酶制剂的理化指标分析

黏度法： 黏度法： 根据酶能够降低一定浓度的标准底物的黏度的能力来确定酶 的活性。
三、酶活测定方法及其影响因素
影响酶促反应的因素
温度 pH值 值 酶浓度 底物 激活剂与抑制剂 作用时间
三、酶活测定方法及其影响因素
120 100 80 活力% E1 60 40 E2 20 0
30 37 45 50 55 60 65 70 75 80
温度℃
温度对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
120 100 80 E1 活力 活力% 60 40 20 0
3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7
E2
pH值
pH值对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
纤维素酶活力测定方法
1、纤维素酶 纤维素酶是催化水解纤维素，生成葡萄糖的酶的总称。 2、纤维素酶组分 β—1，4—内切葡聚糖酶 β—1，4—外切葡聚糖酶 β—葡萄糖甘酶
并催化底物化学反应的部位 。 结合部位 催化部位
一、酶的基础知识
酶的催化特性
1）催化效率高 2）高度的专一性 3）反应条件温和
二、酶制剂技术指标
理化指标：
酶活力、pH值、容重、水分、感观、粒度、酶活保存率
卫生指标：
铅、砷、镉、细菌总数、霉菌总数、大肠菌群、沙门氏菌、 黄曲霉毒素
三、酶活测定方法及其影响因素
三、酶活测定方法及其影响因素
3、活力测定方法 、 滤纸法：滤纸崩溃法、滤纸糖化法 CMC法：CMC粘度法、CMC糖化法（DNS法） 蓝色底物法
三、酶活测定方法及其影响因素
★DNS法测定纤维素酶 法测定纤维素酶
1、酶活定义： 、酶活定义： 在50℃，pH为4.80条件下，每分钟从浓度为5mg/mL的羧甲 基纤维素钠溶液中降解释放1µmol还原糖所需要的酶量为一 个活力单位（IU），还原糖以葡萄糖等量。
三、酶活测定方法及其影响因素
★DNS法测定纤维素酶 法测定纤维素酶
3、具体操作
3.1试剂配制（缓冲液、标准葡萄糖溶液 、底物、DNS试剂 ） 3.2 标准曲线制作 3.3 稀释酶液 3.4 预热、反应 3.6分光光度计测定 3.7计算
酶活力（IU/mL或IU/g）= (葡萄糖等量值/180/15/0.5)×n
三、酶活测定方法及其影响因素
★DNS法测定纤维素酶 法测定纤维素酶
2、原理： 、原理 在一定温度和pH条件下纤维素酶水解纤维素产生单糖和寡糖。 具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下 与DNS试剂发生显色反应，反应液颜色的强度与酶解产生还 原糖的量成正比，还原糖生成量与反应液中纤维素酶活力成 正比，通过分光比色测定反应液吸光度，可计算纤维素酶活 力。
酶的理化指标分析
主要内容:
一、酶的基础知识 二、酶制剂技术指标 三、酶活力测定方法及其影响因素 四、酶制剂的理化特性及评价方法
一、酶的基础知识
酶：酶是生物体内在一定条件下根据生命活动的需要而
合成的生物催化剂。酶的化学本质是蛋白质。
底物：酶所作用和催化的物质。 底物：
酶的活性中心：酶分子中能够直接与底物分子结合， 酶的活性中心：
酶活测定方法
分光光度法： 分光光度法： 黏度法： 黏度法： 免疫学法 凝胶扩散法
三、酶活测定方法及其影响因素
分光光度法： 分光光度法： 以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量 有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。 （DNS法测定纤维素酶、木聚糖酶、β—葡聚糖酶活力；福 林法测定蛋白酶活力；淀粉酶、植酸酶活力测定）
酶制剂的基本理化特性
酶制剂的稳定性 储存稳定性 热稳定性 酶制剂的底物针对性
四、酶制剂的理化特性及其评价方法
评价方法： 评价方法：
测定酶在一定条件下的酶活保存率 粘度下降 体外模拟实验 体内试验 代谢试验 最直接、 生产性能试验 最直接、最有说服力的方法 提取率
三、酶活测定方法及其影响因素
★DNS法测定纤维素酶 法测定纤维素酶
100 150 200 250 300 350 400
0.085
0.162
0.243
0.319
0.407
0.491
0.566
0.6
0.50.4ຫໍສະໝຸດ 0.30.20.1
0 100 150 200 250 300 350 400
四、酶制剂的理化特性及其评价方法