实验九碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶-副本

临床意义
淀粉酶可通过肾小球滤过。流行性胰腺炎， 特别是急性胰腺炎时，血和尿中的AMY显 著增高。急性胰腺炎发病后8~12h血清 AMY开始升高，12~24h达高峰，2~5d下 降至正常。如超过500U有意义，达350U 时应怀疑有此病。
尿中AMY约于发病后12~24小时开始升高， 下降也比血清AMY慢，因此在急性胰腺炎 后期测定尿AMY更有价值。
注意事项
酶活性在400U以下时，与底物的水解量成 线性。如测定管吸光度小于空白管吸光度 一半时，应加大血清稀释倍数或减少稀释 血清加入量，测定结果再乘以稀释倍数。
草 AM酸Y盐活、性拘有橼抑酸制盐作、用E，D肝TA素-N无a抑2及制氟作化用钠。对 唾液含高浓度淀粉酶应防止带入。 淀粉产品不同，其空白吸光度可有明显差
碘-淀粉比色法测定血清淀粉酶
原理
血清（或血浆）中α-淀粉酶催化淀粉分子 中α-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽 糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精。在底 物过量的条件下，反应后加入碘液与未被 水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的 深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而 推算出淀粉酶的活力单位。
试剂 操作步骤 计算 参考值
异，一般空白吸光度应在0.40以上。
注意事项
缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物，表示 缓冲淀粉溶液受污染或变质，不能再用， 应重新配制。
本法适用于其他体液淀粉酶的测定。尿液 先作20倍稀释后测定。
评价
本法线形范围<400U，批内CV 3.1%~9.0%， 批间CV 12.4%~15.1%，与对-硝基苯麦芽庚糖 苷法相比较，在酶活性低时相关性好，但酶活 性较高时相关性差，因此，该法不能认为是淀 粉酶测定的理想方法。但由于该法简单、易行， 不需特殊设备、试剂低廉，仍然是我国目前应 用较为广泛的方法。
试剂
1、0.4mg/ml底物缓冲液：4℃冰箱保存6 个月。
2、0.1mol/L碘贮备液：4℃避光保存6个 月。
0.01mol/L碘应用液的配制: 将碘贮备液: 蒸馏水=1︰9稀释，现用现配4℃避光保存。
操作步骤
混匀，660nm波长，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。 *注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度， 将 (空白OD-测定OD)控制在0.05~0.15Hale Waihona Puke Baidu之间
计算
1、单位定义： 100ml血清（浆）中的 AMS，在37℃与底物作用15分钟，水解 5mg淀粉为1个单位。
2、公式：
样本最佳取样浓度摸索
根据不同动物血清及组织之间的差异，最好 是在批量实验之前做个预试以确定最佳取样 浓度。 例1：取大鼠血清用生理盐水稀释成不同浓 度（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、 128倍、256倍），取样0.1ml进行检测