，制成1mg/mL储备液，将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。

如无提纯的原花色素，可用儿茶素代替，配制方法同上。

4. 测定步骤

（1）样品中原花色素的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲醇提取，40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后定容。

冰冻干燥的固体原花色素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶）制成原花色素液。

原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。

（2）样品测定：用锡箔将试管（14mm×20mm）包裹严，仅留管口用于加样。向管内加入试样0.5mL，再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合，然后加入1.5mL浓盐酸，彻底混匀，室温下显色15min。也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm处比色。

可按以上操作步骤制得标准曲线（即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55）。

5. 结果计算

计算原花色素量的公式，

原花色素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V

式中V——试样稀释体积（倍数）。

6. 注释

（1）本方法的检测范围为（5~500）×10-3mg/0.5mL样液。精密度与准确度大于1×10-3mg。（2）反应试管应用清洁剂浸泡24h，彻底洗涤干净。

（3）进行比色时，用水作空白。

（4）500nm处的OD值应控制在3以下。

（5）试样中原花色素含量较高时，应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。

（6）显色液应避光放置。

方法2:保健食品中原花青素含量的测定方法

1、原理

原花青素易溶于含羟基的溶剂如甲醇等，本方法是将样品中的前花青素，用甲醇提取，加入盐酸家温水解后将其转化为深红色氰定（C15H10O6·HCL）后进行高压液向色谱测定。

2、试剂：

2.1二氯甲烷分析纯

2.2甲醇色谱纯

2.3异丙醇分析纯

2.4甲酸分析纯

2.5盐酸分析纯

3、检验方法

3.1样品称取约500mg油溶性样品于100ml锥形瓶中，加入5.0ml二氯甲烷，振摇使其溶解。加入45.0ml甲醇，振摇5min后过20μm滤膜。取5.0ml滤液于25ml容量瓶中，加入5.0ml3mol/L盐酸，振摇并用异丙醇定容至刻度。立即过5μm滤膜，取出一部分置于试管中，塞紧瓶塞并在100±5℃烘箱中放置45min进行水解，取出后放置至室温后进行液相色谱分析。

3.2标准除称取25.0mg标准品于100ml锥形瓶中外，其余步骤均同样品。

3.3定量方法标准曲线外标法定性定量分析。

4、色谱分析条件

4.1流动相：水：甲醇：异丙醇：甲酸＝73：13：6：8

4.2检测波长：525nm

4.3色谱柱：岛津Shim－Pak CLC ODS 15cm×6mm

4.4柱温：35℃

4.5流速：1ml/min